免疫增强剂范文第1篇

[关键词] 免疫增强剂；销售金额；构成比；DDDs排序；用药现状

[中图分类号] R73 [文献标识码] C [文章编号] 1673-7210（2012）01（b）-126-02

Analysis of immunopotentiator application in pharmacy department of our hospital from 2009 to 2010

CHEN Shiling WANG Juanjuan ZHANG Qinyong

Department of Pharmacy, the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical College Cancer Hospital of Yunnan Province, Kunming 650118, China

[Abstract] Objective To analyze the sales amounts, drug constituent ratio and DDDs sort of immunopotentiator, understand the present situation of drug application, in order to provide reference for clinical treatment. Methods The sales amounts, drug constituent ratio and DDDs sort of immunopotentiator in pharmacy department of our hospital from 2009 to 2010 were compared and analyzed. Results The sales amounts of immunopotentiator drug in our hospital increased year by year, the drug constituent ratio and DDDs sort of thymosin preparation were taken the first place. DDDs sort had no significant change from 2009 to 2010. Conclusion The sales amounts of immunopotentiator increases steadily in our hospital, thymosin preparation is taken the first place, which is the main subject of immunopotentiator drug application. The application of immunopotentiator in our hospital is reasonable basically.

[Key words] Immunopotentiator; Sales amounts; Constituent ratio; DDDs sort; Current situation of drug application

如今肿瘤的发生已经成为一种慢性常见病、多发病，肿瘤的治疗任重道远。在肿瘤综合治疗中，生物治疗越来越受到重视，并逐渐成为最令人瞩目的焦点。生物化疗是生物治疗和化学治疗联合应用于恶性肿瘤治疗的全新综合治疗模式，是根据肿瘤的病理类型、临床分期、发生部位和发展趋势，结合患者的全身情况和分子生物学行为，有计划地联合应用化疗药物和生物制剂进行治疗，以取得最好的治疗效果，达到最大限度地改善患者生存质量的目的[1]。免疫增强剂是一类重要的生物化疗药物，在肿瘤的治疗过程中使用免疫增强剂，可以增强机体的免疫能力，保护化疗和放疗过程中受损的骨髓细胞和免疫细胞[2]。近年来临床医生对免疫增强剂的应用正日益增加，因此，笔者对我院2009~2010年免疫增强剂用药金额、用药构成比以及DDDs排序进行比较分析，以期为临床治疗和合理经济用药提供参考。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

通过对医院信息系统的查询，统计2009~2010年我院住院药房免疫增强剂用药情况，对免疫增强剂用药金额、用药构成比以及DDDs排序进行比较分析。

1.2 方法

根据《新编药物学》（第16版）[3]免疫增强剂的定义，免疫增强剂能增强机体的非特异和特异性免疫功能，使低下的免疫功能恢复正常；或能增强与之合用的抗原的免疫原性，加速诱导免疫应答反应；或能替代体内缺乏的免疫活性物质发挥作用等。免疫增强剂在我院的代表药物有甘露聚糖肽、核糖核酸、胸腺肽等，统计分析我院住院药房2009~2010年免疫增强剂用药金额、用药构成比以及DDDs排序，所有数据均经过Excel 2003表格处理。限定日剂量（DDD）是指某一特定药物为治疗主要适应证设定的用于成人的平均日剂量。本研究大部分药品的DDD值主要参考《新编药物学》（第16版）[3]确定；《新编药物学》（第16版）中未收载的药品根据药品说明书规定的日剂量来确定。药品的用药频度（DDDs）=该药的总消耗量/DDD值，DDDs具有量的相加性，其值越大，说明此类药物的应用频次越多。本研究中同一剂型同一规格不同产家的同种药品合并计算DDDs值；同一类别的不同种药品分别计算DDDs值后相加确定DDDs值。日均费用（DDC）=药品的总消耗金额/该药的DDDs[4]。金额与用药频度的排序比=药品金额序数/DDDs序数，此比值反映药品金额与用药人数是否同步，比值接近1时，表示同步情况良好，有较好的社会效益和经济效益；比值高于1时，说明该药品在同类中相对价格低廉，社会效益好于经济效益；比值低于1，说明该药市场份额大于用药频度，经济效益大于社会效益。

2 结果

2009~2010年，我院免疫增强剂的用药金额呈上升趋势，从用药构成比及DDDs排序来看，胸腺肽制剂居第1位，是免疫增强剂用药主体，且2010年用药金额增长比例较大，构成比已占免疫增强剂的3/4左右，其用药金额排序与DDDs排序基本一致；总体可见，我院免疫增强剂DDC偏高，提示免疫增强剂的价格偏高；2009~2010年我院免疫增强剂各药物金额及DDDs排序无明显变化，排序比均为1左右，提示我院免疫增强剂用药基本合理。见表1。

3 讨论

我院使用的免疫增强剂有甘露聚糖肽、核糖核酸、胸腺肽、重组人白介素-2、干扰素、胎盘多肽、薄芝糖肽等。甘露聚糖肽能增强巨噬细胞功能，提高脾网状内皮系统的吞噬功能，促进骨髓中造血干细胞功能，增加外周血细胞。胸腺肽能连续诱导T细胞分化发育的各个阶段，增强成熟T细胞对抗原或其他刺激的反应，促进T细胞产生各种细胞因子，并增加白细胞介素-2受体表达。胸腺肽用于肿瘤患者可增加T细胞数，改善临床症状[5]。重组人白介素-2可促进和维持T细胞的增殖与分化，诱导及增强NK细胞活力和白细胞介素-2活性而获得对自身肿瘤具有细胞毒样活力的LAK细胞，诱导及增强杀伤性T细胞、单核细胞、巨噬细胞的活力，增强B淋巴细胞的增殖及抗体分泌，诱导干扰素产生等。干扰素具有抗病毒、抗肿瘤活性和免疫调节作用，其与细胞表面的特异性干扰素受体结合后，启动一系列细胞内反应，抑制细胞增殖，增强NK细胞、巨噬细胞吞噬功能和T细胞的杀伤作用等[6]。胎盘多肽能增强细胞的免疫功能，对T淋巴细胞有激活作用，抑制机体的过氧化反应，抑制化学致突变作用，促进骨髓造血细胞的生存、增殖、分化及提高生物活性，用于细胞免疫功能降低或失调引起的疾病及各种原因所致的白细胞减少症。薄芝糖肽具有调节机体免疫功能的作用，对机体非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫等均有促进作用，具有抗氧化和清除氧自由基作用。此外，薄芝糖肽还具有促进核酸、蛋白质生物合成等作用[7-8]。

由本研究结果可以看出，2010年我院免疫增强剂用药金额增长比例很大，除去患者增加的因素外，也表明医生对生物化疗的认识更加深入，生物治疗越来越受到重视，其中，用药金额的增长以胸腺肽制剂为主，其用药金额占免疫增强剂的近3/4；不论销售金额还是DDDs排序，胸腺肽制剂均占第1位，是免疫增强剂用药主体，提示在免疫增强剂应用中由于胸腺肽制剂种类多、效果肯定、不良反应少且不良反应大多容易控制，使其在肿瘤治疗中应用广泛。我院免疫增强剂销售金额及DDDs排序基本一致，表明我院免疫增强剂用药基本合理。由表1可见，免疫增强剂DDC值较高，提示药品的价格偏高，限制了药品的广泛应用。提示应努力开发价格低廉的免疫增强剂，使免疫增强剂使用更加经济合理，使生物治疗在肿瘤治疗中的作用发挥得更好、更广泛。

[参考文献]

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免疫增强剂范文第2篇

关键词：消化吸收；增强免疫力；饲料添加剂

中图分类号：S828 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170632090

目前养殖业普遍存在饲料利用率不高，营养成分消化不完全，保管不善导致饲料吸湿霉变或生虫等问题，这些问题的存在不仅大大增加了饲养成本，也造成了资源浪费。提高饲料的利用率，可以减少饲养成本和风险，增加饲养效益，还能避免资源浪费，对社会和环境有积极影响。动物发病是养殖中最为常见的现象之一，由此带来大量的额外成本，增加了养殖风险。提高动物免疫力，降低动物的发病率，有利于减少饲养风险和养殖成本，有利于减少抗生素等化学药物的使用，对减少药物残留，避免“超级细菌”等现象的发生，更能保障食品安全，减少食品安全事故的发生，对环境保护也有着积极的意义。

1 有效促进消化吸收和增强免疫力的饲料添加剂的优势

本饲料添加剂各项成分配比科学，是一种有效促进消化吸收和增强免疫力的饲料添加剂，该添加剂的中草药，营养价值高，具有提高免疫力，促进消化的功能，安全、营养、毒副作用小，微生态制剂能改有效改善肠道菌群，调节猪肠道健康，复合消化酶有利于饲料的消化和利用；该添加剂能有效增强猪的消化能力，促进饲料的消化吸收，提高饲料的利用率，减少饲养成本，制备方法简单易操作，产品质量稳定；还能增强猪的免疫力，降低猪发病率，降低饲养成本，增加饲养效益，避免了使用化学合成添加剂（如抗生素等）。有利于促进饲料和畜牧行业健康有序的发展，对人类健康有着积极的作用，属于安全绿色的饲料添加剂。

2 有效促进消化吸收和增强免疫力的饲料添加剂的内容

该添加剂旨在解决现有技术中饲料消化吸收率低和猪免疫力弱的缺陷，提供一种有效促进消化吸收和增强免疫力的饲料添加剂，能有效提高猪对饲料的利用率和免疫力，有利于提高饲料的利用价值，降低猪的发病率，促进猪的健康生长。

相关技术方案如下所述：

一种有效促进消化吸收和增强免疫力的饲料添加剂由以下成分组成：陈皮粉、微生态制剂、复合消化酶、山楂粉、生姜粉、甘草粉、维生素C、精氨酸和载体。

优选配比方案：

每100份由以下原料按重量份数组成：陈皮粉8～15份、微生态制剂1～4份、复合消化酶2～5份、山楂粉6～9份、生姜粉2～4份、甘草粉2～5粉、维生素C 0.1～0.6份、精氨酸0.04～0.08份，其余为载体，载体按质量比为脱脂米糠、稻壳粉和沸石粉=2-6：1-4：1，脱脂米糠、稻壳粉和沸石粉分别预先粉碎并过60目筛。

更优选方案：

每100份由以下原料按重量份数组成：陈皮粉10份、微生态制剂3份、复合消化酶4份、山楂粉8份、生姜粉3份、甘草粉4粉、维生素C 0.3份、精氨酸0.06份，其余为载体，载体按质量比为脱脂米糠、稻壳粉和沸石粉=4：2：1，脱脂米糠、稻壳粉和沸石粉分别预先粉碎并过60目筛。

所述陈皮粉的制备方法为：

将精选的新鲜橘皮置于鼓风干燥箱中，进行干燥，干燥温度45～60℃，使其含水量小于15%，即得到陈皮；

将陈皮切碎，放入锅中温炒，时间为0.5～1.5h，在温炒的加入食盐和蟹壳粉混合物，加入量为陈皮质量的0.2-0.6%；然后粉碎过60目筛即得陈皮粉；所述食盐和蟹壳粉混合为：食盐和蟹壳粉按质量比1：2-6混匀。

所述微生态制剂的制备方法：将混合菌以14%～22%（V/W）的接种量接种到发酵培养基中，在34～36℃下培养60～72h，制得发酵物，将发酵物在30～55℃下烘干，粉碎过60目筛，即得微生态制剂。

所述混合菌由枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和啤酒酵母菌种子液按体积比3-5：2-4：1-2：1-2组成，其中枯草芽孢杆菌浓度为2.3×109cfu/ml、双歧杆菌浓度为1.8×109cfu/ml、保加利亚乳杆菌浓度为2.5×109cfu/ml和啤酒酵母菌浓度为1.6×108cfu/ml；

所述发酵培养基由甘蔗渣40～60份、黄芪10～20份、脱脂米糠30～40份、葡萄糖5～10份、蛋白胨4～8份、氯化钠0.2～0.6份按重量份数组成；将甘蔗渣、黄芪和脱脂米糠分别粉碎，过30目筛，然后将上述成分按比例混合均匀，在121℃下灭菌20～25min，冷却至室温，喷洒总质量1/6～1/5的无菌水。

所述复合消化酶为胃蛋白酶、α-葡糖苷酶、w维素酶按质量比1-2：1：3-5组成。

所述山楂粉的制备方法：将山楂粉碎过40目筛；

所述生姜粉的制备方法：将生姜粉碎过30目筛；

所述甘草粉的制备方法：将甘草粉碎过40目筛；

该饲料添加剂的制备方法如下：

a将陈皮粉、山楂粉、生姜粉和甘草粉按比例混匀；

b将微生态制剂和复合消化酶与脱脂米糠混匀；

c将维生素C和精氨酸与稻壳粉和沸石粉混匀；

d将a、b和c中所得的混合物混匀即可。

该添加剂在每吨猪饲料中的添加量为1200～1800g。

免疫增强剂范文第3篇

关键词 分子佐剂；CpG　DNA；研究进展；应用

中图分类号 R392.11 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）24-0269-01

作为一种非特异性免疫增强剂，当佐剂与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。同时，既减少了抗原的使用量，增加了机体抗体的产生量，又可以减轻免疫耐受。

近年来，佐剂发展较快，多种新型佐剂不断涌现，黏膜佐剂、纳米佐剂、天然佐剂及分子佐剂等是目前研究的热点。用分子佐剂来提高基因疫苗的免疫效率是基因疫苗研究的关键，很多分子佐剂如CpG　DNA、细胞因子、共刺激分子、趋化因子、C3d、免疫刺激调节分子等成为当前研究的热点。

1 CpG　DNA的研究进展

CpG　DNA是一种DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能，它包括ODN（oligodeoxynucl-eotides，含CpG基序）和细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA，其碱基普遍遵循5-嘌呤-嘌呤-嘧啶-嘧啶-3的排列规律[1]。研究表明，这种排列可激活多种免疫效应细胞，又称为免疫刺激DNA序列，其在细菌和病毒基因组中出现的频率至少是脊椎动物基因组的20倍，使入侵的外来细菌和病毒能够轻易地被脊椎动物的免疫系统所识别，从而激活相应的免疫应答机制。

CpG　DNA的免疫激活机制可通过模式识别理论来解释，该理论是2000年由美国免疫学家Janeway　et　al提出的，病原相关分子模式（PAMP）是指天然免疫针对主要靶分子信号，模式识别受体（PRR）是指相对应的识别受体。天然免疫中TLR家族成员识别PAMP后，从而在抗感染天然免疫中发挥重要作用。根据这一理论，CpG基序就是一种在进化中高度保守的PAMP，它可以被宿主天然免疫细胞上的PRR识别（主要是Toll样受体9，TLR-9）。TLR9受体能特异性识别CpG　DNA[2]，两者之间的特异性非常强，1个碱基的改变就能导致刺激活性的消失，均将使其免疫刺激作用丧失或降低，因此不能被TLR9受体有效识别。

CpG　DNA几乎对所有蛋白质抗原和灭活疫苗都具有佐剂活性，具有以下作用：①活化NK细胞和巨噬细胞，能使其细胞毒活性明显增强；②通过诱导Th1型细胞免疫因子IFN-γ、IL-12和IL-18的分泌，增强抗原特异性的Th1型免疫反应；③诱导IFN-α/β和IFN-γ等多种细胞因子的分泌，促进机体抗病毒反应；④调节免疫反应，提高抗体水平。

田兴山等研究发现，无论何种浓度的CpG　DNA，均能使仔鸡的淋巴细胞IL-2诱生活性、特异性抗体水平和淋巴细胞增殖反应显著提高，由此表明鸡对常规疫苗的免疫应答能力可以通过CpG　DNA而明显增强。Lopez　et　al[3]以马为试验对象，证明CpG　ODN　2007对马流感病毒疫苗有增强作用。另外，Moldoveanu　et　al[4]研究发现　CpG　佐剂能够增强黏膜免疫的效果；Shi　et　al[5]报道，CpG　ODN可用于鼻喷免疫的疫苗佐剂。

当前，对抗原—载体—CpG　DNA佐剂整体系统的药剂学研究是CpG　DNA　研究的热点领域，包括CpG基序和类型的选择及载体系统的研究等，为制备低毒、高效、长效的新型免疫佐剂开辟新途径，这将使CpG佐剂的应用具有更多选择性和可控性。另外，一些研究表明，如果能使CpG　DNA与抗原在物理空间上更加接近，则CpG　DNA的佐剂活性可以提升10倍乃至上百倍。因此，研究人员开展了大量提升佐剂活性方法的研究，包括使用矿物油混合，或者微粒、纳米粒包裹或吸附，或者蛋白质等大分子与CpG　DNA直接以化学键连接等方法。

2 CpG　DNA的应用概况

2.1 CpG　DNA在肿瘤治疗中的应用

Carpentier　et　al[6]研究发现，通过活化巨噬细胞，CpG　ODN能够有效地对抗肿瘤的恶性进展，其中CpG　ODN　1826对肿瘤的对抗效果在治疗多种肿瘤模型的试验中已经得到证实[7]，如小鼠的直肠癌、黑色素瘤等均能降低成瘤率，并延长荷瘤小鼠的生存时间。目前，发现Thl/Th2型免疫反应向Th2型反应偏倚的病例。CpG-ODN具有诱导Th1型反应的作用，有利于机体抗肿瘤反应。

2.2 CpG　DNA在提高机体免疫力中的应用

田兴山等[8]研究发现人工合成的CpG　ODN作为猪的常规疫苗（猪伪狂犬病病毒活疫苗）的佐剂，可显著提高疫苗特异性抗体水平。张玲华等[9]在初生仔猪上直接将CpG　ODN作为免疫增强剂，结果能使仔猪的细胞免疫应答得到增强。CpG　ODN能在体内显著提高仔猪的淋巴细胞白介素-2诱生活性、淋巴细胞增殖、血清中IFN-ν和IL-12水平，能增强机体天然免疫反应。这意味着CpG　ODN作为畜禽高效免疫增强剂有着广阔的应用前景。

2.3 CpG　DNA在防治呼吸道疾病中的应用

目前，大量研究表明CpG　ODN能够预防和治疗哮喘。Jain　et　al[10]发现在患慢性哮喘小鼠中，经鼻滴入CpG　ODN和抗原的混合物可以逆转气道炎症和气道高反应性。Fedulov　et　al[11]也发现，CpG　ODN可以降低患哮喘小鼠的后代对哮喘的易感性。

2.4 CpG　DNA在抗寄生虫方面的应用

CpG　DNA通过刺激免疫细胞分泌IL-2和IFN-ν而产生的免疫保护作用，可作为免疫治疗药物治疗和预防利什曼原虫病。Chiaramonte　et　al[12]报道，在用曼氏血吸虫虫卵诱导的鼠肺肉芽肿模型的研究中，CpG　DNA减轻了小鼠的病理反应。

3 参考文献

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免疫增强剂范文第4篇

【摘要】

目的 研究人工合成的cpg odn对乙肝表面抗原的免疫增强效应，评价cpg odn的佐剂效应。方法 将不同剂量特定的cpg odn与乙肝表面抗原联合免疫小鼠，用elisa检测小鼠乙肝表面抗体的滴度。结果 cpg odn联合乙肝表面抗原免疫小鼠，在短期检测中，高剂量组能较快的达到检测阈，各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性(p<0.05)，在长期检测中，各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性(p<0.05)，检测值随cpg剂量的增高而增大。结论 cpg odn增强乙肝表面抗原的免疫反应短期和长期都具有剂量效应。

【关键词】 cpg odn 乙肝表面抗原 免疫佐剂 体液免疫

abstract:objective to investigate the effects of immunological enhancement of hbsag with synthetic cpg oligodeoxynucleotides,evaluate the adjuvant effect of cpg odn. methods mice were vaccinated with cpg oligodeoxynucledtides and hbsag at different doses,and then titers of hbsab in the blood serums of mice were detected with elisa. results cpg odn and hbsag immunize the balb/c mice,the highdose group could be detected quickly in shot term,the levels of antibodies in groups which use different doses of cpg odn and hbsag were different in statics(p<0.05),in long term the levels of antibodies in groups which use different doses of cpg odn and hbsag were different in statics(p<0.05),the levels of antibodies were corresponded with the levels of cpg odn (p<0.05).conclusion the immunological effect of hbsag was enhanced with cpg odn as adjuvant in short and long terms.

key words:cpg odn; hbsag; immunoadjuvant; humoral immunity

cpg基序是一种具有非特异性免疫刺激能力的dna序列，为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列。WwW.133229.cOmcpg odn (unmethylated cpg motifbased oligodeoxynucleotide)是人工合成的含未甲基化cpg基序的寡核苷酸序列。cpg odn可刺激人类和多种动物产生自然免疫和获得性免疫，主要通过tlr9信号系统活化免疫系统，最终促使多种免疫细胞的成熟分化和增殖，包括b淋巴细胞、t淋巴细胞、nk细胞、单核细胞、巨噬细胞和dc细胞。cpg odn能快速活化t、b细胞，诱导th1型免疫反应并能促进抗原递呈细胞的增生和成熟[1]。现阶段我国对乙型肝炎的预防主要是通过注射乙型肝炎疫苗，但接种免疫过程中和接种免疫后会出现免疫较弱和不免疫现象[2,3]。所以，选择一种安全有效的免疫佐剂是增强免疫效果的有效途径。本文通过测定不同时间段的小鼠注射cpg odn和乙肝表面抗原后的抗体滴度，评价cpg odn作为免疫佐剂增强乙肝疫苗的免疫效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 bal b/c小鼠，雄性，6周龄，体质量18～22 g，spf级，购自中山大学实验动物中心，许可证号：scxk(粤)20040011。

1.1.2 试剂 血源性乙肝表面抗原购自上海前尘生物，cpg odn 由本实验室保存。

1.2 动物分组及免疫方案

1.2.1 动物分组 50只bal b/c小鼠根据随机分配表，随机平均分成5组：第1组为hbsag和高剂量cpgodn联合免疫组，第2组为hbsag和中剂量cpgodn联合免疫组，第3组hbsag和低剂量cpgodn联合免疫组，第4组为hbsag单用组，第5组为生理盐水对照组。各组饲养条件相同。

1.2.2 动物免疫 分别于第0、2、4周免疫bal b/c小鼠，每次免疫剂量相同。第1组：尾静脉注射含2 μg hbsag 和100 μg cpgodn生理盐水溶液，100 μl/只;第2组：尾静脉注射含2 μg hbsag 和1 μg cpgodn生理盐水溶液，100 μl/只;第3组：尾静脉注射含2 μg hbsag 和10 ng cpgodn生理盐水溶液，100 μl/只;第4组：尾静脉注射含2 μg hbsag生理盐水溶液，100 μl/只;第5组：100 μl生理盐水/只。

1.3 乙肝表面抗原检测

1.3.1 血清采集 断尾后玻璃毛细管采血，室温自然凝固，常温离心后取上清，-20 ℃保存。

1.3.2 抗原检测 96孔板用碳酸氢钠缓冲液(15 mmol/lna2co3，355 mmol/lnahco3，ph 9.6)适当稀释的乙肝表面抗原包被，4 ℃过夜孵育。用含tween20的pbs(0.1 mol/lpbs,0.1% tween20)洗涤3次，每次间隔3 min，每孔加入100 μl经pbs(0.1 mol/l pbs,1% bsa)适当稀释的待测血清， 37 ℃孵育90 min。 pbs洗涤5次， 每孔加入100 μl

1 000倍稀释的hrp标记的乙肝表面抗原，37℃孵育40 min。pbs洗涤5次，每孔加入100 μl tmb底物(含0.1 mg/ml 3’3’5’5’四甲基联苯胺的磷酸盐柠檬酸缓冲液，ph 5.4，用前加5 ml 30% h2o2 10 ml)，37 ℃孵育1 h。每孔加入100 μl h2so2(0.2 mol/l)终止显色反应。biorad 680 测定a450/630读数。

1.4 统计学分析

应用spss统计软件，采用重复测量方差分析对数据进行分析，p<0.05为差异有显著性。

2 结 果

2.1 小鼠免疫后7～28 d外周血中乙肝表面抗体的平均滴度变化

乙肝表面抗原单用组的抗体在7～17 d时间段内检测不到，乙肝表面抗原和低剂量cpg odn联合免疫的抗体在第14天检测到，乙肝表面抗原和中剂量cpg odn联合免疫组的抗体在第10天检测到，乙肝表面抗原和高剂量cpg odn联合免疫的抗体出现时间较早，在第7天即可检测到。在第14～28天的各个时间点上，乙肝表面抗原和高剂量cpg odn联合免疫组的抗体滴度均显著高于乙肝表面抗原和中剂量cpg odn联合免疫组、乙肝表面抗原和低剂量cpg odn联合免疫组(p<0.05);在第14、17、21天时间点上，乙肝表面抗原和中剂量cpg odn联合免疫组、乙肝表面抗原和低剂量cpg odn联合免疫组之间差异无显著性(p<0.05)，在第24、28天时间点上，两组差异有显著性 (p<0.05);在第21、24、28天时间点上，乙肝表面抗原和中剂量cpg odn联合免疫组、乙肝表面抗原和低剂量cpg odn联合免疫组的抗体滴度均显著高于乙肝表面抗原单用组(p<0.05)。见图1和表1。表1 免疫7～28 d hbsab滴度对数转换数据

2.2 小鼠免疫后3～8周外周血中乙肝表面抗体的平均滴度变化

在第3～8周时间内，第4周乙肝表面抗原和高剂量cpg odn联合免疫组、疫苗和中剂量cpg odn联合免疫组之间的抗体滴度差异有显著性(p<0.05);在其他时间点上，乙肝表面抗原和高剂量cpg odn联合免疫组的抗体滴度与其他组别差异均有非常显著性(p<0.01)，并持续快速升高。乙肝表面抗原和中剂量cpg odn联合免疫组、乙肝表面抗原和低剂量cpg odn联合免疫组的抗体滴度从第3周之后均逐渐升高，在第3、4、5、6周时间点上，只有第4周两组之间差异有显著性 (p<0.05)，其他时间点差异均无显著性 (p<0.05);到第7、8周时两组差异有显著性(p<0.05)。对于乙肝表面抗原单用组，虽然抗体滴度有逐渐升高的趋势，但却一直处于比较低的水平，除了第4周与乙肝表面抗原和低剂量cpg odn联合免疫组之间的抗体滴度差异无显著性外(p>0.05)，其他时间点上与其他各组差异均有显著性(p<0.05)。见图2和表2。表2 免疫3～8周hbsab滴度对数转换数据

3 讨 论

对于cpg odn的免疫刺激作用人们已经进行了大量的研究。在应用方面，人们较为关注其安全、有效的佐剂特性。因为cpg odn能同时增强抗原特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其对细胞免疫应答具有更突出的增强作用[4]。本实验发现,应用cpg odn作为乙肝表面抗原的佐剂，能较早较快地刺激机体产生乙肝表面抗体，cpg odn作为佐剂使用增强乙肝表面抗原的免疫效应，cpg odn的使用量在实验的剂量范围内具有一定的剂量效应关系，高剂量的cpg odn的使用对增强乙肝表面抗原的免疫效应效果更早更好。由实验数据观察来看，单纯的乙肝表面抗原抗原性是较弱的，搭配佐剂使用，才能有效地提高乙肝表面抗原的免疫原性[5]，提高乙肝表面抗原的免疫效果。实验剂量范围内，增强乙肝疫苗抗原抗体反应是显著的，并且动物也无逆毛、腹泻、发热或其他中毒现象等任何异常，表明cpg odn的使用是安全可靠的。

cpg odn的作用是通过有toll样受体家族的细胞，主要是tlr9受体识别cpg的基序，从而通过若干信号传递途径活化转录因子，启动相关细胞因子的基因转录[6]。本实验所用的cpg odn是将60 bp磷酸二脂修饰的odn与puc18载体体外连接构建的重组质粒puc18odns，更真实地模拟了天然的包含cpg基序的非甲基化的odn。在免疫过程中，cpg odn以模拟细菌感染的方式激活了细胞经由tlr9通道的固有免疫[6]，由于cpg odn仅仅是一段dna序列，在激活免疫的同时不具有感染性，小鼠未发生任何炎性反应[7,8]。同时，cpg odn激活了体内的免疫细胞，调动了免疫系统，使乙肝疫苗能够较早较快的产生免疫反应[7,8]。由于cpg odn的免疫刺激作用，小鼠的机体可以较长时间的处于免疫活化状态，免疫细胞免疫活性高，乙肝表面抗体得以长期高水平的经由b细胞分泌[7,8]。在有的实验中，大量的细菌dna产生抗双链dna的自身抗体，加重小鼠的自身免疫性疾病;在本实验中使用cpg odn，乙肝表面抗体产生早，滴度高，持续久，并且安全可靠。在应用cpg odn作为乙肝疫苗佐剂的临床试验中，首次和第2次免疫后抗体水平甚至可以提高13～45倍[9];同时，由于cpg对cd8+t细胞刺激作用，诱导的ctl细胞在细胞免疫作用杀伤肿瘤以及治疗胞内感染也具有很好的应用前景[10]。但是对长期性观察的缺失，还不能够全面反映cpg odn的作用效果，长期效应的机制也未被揭开。

本研究结果表明，本实验室制备的cpg odn作为乙肝表面抗原的佐剂能较早较快地促进乙肝表面抗原的抗原抗体反应，并且安全可靠。在长期效应上，cpg odn作为佐剂对维持乙肝表面抗体的有效滴度具有长期效应。

【参考文献】

[1] yamamoto m,sato s,mori k,et al. cutting edge: a novel toll/il1 receptor domaincontaining adapter that preferentially activates the ifnbeta promoter in the tolllike receptor signaling[j].j immunol,2002,169:6668-6672.

[2] 罗妖星，李建基，张吉凯，等.广东省1997～2002年新生儿乙型肝炎疫苗接种率及其影响因素分析[j].中国计划免疫,2006,12(2):100-102.

[3] 冯春颜,汪宇婴,赵详胜.乙肝疫苗接种后无弱应答分析[j].热带医学杂志,2005,3: 405-406.

[4] davis h l. use of cpg dna for enhancing specific immune responses[j]. curr top microbiol immunol,2000,247:171-183.

[5] moldoveanu z,lovehoman l,huang w q,et al. cpg dna,a novel immune enhancer for systemic and mucosal immunization with influenza virus[j].vaccine,1998,16(11/12):1216-1224.

[6] krieg a m. the role of cpg motifs in innate immunity[j]. curr opin immunol,2000,12:35-45.

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[8] klinman d m. cpg dna as a vaccine adjuant[j]. expert rev vaccine,2003,2:305-315.

免疫增强剂范文第5篇

1材料和方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物昆明种小鼠24只，由本校实验动物室提供。

1.1.2主要试剂弗氏完全佐剂，为sigma公司生产。

1.2实验方法

1.2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响昆明种小鼠24只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，8只/组，以5倍稀释鸡卵黄为抗原。免疫方法及程序见表1。

表1卵黄抗原免疫程序

组别注射物第1天第4天第10天佐剂组佐剂(ml)0.2抗原(ml)0.20.2非佐剂组抗原(ml)0.20.2空白对照组生理盐水(ml)0.20.20.2注：以上均为背部皮下多点注射

末次注射7 d后，将小鼠眼球取血并分离血清，用ELISA方法测定待检血清中抗卵黄抗体：鸡卵黄抗原5倍稀释包板，待检血清1∶10稀释，HRP-SPA按说明书配制。

1.2.2CFA对小鼠足跖肿胀的影响实验动物及免疫程序同表1，末次注射6 d后每只小鼠右后掌皮下注射卵黄(5倍稀释)0.02 ml/只致敏，第2天测量其足的后掌至踝关节体积(ml)，并与小鼠自身左后足体积作对照，计算足肿率，如下：

足肿率(%)=免疫后右足体积-自身左足体积自身左足体积×100%

1.2.3CFA对小鼠碳粒廓清实验的影响昆明种小鼠16只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，分为佐剂组与对照组，8只/组。佐剂组小鼠腹腔注射CFA 0.2 ml/只，对照组腹腔注射无菌生理盐水0.2 ml/只，1 w后给2组小鼠分别经尾静脉注射20%墨汁0.2 ml/只，注射后1 min与5 min于小鼠眼球采血20 μl，置于2.0 ml 0.1%碳酸钠溶液中混匀，于680 ml波长下测定A值，并按如下公式计算K值：

K=logA5-logA1[]T5-T1=[SX(]logA5/A1[]4[SX)]

1.3统计分析数据均采用SPSS统计软件进行组间t检验，方差不齐时行t′检验。

2结果

2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响佐剂组小鼠产生抗卵黄抗体水平明显高于非佐剂组。见表2。

2.2CFA对小鼠足跖肿胀率的影响佐剂组比非佐剂组的足肿率明显提高。见表3。

2.3CFA对小鼠碳粒廓清能力的影响佐剂组小鼠碳粒廓清能力明显高于非佐剂组，结果见表4。

3讨论

实验表明，弗氏完全佐剂能显著增强机体细胞免疫应答能力。足肿胀实验是体内测定细胞免疫功能的指标，佐剂组足肿率高于非佐剂组，证明佐剂提高体液应答能力的同时，也能增强细胞免疫功能。

佐剂作用机制，以往比较侧重于与抗原混合后起到油包水作用，从而增强抗原表面积，或者使抗原缓解，增强与免疫细胞接触，从而达到增强免疫应答效果的作用。本次实验并未将抗原与佐剂混合为油包水状态，而是与抗原分离，先将抗原注射给小鼠，结果小鼠特异性抗体产生能力明显高于未注射佐剂组，其机制之一可能与活化巨噬细胞有关。通过碳粒廓清实验得以证实，佐剂确能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，而巨噬细胞在免疫应答中起到递呈抗原的作用，这与佐剂提高免疫应答有密切关系。