维生素d2范文第1篇

关键词维生素D2 维生素D3 25-羟基维生素D2 25-羟基维生素D3

中图分类号：R151.41；R977.24 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2011)10-0472-03

Vitamin D supplementation and its supplements selection

ZHOU Jian-lie1*，Christopher YANG2

（1. “Vitamin D Today” Website，Shanghai，200234；

2. Department of Chemistry，University of Southern California，Los Angeles，Ca90007）

ABSTRACTLC-MS has been able to accurately distinguish and quantify serum levels of 25(OH)D2 and 25(OH)D3 over the last decade. It is found that the nutritional effects of vitamin D3 are better than those of vitamin D2. This article describes the reasons for using 25(OH)D as assessment for nutritional status of vitamin D and an evolution of quantitative determination of 25(OH)D2 and 25(OH)D3 levels，and reviews clinical research data on improvement of 25(OH)D2 and 25(OH)D3 levels in serum by supplementation of vitamin D2 and vitamin D3. Therefore，clinicians should prefer vitamin D3 supplements in order to prevent and treat vitamin D insufficiency and deficiency.

KEY WORDSvitamin D2；vitamin D3；25(OH)D2；25(OH)D3

世界各地有近10亿人维生素D不足，需要补充维生素D[1]。维生素D补充剂有两种：维生素D2和维生素D3。维生素D2（麦角钙化醇）来自植物性膳食，而维生素D3（胆钙化醇）来自动物性膳食或紫外线照射人体自身合成。随着1997年公布维生素D的参考摄入量[2]，血清25-羟基维生素（25(OH)D）水平被定义为维生素D营养状态的功能指标。近10多年来，因高效液相色谱法（HPLC法）和液相色谱-质谱法（LC-MS法）已能精确区分且定量测定维生素D2和维生素D3，故已有一些研究通过测定补充维生素D2和维生素D3后提高或维持血清25(OH)D2和25(OH)D3浓度的能力发现，维生素D3的作用优于维生素D2[3～6]。

1用25(OH)D评估维生素D营养状况的理由

近年越来越多的临床证据显示，维生素D缺乏、血清25(OH)D水平低与心脏病、高血压、糖尿病、各种癌症和自身免疫性疾病等相关[7～9]。1997年美国医学科学院膳食推荐摄入量（DRIs）制定委员会认为，以前用甲状旁腺激素（PTH）等很难肯定维生素D和健康的定量关系，且不再用抗佝偻病活性作为指标，而测量血清25(OH)D水平可以作为维生素D营养状况的客观指标[2]，理由为：1）维生素D的循环半衰期（T1/2）较短，为24 h[10]，而25(OH)D的T1/2为3周，能直接反映可利用的维生素D量；2）1,25(OH)2D的T1/2仅4 h，不能用来常规评价维生素D的营养状态[11～13]。

2定量测定25(OH)D2和25(OH)D3方法的演变

从发现维生素D到1997年美国公布维生素D参考摄入量经过了70年，量化维生素D效力的主要方法是用生物学方法笼统评估总维生素D的国际单位相当于多少摩尔当量，且至多只能做到半定量测定。首次检测25(OH)D使用的是维生素D结合蛋白法（DBP法），1985年开始采用放射免疫法（RIA法），后又改进为自动化学发光免疫分析法或酶联免疫吸附法。但DBP法和RIA法都只能评估25(OH)D的总量而笼统评估总维生素D，不能区分25(OH)D2和25(OH)D3。20世纪70年代中期起，HPLC法用于测定25(OH)D水平，能区分25(OH)D2和25(OH)D3，但因血清脂质萃取制备等步骤非常繁琐，故还不能常规临床应用[14]。近10年发展起来的LC-MS法、特别是液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS法）可以同时检测25(OH)D2和25(OH)D3，且灵敏度高、特异性强、高通量，已成为医院规范化测量25(OH)D的金标准方法，能用来评估维生素D2和维生素D3在体内的效应。

3维生素D3是维生素D缺乏的首选补充剂

2004年，Armas等[4]给予20例健康男性单次口服维生素D2或维生素D3 50 000 IU，结果发现：1）口服后第3天两组25(OH)D水平均上升，但第14天后维生素D3组的25(OH)D水平持续上升到峰值，而维生素D2组的25(OH)D水平却迅速下降到基线；2）第28天时，维生素D3组的药时曲线下面积（AUC）为204.7 ng・d/ml，远远大于维生素D2组的60.2 ng・d/ml（P＜0.002）；3）维生素D2的效力不及维生素D3的1/3。作者提醒道：医师应当知道,与维生素D3比较，维生素D2的效力明显较低、作用持续时间明显较短。

2006年，Houghton和Vieth[15]指出，维生素D2不应再被视为与维生素D3等效，因为它们提高血清25(OH)D水平的能力不同且血浆中维生素D2代谢产物与维生素D结合蛋白（DBP）所结合的量比维生素D3少、维生素D2有一个非生理代谢和半衰期较短的特性。因此，在讨论维生素D的营养作用时，重要的是要区分维生素D2和维生素D3，了解这两个不同维生素D分子的功能和它们之间的关系。即：维生素D2不应再被视为一种适用于补充剂或强化食品的营养素。

2008年Romagnoli等[6]的研究表明，不管是口服还是肌注，补充维生素D3提高的血清25(OH)D水平几乎等于补充2倍量的维生素D2所提高的25(OH)D水平。

2008年Mistretta等[1]的研究表明，维生素D2增加血清25(OH)D水平的能力低于维生素D3，且维生素D2的血浆半衰期较短，维生素D2与DBP、肝维生素D羟化酶和维生素D受体的亲和力也低于维生素D3。因此，虽然维生素D2目前仍为葡萄牙和澳大利亚等一些国家采用，但其不应再被用于补充剂或强化食品。

2011年Binkley等[16]给予64例65岁以上社区居民每日口服维生素D2或维生素D3 1 600 IU或者每月1次50 000 IU共1年，结果显示维生素D3能比维生素D2明显更有效地提高血清25(OH)D水平。

2011年Heaney等[17]对33例健康成人随机、单盲每周给予维生素D2或维生素D3 50 000 IU共12周，结果发现：1）平均25(OH)D增量面积，维生素D2组为（1 366±516）ng・d/ml，而维生素D3组为（2 136±606）ng・d/ml（P＜0.001）；2）平均25(OH)D稳态增加水平，维生素D2组为（24±10.3）ng/ml，而维生素D3组为（45±16.2）ng/ml（P＜0.001）;3）维生素D2组皮下脂肪维生素D2含量增加50 μg/kg，而维生素D3组的维生素D3含量增加104 μg/kg。即：维生素D3提高和维持血清25(OH)D浓度的能力比维生素D2强约87％，维生素D3存储维生素D的能力比维生素D2强2～3倍。这些结果与其它几项采用不同的剂量和给药方案的研究结果一致[3～6]。鉴于维生素D3的效力更大、成本更低，笔者认为，这些结果不仅可以安全地推广到日常临床实践中，而且也能指导临床医师的实际处方，即维生素D3应该是治疗维生素D缺乏首选的补充剂。

4结语

维生素D不足或缺乏十分普遍，需补充维生素D制剂来预防和治疗，但具体究竟是选用维生素D2、还是维生素D3补充剂呢？根据以上文献综述可以知道，应首选维生素D3补充剂治疗维生素D不足或缺乏。

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维生素d2范文第2篇

【关键词】 颅脑损伤；重型；凝血指标；意义

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.18.011

Observation of changes in coagulation function after severe craniocerebral injury WU Zhen-hong， DAI Jian-ming， LIN Shao-hua. The Second Ward of Department of Surgery， Guangdong Zhongshan City Dongsheng Hospital， Zhongshan 528414， China

【Abstract】 Objective To research changes in coagulation function after severe craniocerebral injury and its value for prognosis judgment. Methods There were 66 patients with severe craniocerebral injury in observation group. Their activated partial thromboplastin time （APTT）， prothrombin time （PT）， thrombin time （TT）， fibrinogen （FIB）， and D-dimmer （DD） were detected in admission （D0） and after 2 （D2）， 3 （D3）， 7 （D7） d. Another 66 patients with scalp laceration as control group received detection of coagulation function indicator at D0. Analysis and comparison were made on coagulation function indicators of the two groups at D0. Results Comparisons between the two groups showed there were statistically significant differences of APTT values between D2 and D7， PT values between D0 and D2， and FIB values between D0， D2， and D3 （P0.05）. Conclusion Coagulation abnormality is obvious in severe craniocerebral injury patients. Thus detection of related coagulation function indicator can provide referring value for judgment of severity of craniocerebral injury and its prognosis.

【Key words】 Craniocerebral injury； Severe； Coagulation indicator； Significance

随着医疗技术水平发展及科研技术条件的提高， 有越来越多的专家开始重视凝血因子在疾病的发生发展中起到的作用。研究显示， 当颅脑遭受重创时可对凝血功能产生影响， 其发生率接近40%～80%[1]。大量临床数据显示， 重型颅脑损伤患者伴有明显的凝血功能异常且维持时间较久， 这对患者的预后会造成一定的影响。因此如果能够掌握重型颅脑损伤患者凝血功能变化规律， 对临床合理有效的利用止血药具有十分重要的指导意义[2]。为了进一步明确凝血指标在重型颅脑损伤患者中的演变规律， 本院神经外科对部分患者的凝血指标检测数据和非颅脑损伤患者相比， 取得一定的研究结果。现将结果总结报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 按照随机、对照的原则将2008年8月～ 2014年8月间来本院神经外科住院治疗的66例重型颅脑损伤患者作为研究对象并列为观察组， 所有入组的患者均经过临床影像学检测（CT）确诊， 且均为单一颅脑损伤；患者年龄19～65岁， 平均年龄（30.9±13.2） 岁；致病因素：交通车祸15例， 硬物砸伤30例， 高空跌落21例；入组患者中男30例， 女36例。抽取同一时间段来神经外科就诊的66例单纯头皮裂伤患者作为对照组， 患者年龄20～70岁， 平均年龄（30.8±13.3） 岁。两组患者一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 仪器与方法 观察组患者分别在D0及D2、De、D7检测APTT、PT、TT、FIB和DD， 对照组患者D0检测凝血功能指标。对两组 D0期的凝血功能检测结果进行分析和比较。除D0外所有患者均于前1 d夜12点以后禁食禁饮， 于第2天凌晨6点抽取空腹静脉血5 ml作为标本， 加入0.109 mol/L枸橼酸钠1：9做抗凝处理。将采集的血液标本按照凝固法的原理应用北京普利生C2000-A全自动血凝仪进行标本检测， 检测APTT、PT、TT、FIB和DD， 试剂盒为配套试剂， 检测方法严格按照说明书操作。

1. 3 评定标准 弥散性血管内凝血（DIC）的评价标准以第6次全国血栓与止血会议标准为准， 凝血指标异常标准为：PT超过正常3 s， APTT超过正常10 s、FIB含量正常范围在1.5～4 g/L、TT延长为超过正常3 s。DD：用多功能全定量金标检测仪>0.2 mg/L为异常。

1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P

2 结果

两组比较， D2、D7的APTT值， D0、D2的PT值， D0、D2、D3的FIB值差异均具有统计学意义（P0.05）。见表1。

3 讨论

在正常的生理状态下， 机体的凝血系统和纤溶系统中各种因素处于相对平衡的状态， 这样保证了人体内凝血和纤溶系统之间的稳定， 防止人体自发出血或者发生血栓。当机体在各种外界因素的作用下破坏人体内凝血系统后， 之前保持的各种平衡就被打破， 造成机体易出血或者处于高凝状态[3]。重型颅脑损伤的患者其体内的凝血功能被破坏， 其主要的诱发因素可能是脑组织所含的各种组织因子[凝血因子Ⅲ、组织因子（TF）、组织血浆酶等]在大脑遭受重创后释放到组织中， 从而引起凝血功能的异常。大量的临床研究数据显示， 颅脑损伤所引起的凝血功能异常以及高凝状态， 除了由TF激活凝血系统， 与患者出现缺氧、感染、酸碱失衡等多种因素密切相关。这是因为损伤造成了血管内皮细胞的破坏， 造成人体内出现血小板聚集， 并激活了内源性凝血途径[4]。当患者发生重型颅脑损伤， 其不仅将体内的凝血系统激活， 也将体内的纤溶系统激活， 造成纤溶系统亢进。重型颅脑损伤的患者在出现凝血功能指标异常， 首先表现为体内处于高凝状态， 但是高凝状态维持时间较短， 而继发出现的纤溶亢进状态则会维持很长的一段时间， 因此对监测重型颅脑损伤患者的凝血功能变化， 有助于临床医生正确评价患者病情变化， 并对后期的治疗提供指导依据[5]。此次研究显示， 两组比较， D2、D7的APTT值， D0、D2的PT值， D0、D2、D3的FIB值差异均具有统计学意义（P0.05）。这说明重型颅脑损伤的患者会出现凝血功能异常， 出现凝血、纤溶功能交替， 提示患者有可能出现梗死或者出血的风险， 严重时可能危及患者的生命安全。

总之， 必须重视对重型颅脑损伤患者凝血指标的检测， 这样有利于及时了解病情变化并进行合理有效的处理， 预防各种不良事件的发生几率[6]。

参考文献

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维生素d2范文第3篇

关键词：维生素D；钙代谢；25.羟基维生素D；全自动生化

中图分类号：R446.112 文献标志码：A 文章编号：1008―2409（2016）04―0171―06

维生素D是人体必需的营养素，其营养状况影响着人体钙和磷的正常代谢，与人体健康密切相关，因此，准确测量维生素D水平对于多种钙代谢相关疾病的预防和治疗有重要意义。维生素D在血液中主要以25-羟基维生素D[25-（OH）D]的形式运输，是评价体内维生素D营养状况最为有效的指标。高效液相色谱法、液质联用法、放射免疫法、酶联免疫法、化学发光免疫法、电化学发光免疫法、全自动生化法等方法均可检测血清25-（OH）D浓度，并根据测定结果对人体维生素D的营养状况做出评价。笔者就常用的血清25-（OH）D浓度的检测方法和各自特点作一综述。

1维生素D概述

维生素D是人体必需的营养素，在自然状态下，日光照射或植物性食物是维生素D的重要来源。维生素D是类固醇衍生物，其家族最重要的成员是维生素D2和维生素D3。维生素D2多含于植物性食物中，它是由植物的麦角固醇经阳光照射而合成的，维生素D3可由人体皮肤和脂肪组织在7-脱氢胆固醇经过阳光照射合成，这两种形式的维生素D均无生物活性，必须在体内经过两次羟化后方能发挥生物效应。维生素D属脂溶性维生素，来自食物中的维生素D2与脂肪一起经小肠吸收，在胆汁协助下形成乳糜微粒，由淋巴管进入血液，与阳光照射合成的维生素D，一起转运入肝脏。维生素D在肝脏中经干细胞微粒体中的25-羟化酶作用下，转化为25-羟基维生素D_[25-（OH）D]，再经过肾脏中线粒体1α羟化酶系统的作用下转变为有生物活性的1，25-羟基维生素D[1，25-（OH）2D]。维生素D、25-（OH）D、1，25-（OH）：D在人体内的半衰期分别为24 h、2周和4h。维生素D在血液中主要以25-（OH）D的形式运输，其浓度最高，最稳定，而且半衰期最长，能反映食物摄入和日光照射合成的维生素D总量，因此，血清25-（OH）D浓度是评价体内维生素D营养状况最为有效的指标。通常将维生素D缺乏定义为血清25-（OH）D水平低于20ng/ml，不足为20～30ng/ml，充足为30ng/ml以上。

维持正常的维生素D水平对调节钙磷代谢至关重要。具有生物活性的1，25-（OH）2D可以促进肠道钙结合蛋白的合成，通过下述3个方面使血清钙、磷含量增高；首先，促进肠道内钙、磷的吸收和运转，增加在体内的留存；其次，提高肾小管对钙、磷离子的再吸收，使尿钙、磷排出减少；最后，当低血钙膳食中缺钙时，在甲状旁腺素（PTH）的作用下促进钙、磷的吸收，动员骨中钙、磷释出。在维生素D缺乏的情况下，食物中的钙只有10%―15%能够被吸收，磷只有60%能够被吸收。1，25-（OH）2d通过与维生素受体结合，可提高肠道对钙磷的吸收效率，使钙吸收增加至30%～40%，磷增加至80%左右。众所周知，维生素D具有传统意义上的骨骼效应，近年来研究显示，维生素D不仅能够调节钙磷平衡和骨骼代谢，还具有调节免疫、抗肿瘤、调控细胞增殖、防治代谢综合征、抗炎、保护心血管健康等多种生物学功能。

然而，维生素D缺乏或不足的状况在全球范围内普遍存在，按照国际上对维生素D状态评价的普遍标准，全球已有50%的人口存在维生素D缺乏的风险。维生素D缺乏可能导致儿童佝偻病、新生儿低血钙、甲状腺功能减退、中老年人骨质疏松、骨软化症等多种钙代谢异常疾病，而且可使患高血压、冠心病的危险性增加。但长期或大剂量过多使用维生素D也会发生中毒，过量维生素D可导致高钙血症及多种衰老相关疾病，因此，有必要探索建立可靠、高效的测定方法，为维生素D的检测、相关疾病的诊断和预防提供有力的科学依据。

2维生素D的检测方法

现有多种方法用于测定血清25-（OH）D浓度来评价机体维生素D的营养状况，根据方法原理不同，可分为色谱分析法和免疫分析法。色谱分析法包括高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），可分离并检测不同的分析物，能区分并分别定量25-（OH）D2和25-（OH）D5。免疫分析法包括放射免疫法（RIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光免疫测定法（CLIA）、电化学发光免疫测定法（ECLIA）、全自动生化分析法等，由于所有的维生素D羟化物都能发生抗体抗原结合反应，因此，只能测定25-（OH）D总量，无法同时测定25-（OH）D2和25-（OH）D3的浓度。

2.1高效液相色谱法（HPLC）

高效液相色谱法（HPLC）是早期应用较多的色谱法之一，可以同时检测25-（OH）D2和25-（OH）D3，其灵敏度、特异性和准确性都较高，与LC-MS/MS法的结果一致性较好。与免疫法相比，HPLC的相对不确定度小，分析操作省时省力，具有分离效能高、分析速度快、重复性好、节约成本、精确度高、可自动化等优点。但是HPLC的不足之处是设备较贵，检测通量小，所需样品量大，标本前处理过程复杂，对操作人员要求较高等，目前临床使用较少。而且，HPLC虽然能够分开25-（OH）D2和25-（OH）D3，但25-（OH）D2浓度太低，HPLC检测限达不到要求。随着监测技术及精度的发展，FIPLC逐步被LC-MS/MS法所替代。

王剑建立HPLC法测定正常儿童血清25-（OH）D3含量并评价其应用。样品用甲醇沉淀蛋白，以10%二氯甲烷-正己烷提取；甲醇―水（88：12）为流动相，选用DiamonsilTm（250 min×4.6 mm，5μm）色谱柱进行分离，流速为1 ml/min，检测波长为265 mm，柱温30℃。以25-（OH）D3标准品外标法建立标准曲线，结果发现，该方法在10～200μg/L浓度范围内线性关系好（r=0.9971），方法回收率为93.4%～106.2%，提取回收率为88.8%～94.1%。同时也获得了较好的精度，日内变异系数（CV）为3.5%～4.4%，日间CV为3.9%～4.7%，最小检测范围为5 μg/L。刘怡欣利用HPLC法测定健康成年人血清25-（OH）D3含量，建立方法学与上一研究类似，结果发现，25-（OH）D，在线性范围8～160μg/L内与其响应值线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为92.5%～109.5%，日内精密度（RSD）为2.0%～4.6%，日间RSD为2.9%～5.2%，最小检测范围为4μg/L。此方法检测25-（0H）D具有较高的回收率、较好的精密度和准确性，可用于临床实验室开展血清25-（OH）D含量测定。

2.2液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）

液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）是色谱法中最为常用的25-（OH）D检测方法，样品经处理后采用液相色谱分离，检测器为串联质谱仪，在多反应监测扫描模式下，实现分子离子和碎片离子2次质量选择，可同时检测25-（OH）D2和25-（OH）D3，具有非常高的灵敏度、特异性和准确性，被国际公认为检测的金标准。虽然LC-MS/MS在25-（OH）D检测特异性具有明显的优势，但需要样品量较大，样品前处理复杂耗时长，仪器操作较复杂，对操作人员的要求较高，仪器昂贵，而且需要自己开发方法等，一定程度上限制了LC-MS/MS的临床推广使用。

Tai等采用液-液萃取反相LC-MS/MS法检测已知浓度的25-（OH）D标本，考察和评价方法学。结果显示，25-（OH）D2和25-（OH）D3的回收率为99.0%～101.0%，绝对回收率分别为92%和97%。而且，研究显示方法的精度非常高，当25-（OH）D>1ng/g时的CV为0.2%～0.6%；25-（OH）D

2.3放射免疫法（RIA）

放射免疫法（RIA）是最为经典的测定血清25-（OH）D的方法。目前应用较广泛的试剂盒采用125I-25-（OH）D3作为示踪物，与待测样品中25-（OH）D竞争性结合抗25-（OH）D山羊抗体，用两步抗原抗体反应以实现固液分离，并用Gamma计数器检测沉淀中125I的放射量以计算样品中25-（OH）D的浓度。该方法不需要复杂的样品预处理纯化过程，操作简单，解决了HPLC法操作复杂不适于临床检测应用的问题。RIA试剂盒目前应用比较广泛、方便，灵敏度高，特异性强，精密度好，所需要的仪器要求较低，是基层单位对超微量物质测定的主要手段。但是RIA法不能区分检测25-（OH）D2和25-（OH）D3，还具有放射性污染的潜在风险，对实验人员和环境都有损害，放射性废物的处理也比较复杂。而且测量需要设立平行样，花费较多，每次检测的数量有限。

多项研究报道，对于血清25-（OH）D的测定，RIA法与LC-MS/MS法测定结果的相关性较好。Van denOuweland等比较了Diasorin RIA法与LC-MS/MS法检测来自国际维生素D室间质评计划（DEQAS）的室间质控标本，同时也分析比较了其他使用LC-MS/MS方法的实验室检测结果，结果发现，RIA法与LC-MS/MS法结果符合度高，相关系数，r2=0.90，平均偏差为1.61nmol/L。Farrell等对170例随机选取的患者标本分别采用RIA法和LC-MS/MS法检测，连续5 d取2份血清重复测量5次，以评估批内及批外的精密度，结果显示，LC-MS/MS法的一致相关性（CCC）为0.99，平均偏差为1.4 nmol/L，RIA法与LC-MS/MS，法相当，其CCC为0.97，平均偏差为2.7 nmol/L。郑晓艳对53例血清样本分别采用RIA法和LC-MS/MS法检测25-（0H）D，结果显示两者相关性良好，相关系数，为0.883。RIA法与金标准LC-MS/MS法检测的相关性好，使用方便，适合于常规临床实验室开展。

2.4酶联免疫吸附法（ELISA）

酶联免疫口及附法（ELISA）是早期维生素D测定的主流方法，是将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法：ELISA法在自动化操作、节省人力、无污染等方面具有一定的优势，适合于常规临床实验室开展.但是该法只能用于检测25-（OH）D总的含量，当受试者服用维生素D2时，ELISA法测定会存在偏差，可能造成临床决策的失误，使维生素D中毒风险增大

另外，ELISA法的主要缺陷是对基质敏感，容易与其他非目标化合物发生交叉反应，导致方法特异性不足。而且，酶促反应受反应温度、时间、加样准确性、洗板等因素影响.批内和批间的变异系数相对较大

高玲娟采用ELISA试剂盒检测25-（OH）D水平，对ELISA方法学进行系统评价，结果发现，ELISA测定25-（OH）D的批内CV为2.13%～4.32%，批间CV

2.5化学发光免疫测定法（CLIA）

化学发光免疫测定试剂盒使用连接有异鲁米诺衍生物的25-（OH）D与样品中25-（OH）D竞争性结合包被了25-（OH）D特异性抗体的磁珠，反应终止后加入激发剂，使用光电倍增管检测产生的化学荧光信号。CLIA法的优点是操作简单、快速，无同位素污染，而且容易自动化，现已有多家厂商开发出相关自动免疫分析仪；缺点是仪器价格高、只能用于检测25-（0H）D总的含量。

单咏梅对LIAISON全自动化学发光仪测定25-（OH）D的检测性能进行验证和评估，实验结果表明线性范围为6～131 ng/ml，批内RSD为5.23%，批间RSD为1.06%，总RSD为6.57%，分析灵敏度为2.5 ng/ml，功能灵敏度为3.0 ng/ml，可以满足临床使用需要，Frenzel等。对比了LIAISON CLIA法与Dia RIA法和LC-MS/MS测定25-（0H）D的结果相关性，CLIA法测定的结果与RIA检测结果的相关系数为0.94，与LC-MS/MS的相关系数为0.95。CLIA测定结果准确性和特异性高，自动化、可控性强，适合大规模维生素D营养状况监测。

2.6电化学发光免疫测定法（ECLIA）

电化学发光免疫测定试剂盒使用生物素标记的25-（OH）D与样品中25-（0H）D竞争性结合钉标记的维生素D结合蛋白（DBP）后，用包被r链霉亲和素的磁珠将生物素标记的25-（0H）D-钌标记的维生素D结合蛋白复合体固定，光电倍增管检测钉的电发光信号强度回算样品中的25-（OH）D浓度。该法具有高灵敏度，且所受影响因素较少，能自动化批量操作÷

何国坚应用罗氏CS E170分析仪采用ECLIA法检测维生素D，结果显示，其线性范围为3～70 ng/ml（r=0.9881，检出限为3.0 ng/ml；2种不同浓度的定值质控血清在准确度评估中相对偏差均

2.7全自动生化分析法

全自动生化分析法利用全自动生化仪，根据光电比色原理来测量血液中25-（OH）D的总含量。由于其操作简单、测量速度快、准确性较高、消耗试剂量小，在各级医院得到广泛应用。其缺点是仅能检测25-（OH）D的总含量，精密度和特异性稍差，仪器间的性能差异大，容易造成样品间交叉污染。

维生素d2范文第4篇

【关键词】 异动症 中药 多巴胺D2受体 神经行为学表现 大鼠

Objective: To explore the effect of traditional Chinese herbal medicine (TCM) for nourishing liver and kidney， clearing meridians and removing toxic substances， on the neurobehavioral manifestations and the activity of the dopamine D2 receptor in rat with levodopainduced dyskinesias (LID).

Methods: The rat model of Parkinson's disease (PD) was established by injecting 6hydroxydopamine (6OHDA) into right substantia nigra of brain， then， the model of LID in rat was produced by injecting levodopa (LD) and benserazide for 4 weeks. The rats were pided into normal control group， 4week LD treated group， 4week LD plus TCM treated group， 8week LD treated group， and 8week LD plus TCM treated group， and the effect of the TCM on neurobehavioral manifestations was observed. The radioligand binding assay (RLBA) and Scatchard drawing were used to measure the maximal binding capacity of receptor (Bmax) and equilibrium dissociation constant (KD) of the dopamine D2 receptor in corpora striatum.

Results: Compared with the 4week LD treated group and 8week LD treated group， TCM could decrease abnormal involuntary movement scores of the rats with LID; the RLBA revealed that the dopamine D2 receptor Bmax significantly increased (P

Conclusion: TCM can improve the activity of the dopamine D2 receptor and relieve the symptoms of LID.

Keywords: levodopainduced dyskinesias; traditional Chinese herbal medicine; dopamine D2 receptor; neurobehavioral manifestations; rats

异动症（levodopainduced dyskinesias， LID）是左旋多巴（levodopa， LD）长期治疗帕金森病（Parkinson's disease，PD）过程中普遍出现的并发症，主要表现为舞蹈症和手足徐动症，严重影响帕金森病患者的日常生活质量。目前，各国学者在努力寻找PD病因的同时将研究重点集中在如下两方面：一是如何阻止或减缓黑质多巴胺能神经元的进行性变性；二是如何减少左旋多巴制剂毒副作用。本研究主要探讨滋补肝肾、通络解毒中药对LID大鼠行为学和纹状体多巴胺D2受体数量及亲和力的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验药物 滋补肝肾、通络解毒中药——熟地平颤汤颗粒合用蝎蜈胶囊为上海市名中医胡建华教授经验总结方，熟地平颤汤颗粒由熟地黄15 g、枸杞15 g、桑寄生20 g、天麻15 g、僵蚕10 g、莪术15 g、白芍药20 g和天南星15 g组成，由江阴天江药业有限公司制成颗粒剂（批号：0504312），每袋重4.8 g，相当于生药31.25 g。蝎蜈胶囊（批号：010813）按全蝎︰蜈蚣=1︰1配制，烘干打粉，灌制胶囊，每粒含生药0.3 g。将4袋熟地平颤汤颗粒和10粒蝎蜈胶囊（相当于成人1 d用量，含生药128 g）混合后溶于100 ml生理盐水中，使每毫升含生药1.28 g。LD粉剂5 g（批号：SLD6382）和苄丝肼粉剂5 g（批号：SL06492），由美国Sigma公司提供。

1.1.2 主要试剂和仪器 6羟基多巴胺（6hydroxydopamine，6OHDA)、阿朴吗啡（apomorphine，APO)和布他拉莫，美国Sigma公司产品；3H螺环哌啶酮和闪烁液，美国PerkinElmer公司产品。大鼠脑立体定位仪，TOW3A型，第二军医大学产品；超速离心机，LE80K型，Beckman公司产品；液体闪烁发光记数仪，Wallac1450型，美国PerkinElmer公司产品。

1.1.3 实验动物 成年雄性SD大鼠30只，体质量180～220 g，由上海西普尔必凯实验动物有限公司提供，动物许可证号为SCXK沪20030002。

1.2 实验方法

1.2.1 PD大鼠模型制备 PD大鼠模型制备参照文献［1］方法，SD大鼠用1%戊巴比妥麻醉后，固定于大鼠脑立体定向仪上，参照包新民等［2］所著大鼠脑立体定位图谱，确定右侧黑质致密部（substantia nigra pars compacta，SNC)和中脑腹侧被盖部(ventral tegmental area，VTA)三维坐标位置，SNC为前囟后4.8 mm、矢状缝右侧2.0 mm、硬膜下8.0 mm；VTA为前囟后4.8 mm，矢状缝右侧1.2 mm，硬膜下8.2 mm。牙科钻打孔，向两坐标点各注射6OHDA 6 μg（溶于含0.2%抗坏血酸的生理盐水中，6OHDA浓度为2 g/L），注射速度为1 μl/min，留针10 min。术后，用医用明胶海绵填塞颅骨孔，缝合切口皮肤，伤口上涂抹磺胺颗粒抗感染，待动物清醒后放回饲养笼中饲养。术后2周腹腔注射阿朴吗啡（0.5 mg/kg体质量）诱发大鼠旋转，记录注射后30 min内大鼠旋转方向和旋转圈数，若大鼠恒定转向右侧且旋转圈数>7 r/min则视为PD模型成功。

1.2.2 LID大鼠模型制备 对成功的PD大鼠予左旋多巴/苄丝肼治疗（10 mg/ml左旋多巴和2.5 mg/ml苄丝肼溶于含0.2％维生素C的消毒生理盐水中），制备LID大鼠模型［3］，左旋多巴的注射剂量为10 mg/kg体质量，每天9时和17时进行腹腔注射，持续4周。根据其是否出现刻板动作和对侧旋转行为等异常不自主运动（abnormal involuntary movement，AIM），筛选出LID模型，AIM评分>20分则视为LID模型成功。

1.2.3 动物分组及给药 左旋多巴用药4周后，将成功建立的LID模型大鼠，分为模型组(8周模型组)、中药干预组、中止给药对照组(4周模型组)、中止给药+中药干预组，每组6只，再另取6只未造模大鼠为正常对照组。正常对照组及中止给药对照组给予生理盐水灌胃，模型组继续予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射（注射剂量为10 mg/kg），中药干预组在模型组处理基础上给予中药灌胃，中止给药+中药干预组则在4周时停用左旋多巴/苄丝肼的基础上加用中药（同中药干预组），每次灌胃量为9 ml/kg，1次/d，连续4周。

1.2.4 AIM评分测定 除正常对照组大鼠外，模型各组大鼠于观察期间每周进行AIM评分，参照文献方法［4］，将AIM分为4个部分（前肢AIM、口面部AIM、轴性AIM及运动AIM）进行评定，每部分又根据其有无和严重程度划分为5个等级，计为0～4分，其中0分为无；1分为偶尔出现；2分为经常出现；3分为持续存在，刺激使之停止；4分为持续存在，刺激也不能使之停止。理论上1只大鼠1次腹腔注射左旋多巴/苄丝肼后的AIM最高评分为64分。评分在左旋多巴/苄丝肼腹腔注射后立即进行，30 min评定1次，共120 min，5组数据平均值为本次的AIM分数。

1.2.5 膜蛋白制备 参照张旺明等［5］方法制备膜蛋白，大鼠以10％水合氯醛腹腔注射麻醉后，快速断头取脑，于冰块上分离并切取双侧尾壳核脑组织各1块。加入4 ℃预冷的Tris盐酸缓冲液，冰浴中制成匀浆，离心后，取沉淀以Tris盐酸缓冲液（pH 7.4）1～2 ml稀释，充分混悬，即成膜蛋白悬液。以考马斯亮蓝法测定膜蛋白浓度，并用Tris盐酸缓冲液调整膜蛋白浓度为1 g/L左右。

1.2.6 多巴胺D2受体活性的测定 采用双复管法（每个样本分为9个不同浓度反应管，重复测定2次）测定，反应管内加入浓度呈倍比递增的标记配基（特异性结合：10、20、40、60、80和100 μl。非特异性结合：20、60和100 μl）和非标记配基（非特异性结合：100 μl)以及定量的膜蛋白液0.2 ml，加入Buffer缓冲液，使每管总反应体积为0.4 ml，37 ℃水浴中孵育15 min，于冰浴中终止反应。以多头细胞样品收集器收集于玻璃纤维滤纸上，置80 ℃烘箱中烤干，剪下样品，以2000CA/LL型液态闪烁计数仪测定其放射活性，以空白滤纸点样进行校正。计算各点特异性结合计数，使用受体数据软件包（上海第二医科大学编制），按Scatchard公式计算出多巴胺受体的最大结合容量（maximum binding capacity， Bmax）和平衡解离常数（equilibrium dissociation constant， KD）。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析，采用单因素方差分析及t检验进行组间比较，结果用x±s表示，检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 各组大鼠给药前后AIM评分的变化 与用药前比较，模型组大鼠用药后第1、2、3和4周的AIM评分逐步增高（P

2.2 各组大鼠双侧尾壳核多巴胺D2受体活性 各组大鼠与正常对照组比较，损毁侧多巴胺D2受体Bmax显著降低（P

3 讨 论

在PD的发病机制中不仅由于脑中多巴胺神经元的减少，多巴胺能受体也起重要作用。多巴胺能受体分为D1和D2两族［6］，PD的病理主要涉及的是D2的损害。LD是临床上疗效较好的多巴类替代治疗药物，Ldopa在体内转化为多巴胺后，多巴胺可通过自身氧化代谢生成具有细胞毒的的多巴醌和其他自由基。因此，LD可能加速多巴胺神经元的变性，具有一定神经毒性。Nakao等［7］提出纹状体神经元可将外源性多巴转换成多巴胺，增加的多巴胺作用于突触后多巴胺D2受体引起D2受体下调，使纹状体损毁侧与其健侧的D2受体表达数减少。Brooks等［8］运用正电子发射断层照相术（positron emission tomography，PET）和多巴胺D2受体PET显像剂11C雷氯必利研究比较了早期和晚期对多巴胺制剂反应波动的PD患者的D2受体，结果发现前者基底节D2受体放射性结合率正常或增高，而后者则明显下降（尾核、壳核部分分别下降30％和18％）。

结合本实验结果，异动症大鼠随着LD腹腔注射时间的延长，异动症症状愈发加重，纹状体D2受体亲和力明显下降，健侧亲和力也有下降。我们认为LD虽然能明显改善PD的症状，但LD治疗能使纹状体多巴胺D2受体下调，D2受体下调到一定阈值可能为LD长期治疗后引起疗效减退的原因。

本次实验从异动症行为学检测可以发现，从第0周到第2周，中药干预组和模型组的异动症症状均略有加重。从第2周末到第4周，模型组的异动症症状进一步加重，而中药干预组症状有明显减轻。同时，中药干预组与模型组比较，D2受体亲和力明显增高。从结果中进一步可以看到，异动症大鼠停用左旋多巴后，异动症症状均有下降趋势，但加用中药后，下降趋势更明显。受体活性结果也表明，中止给药+中药干预组与中止给药对照组比较，D2受体亲和力上调更明显。说明中药可明显改善LID大鼠双侧尾壳核多巴胺D2受体活性，撤药可部分恢复多巴胺D2受体活性，加用中药效果更佳。故认为滋补肝肾、通络解毒中药可以有效缓解异动症症状，明显改善D2受体功能。

我们在临床研究中证实，滋补肝肾、通络解毒中药具有增效减毒作用［9］。过去在滋补肝肾、通络解毒中药治疗PD大鼠的研究中发现，中药可通过清除氧自由基［10］，增加大鼠酪氨酸羟化酶及其信使核糖核酸的表达［11］，抑制多巴胺神经元的凋亡［12］等机制来改善PD大鼠的旋转行为［13］。而这些机制与LID密切相关，故可以认为滋补肝肾、通络解毒中药具有多靶点作用。

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维生素d2范文第5篇

关键词：现有器材；易得器材；改进创新；改进效果

中图分类号：G633.7 文献标识码：A 文章编号：1003-6148（2016）12-0010-3

教材或教师教学用书中所介绍的实验，大多只是原理性的。如果仅是按仪器名称拿来的器材，不一定能达到应有的效果，可能还需要特定型号，因此实验前，有时还需要研究实验设计中器材所需的型号或参数。当实验室现有器材不能满足原实验设计所需的规格或参数时，教师能否立足于现有的器材，对原实验设计作适当的改进或创新，成为能否实现实验教学的关键。如果教师把这种过程在学生中再现，无疑也是对学生“科学思维、科学探究”核心素养的凝练。下面以教材设计的“断电自感”为例，展现利用现有器材、身边器材进行创新改进的过程。并对改进效果做了说明。

1 “断电自感”原实验设计

人教版物理选修3-2教师教学用书中，“断电自感”实验设计电路如图1。当开关S闭合后，B灯亮（二极管D2导通），A灯不亮（二极管D1截止）；当开关断开后，B灯不亮（二极管D2截止），A灯亮（二极管D1导通）[1]。下面是按图1设计的电路图和实验室现有器材进行的系列实验。

2 利用实验室现有器材进行实验

实验室中有存量较大的J2426型小型变压器，于是笔者想到用J2426型240匝线圈（连同铁芯）作为自感线圈，小灯泡规格用2.5 V，0.3 A。按图1进行实验，结果当干电池电源电动势为3.0 V时，开关闭合， B灯正常发光，A灯不亮；开关断开后，B灯熄灭，A灯不曾亮。电源电压增至6 V以上时，B灯或二极管D2将被烧坏，实验不成功。

3 原因分析

J2426型小型变压器240匝线圈，其自感系数约为150 mH，直流电阻RL为5 Ω，二极管的正向电阻约为4 Ω，二极管反向电阻约为1.4 MΩ，小灯泡发光时的电阻约为6 Ω。

B灯正常发光，电路稳定后，自感线圈中的电流IL（约0.6 A）大于A灯正常发光的电流（0.3 A），但由于线圈的自感系数（约150 mH）偏小，线圈和A灯构成的回路的驰豫时间τ=L/R（R为回路总电阻）[2]较短（约为0.01 s），因此电源断开后，电流降低过快，相应维持能使A灯发光的电流的时间过短，灯丝温度升高的不够，致使A灯不能发光。

4 方案改进

4.1 改进方案1

仍以J2426型小型变压器240匝作樽愿邢呷Γ在D2所在支路加一适当分压的电阻R，其他不变，以增加直流电源的电动势。如图2，这样闭合开关、D2支路小灯泡正常发光时，电感线圈支路的直流电流将增大，由于线圈和A灯构成的回路的驰豫时间不变，从而增大自感电动势，这样断开电键的瞬间，就能使灯发光甚至闪亮。

4.2 改进方案2

仍以J2426型小型变压器240匝作为自感线圈，将图1中D1和D2的一般二极管改为发光二极管，去掉灯泡，以免去考虑灯泡发光所需的所谓“热惰性”的困扰，如图3所示。

5 改进后的实验效果

5.1 方案1效果

图2中，分压电阻R为10欧，电源电动势为6 V，开关闭合后，B灯亮，A灯不亮，开关断开后，B灯熄灭，A灯亮一下熄灭，实验达到理想效果。

需要说明的是：灯能否发光不是单纯看驰豫时间，关键是看在大于或等于灯的发光电流的这段时间内电流做的功，这段时间内电流的有效值越大，时间越长，灯就越可能发光。例如：按图2，用J2423型变压器400匝（自感系约为193 mH ， 直流电阻约为2欧姆）做自感线圈，干电池电压为3 V时，灯即可正常发光，电流可达约1.5 A，驰豫时间0.016 s，超过了改进方案1中J2426型小型变压器240匝的参数，但事实上，开关断开后，A灯却并未见亮。实验发现：电源电压要调到6 V，才能使开关断开后，A灯瞬间发光，而且会闪亮一下熄灭。因此，仍需按方案1中的图2进行。但用它的缺点是，器材笨重，实验室数量有限，不方便做线路板。

显然，对于直流电阻较大的自感线圈，单靠按方案1增加电动势是不方便的。以J2423型可拆变压器800匝（自感系数约为780 mH，直流电阻为20欧姆）做电感线圈为例。实验表明把电源电动势增加到25 V时，断开电路瞬间， A灯还不见亮，若继续增加直流电压，显然是不现实的。

5.2 方案2效果

图3中，两二极管为红色发光二极管，干电池电压为3 V，闭合电键，D2亮度十足，断开电键，D2熄灭，D1闪亮后熄灭，实验也达到理想的效果。

6 其他器材参数及改进

6.1 剃须刀充电变压器线圈做自感线圈的电路设计改进

出于好奇，笔者将剃须刀内的小型充电变压器的一组线圈（其自感系数L约为28.7 mH ，直流电阻为10 Ω）用方案2做实验。结果电源用3 V的干电池，实验基本成功，只是电键断开后，D1没有断开前D2亮。

改进方法是：在D2支路加一个5 kΩ左右的电阻R，结果是，在电源电压仍为3 V时，电键断开后的D1要比断开前D2亮些，达到闪亮的效果（如图4）。

6.2 J2426型小型变压器120匝做自感线圈的电路设计改进

如果自感线圈直流电阻过小，电路稳定后，会被自感线圈支路造成短路，使得电键闭合后，D2亮一下即熄灭了。电键闭合、断开，二极管交替闪烁发光。如用J2426型小型变压器120匝做自感线圈（其自感系数为49 mH，直流电阻为1.2 Ω）就会出现此情况。

改进的方法是：在电感线圈支路加适当电阻。如用J2426型小型变压器120匝做自感线圈（如图5），R1取2～5 Ω，R2取150～300 Ω，干电池电压为3 V，实验可取得显著效果。

以上实验，均用小型变压器的线圈充当自感线圈，体型小，器材易得，方便制作线路板，为学生进行探究分组实验提供了可能。

7 启 示

看似原理简单的实验，不亲自去实践，很难知道其中隐藏的奥妙。只有在实践中才能发现问题，只有在理论指导下的对实践的科学分析，才能使研究有的放矢，找到有效改进实验的措施，增加取得实验成功的概率。

不拘泥于教材的设计，立足现有器材，注重理论分析，进行改进和创新，不仅切实解决了实验难点，真正发挥了实验在物理教学中的价值和作用，提高了课堂教学效果，而且无形中给学生传递着求新、求异、求美的意识，有了这种意识，创新思维的培养也就能水到渠成。

参考文献：