免疫球蛋白e范文第1篇

【关键词】 鼻息肉 免疫球蛋白E 白细胞介素5 嗜酸粒细胞

鼻息肉是耳鼻咽喉科的常见病，患病率约占成年人的1%～2%，术后复发率约为10%～20%［1］，是一种由多种因素所致的鼻黏膜慢性炎性病变，发生机制尚未十分清楚。其最常见的组织学特点是以嗜酸粒细胞（EOS）为主的炎性细胞浸润和组织水肿。本研究通过检测鼻息肉组织中免疫球蛋白E（IgE）和白细胞介素5（IL-5）水平，同时观察EOS浸润的程度，探讨IgE和IL-5在鼻息肉中EOS浸润聚集机制的作用。

1 资料与方法

1.1 标本来源及制备 31例鼻息肉标本来自2006年1月～2007年12月在我院行鼻息肉手术的患者（鼻息肉组），男17例，女14例；年龄12.9～66.2岁，平均43.6岁。所有患者均无变应性疾病史及近期内未服用类固醇激素、抗组胺药及抗生素药物，无阿司匹林耐受不良。25例对照组标本来自因鼻中隔偏曲并下鼻甲肥大而行部分下鼻甲切除患者的下鼻甲黏膜（无全身疾病史，无变态反应史，无慢性鼻窦炎病史），年龄18.2～65.9岁，平均39.4岁。鼻息肉和下鼻甲黏膜标本分为两份，一份用4%多聚甲醛固定后石蜡包埋，行常规病理检查；另一份用生理盐水洗净血迹，置-20 ℃低温保存。

1.2 检测方法 将标本室温融化，称重后剪碎，每100 mg组织加生理盐水1 ml，在冰浴中用BY89-1电动玻璃匀浆器（宁波新芝科技器材研究所）将组织细胞碾碎，用低温离心机（德国）于4 ℃、以5000 r/min，离心10 min，取上清液备用。

1.2.1 IgE测定 使用美国Beckman公司Accessimmoassay system，应用连续两步免疫酶法（Sandwich法）检测标本组织中IgE水平。

1.2.2 IL-5测定 应用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）。试剂盒购自美国TPI Inc公司，按照试剂盒说明书进行操作，设零孔及阴性对照孔。用法国Pasteur LP400酶标仪测各孔450 nm吸光度（A）值。酶标仪根据标准品浓度及A值，自动得出标准曲线，由标本的A值分别在相应的标准曲线上推算出各个组织标本中IL-5水平（ng/L）。

1.2.3 组织学观察 鼻息肉及下鼻甲黏膜的石蜡包埋标本，切片，苏木精-伊红常规染色。使用NIKONE600型显微镜（日本）行双盲法检测，每个标本随机选取2张切片，从中随机观察10个高倍视野（×400），手工计数鼻息肉组织和下鼻甲黏膜下、血管周围的EOS数，其平均值为该标本EOS浸润数。

1.3 统计学方法 用SPSS 10.0 for Window软件包进行统计学处理。用t检验分析比较两组组织中IgE、IL-5水平和的EOS浸润程度；用相关分析比较IgE、IL-5水平与EOS浸润程度的相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

鼻息肉组黏膜下可见不同程度的EOS浸润，主要分布在黏膜上皮下或小血管周围，该细胞胞质丰富，色泽鲜艳，颗粒饱满，具有2～3个分叶核，水肿型息肉中EOS浸润较多；对照组黏膜下EOS浸润明显少于鼻息肉组。两组IgE、IL-5与EOS检测结果见表1。鼻息肉组IgE、IL-5水平分别与EOS浸润数呈正相关（P＜0.01）。表1 鼻息肉组和对照组IgE、IL-5及EOS水平的比较 注：与对照组比较，*P＜0.01

3 讨论

鼻息肉是一种常见病，既往多认为鼻息肉的发生与慢性炎症和变态反应有关。近年来随着免疫学和分子生物学的进展，国内外学者认为鼻息肉的发病机制是多因素、多步骤的过程，并发现多种细胞因子在鼻息肉中存在并影响其发生及病理变化［2］。

大多数鼻息肉中存在着明显的EOS浸润。这些浸润的EOS胞质颗粒中含有血管活性物质（vasoactive sutstances）、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（eOS inophilcationic protein，ECP）、主要碱性蛋白（major basic protein，MBP）、趋化因子（chemotactic factors）和嗜酸粒细胞过氧化物酶（eosinophilperoxidase，EPO）等，它们的释放对鼻黏膜上皮损伤和鼻息肉的形成具有重要作用。本研究在排除了变应性鼻炎和全身变应性疾病的条件下，发现鼻息肉组织中EOS浸润数明显高于对照组下鼻甲黏膜，鼻息肉组织中的IgE较对照组明显增加，且IgE水平与鼻息肉组织中EOS浸润数呈正相关，说明鼻息肉中存在局部变态反应，它对EOS的浸润聚集具有重要作用。EOS浸润聚集的机制可能与下列因素有关:（1）变态反应的作用:以IgE介导的Ⅰ型变态反应学说来解释鼻息肉中EOS的浸润聚集，但目前仍存在争议。Kramer等［3］发现变应性鼻炎和非变应性鼻息肉患者鼻分泌物中IgE水平上调，从而认为两种病有类似的病理过程。一方面，IgE与肥大细胞上的高亲和受体FcεRI结合，除引起效应细胞脱颗粒外，还激活肥大细胞产生细胞因子，共同引起EOS在组织的聚集；另一方面，当EOS接触IgE或抗原后，出现脱颗粒、释放化学递质并可传递抗原，也可引起EOS的趋化聚集等多种生物学效应。（2）细胞因子IL-5的作用：IL-5是近年来研究比较多的细胞因子之一，它主要由抗原活化的T-辅助细胞产生，具有多种生物学活性，它对鼻息肉组织中嗜酸粒细胞浸润有重要作用。近年的研究表明，鼻息肉中的多种细胞因子与EOS的浸润具有密切的关系。Hirschberg等［4］通过免疫组化方法研究IL-5在鼻息肉中表达状况及其与Eos浸润的关系，结果发现鼻息肉中IL-5的表达明显上升，IL-5的表达程度与鼻息肉组织中Eos的浸润程度密切相关。本研究结果显示，鼻息肉中IL-5表达水平明显高于下鼻甲组织，且与浸润的EOS数呈正相关，说明IL-5对鼻息肉中EOS的趋化浸润聚集也具有重要影响。IL-5通过细胞膜相关受体而实现其作用，而人类白细胞中EOS是唯一特异性表达IL-5受体者，因此，IL-5对鼻息肉组织中EOS的浸润发挥关键作用。IL-5可上调内皮细胞血管细胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule，VCAM）和EOS表面整合素（very late activation antigen 4，VLA4）的表达，而VLA4是VCAM1的配体，EOS通过VLA4与VCAM1结合，黏附于血管内皮进而向炎症部位移行和聚集。（3）IgE对IL-5的影响:本研究发现鼻息肉中IgE与IL-5表达水平呈正相关，说明IgE对IL-5表达水平上调具有重要作用，这可通过上述依赖IgE的肥大细胞和EOS激活、脱颗粒和传递抗原等效应，促进IL-5的合成和释放，或者说IgE的高表达对EOS自分泌IL-5有促进作用，从而使鼻息肉中EOS浸润聚集增加。在鼻息肉形成的初始阶段，T细胞是IL-5的主要来源，随着鼻息肉的生长、发展，EOS替代T细胞而成为IL-5的主要来源。

综上所述，IgE在鼻息肉中高表达，表明局部变态反应存在于鼻息肉中，它对鼻息肉中IL-5的表达上调具有重要作用；IgE与鼻息肉中高表达的IL-5通过不同的方式对鼻息肉中EOS的浸润聚集具有重要作用。使EOS进一步增加聚集，以致损伤上皮细胞黏膜固有层，黏膜固有层疝出导致息肉再次形成。

参考文献

1 Bachert C，Gevaert P，Holtappels G，et al.Nasal polyps:from cytokines growth.Am J Rhinol，2000，14:279-290.

2 向东，郭剑峰，张呼和，等.CD43、20及总IgE在鼻息肉组织中表达的研究.中华耳鼻咽喉科杂志，2001，15（11）:486-488.

免疫球蛋白e范文第2篇

免疫功能异常亢进。对于进入机体的药物或某些微生物产生变态反应，如花粉引起的过敏现象。常见疾病为：过敏性皮炎、麻疹、哮喘、顽固性头痛、牙痛、红眼病、青春痘、便秘及高血压、高血脂、心脏病、中风等心血管类疾病。

免疫功能低下或缺乏。免疫力差就容易感染，医学上称为免疫缺陷综合征。表现出的病症有：感冒、咳嗽、咽炎、胃炎、肠炎、肺炎、支气管炎、肺结核、鼻炎、中耳炎、肝炎、乳腺炎、皮肤感染、肾炎及障碍类病症。

免疫功能稳定异常。易患红斑狼疮、心肌炎、风湿、类风湿病、恶性贫血、重症肌无力、牛皮癣、鱼鳞病、白塞氏病、糖尿病等。

免疫监视功能失调。免疫系统不能及时识别和清除体内产生的变异细胞，这是产生肿瘤、发生癌变的主要原因和决定因素。

提高免疫力的常见食物

人的免疫力与遗传有密切关系，但在日常生活中，很多食物也可以在一定程度上帮助提高免疫力，增强人体的抗病能力。

哪些营养物质与免疫力的提升有关？

1.蛋白质

蛋白质是人体免疫系统中白血球和抗体的主要成分。临床上，蛋白质严重缺乏会使免疫细胞中的淋巴球数目减少，从而导致机体免疫力下降。因此，蛋白质的摄入可以增加人体的免疫力。

2.维生素E

维生素E能够增加抗体的数量，而抗体具有清除过滤性病毒的作用。同时，维生素E还能维持白血球的稳定，防止人体的白血球细胞膜产生过氧化反应，并增强机体抵抗力。

3.维生素B6

维生素B6缺乏会引起免疫系统退化，出现胸腺萎缩等症状，导致机体免疫力下降。

4.β-胡萝卜素

人体缺乏β-胡萝卜素时，会严重减弱身体对病菌的抵抗力。

5.维生素C

维生素C能刺激体内制造干扰素（一种抗癌活性物质），用来破坏病毒，以减少白血球与病毒的结合，保持白血球的数量。一般人感冒时，血球中的维生素C会急速被消耗，因此感冒期间必须补充大量维生素C，以增强免疫力。

6.其他

营养素中的叶酸、维生素B12、烟碱酸、泛酸、铁、锌等元素，都和免疫能力有关联，一旦缺乏，就会影响到人体的免疫机能。因此日常生活中我们需要平衡膳食，合理补充人体所需的各种营养，增强机体的抗病能力和免疫力。

能提高免疫力的食物

1.蛋类、瘦肉和豆制品能提供优质蛋白。

2.酸浆果、金桔、西红柿、胡萝卜和菠菜等富含抗氧化物。一般来说，颜色鲜艳的水果和蔬菜都能够帮助机体提高免疫力。

3.小麦、米胚中的油脂，蛋、肝脏、肉类等富含维生素E。

4.大蒜和洋葱：洋葱能增强T细胞的免疫活性，从而增进整体的免疫反应。含类似大蒜和洋葱中免疫活性物质的食物，在人体内可充当清洁剂和杀毒剂的角色，起到杀灭和清除毒物及病菌的作用。

5.肝脏、腰子、牛奶、酵母、荚豆类、肉类等富含维生素B6。

6.绿色蔬菜、枸橼类水果等富含维生素C。

7.绿色蔬菜和黄色、橘色的果蔬（如胡萝卜、马铃薯、番薯、哈蜜瓜）富含β-胡萝卜素。

如何正确调节免疫力

人体免疫系统是一个整体概念，因此，调节自身的免疫力需要从多个方面共同进行。

心情调节。精神因素对人体的免疫功能有着很重要的调节作用。如果人长期处于孤独、矛盾、失望、压抑的状态，就会影响体内环境的平衡，从而减弱人体的抵抗力，而乐观、愉快及自信对预防疾病和抗老化有促进作用。因此，生活中要保持愉快乐观的心态，不要经常被外界所干扰。

注意饮食，平衡营养。满足身体正常需要的同时要摒弃不良的饮食习惯（如暴饮暴食、爱吃煎炸食物等）。

注意戒烟限酒。烟草中的尼古丁会对人体免疫力造成伤害，酗酒也会增加人体患病的危险。

适度的体育锻炼。锻炼时注意不要使机体疲劳过度，否则会适得其反，导致机体免疫力下降从而引起疾病。

良好的生活习惯。按时睡觉、工作和生活才能保证生命质量，有效防止疾病的发生，切忌经常熬夜。

免疫球蛋白e范文第3篇

[关键词] 雷公藤多甙；维生素E；大量蛋白尿；急性肾小球肾炎

[中图分类号] R726.9 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）22-68-02

Observation of Effects of Tripterygium Wilfordii Polyglycosidium Combined with Vitamin E in Treating Acute Glomerulonephritis with Mass Proteinuria

ZHANG Ling

Qianxinan Prefecture Hospital in Guizhou Province，Qianxinan 562400，China

[Abstract] Objective To observe the effect of tripterygium wilfordii polyglycosidium combined with vitamin E in treating acute glomerulonephritis with mass proteinuria. Methods Divided 66 children of acute glomerulonephritis with mass proteinuria into two groups randomly，each group including 33 patients. The treating group was given tripterygium wilfordii polyglycosidium and vitamin E. The control group accepts convalescence method. After one week，Compared Bp，BUN，Scr of two groups；Compared the recovery time of HBP，hematuria，proteinuria，length of stay and clinical efficacy. Results Clinical efficacy，the recovery time of HBP，hematuria，proteinuria and length of stay in the treating group were statistically better than those in the control group（P＜0.05）；after one week，Upro of 24h，SBP，DBP，BUN，Scr in the treating group were statistically improved than those in the comparing group（P＜0.05）. Conclusion Tripterygium wilfordii polyglycosidium and vitamin E can improve symptom of acute glomerulonephritis with mass proteinuria and can improve clinical efficacy.

[Key words] Tripterygium wilfordii polyglycosidium；Vitamin E；Mass proteinuria；Acute glomerulonephritis

以大量蛋白尿为主要表现的急性链球菌感染后肾小球肾炎（APSGN）临床表现与非大量蛋白尿APSGN有所不同，诊断和治疗常有一定困难。笔者于2005年3月～2011年3月以雷公藤多甙与维生素E治疗大量蛋白尿性急性肾小球肾炎，疗效满意，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

全部病例均为本院儿科门诊及住院患者，所有患儿均符合原发性肾小球疾病分型诊断标准[1]，且在起病2周内连续3次以上尿蛋白定性≥+++，或尿蛋白定量≥0.1g/（kg・d）。符合纳入标准的共66例，其中治疗组33例，男14例，女19例；年龄3～14岁，平均（5.16±1.24）岁；就诊时病程为2～4d，平均为3.5d；水肿21例，少尿15例，血尿14例，高血压13例。对照组33例，男16例，女17例；年龄3～15岁，平均（5.85±3.77）岁；就诊时病程为2～5d，平均为3.6d；水肿20例，少尿21例，血尿13例，高血压15例。两组在性别、年龄、病例来源、发病诱因、症状体征等方面比较，无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

治疗组：在对照组的基础上加用雷公藤多甙片（湖南协力药业有限公司生产）20mg，每天3次口服；并用维生素E胶丸（海南海神同洲制药有限公司产）0.1g，每天3次口服；1周为一疗程，治疗2个疗程后统计疗效。对照组：予以常规护理（如卧床休息、限制钠水摄入等）；同时进行必要的对症处理：水肿严重者予以利尿剂；血压明显增高者予降压药；同时服用维生素C片；疗程同治疗组。

1.3 观察指标

①观察两组治疗前、治疗1周后24h尿蛋白定量、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）。②记录两组患者水肿、高血压、血尿、蛋白尿恢复正常的时间和住院时间。③观察两组治疗后临床疗效，疗效标准参照文献[1]制定：治愈：浮肿及全身症状消失，血压正常，实验室检查恢复正常；显效：浮肿及全身症状改善，小便常规仍有少量蛋白及红、白细胞；有效：浮肿及全身症状改善，小便常规仍有较多蛋白及红、白细胞；无效：浮肿等临床症状及实验室检查无改变。

1.4 统计学处理

采用SPSS13.0统计软件，等级资料比较进行秩和检验，计量资料比较进行t检验，计数资料进行χ2检验。

2 结果

2.1 两组治疗1周后临床疗效比较

从表1可见，经秩和检验，治疗组与对照组临床疗效比较，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗组疗效优于对照组。

2.2 两组水肿、高血压、血尿、蛋白尿恢复正常的时间和住院时间比较

从表2可见，经t检验，治疗组与对照组水肿、高血压、血尿、蛋白尿恢复正常的时间和住院时间比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），治疗组优于对照组。

2.3 两组治疗前、治疗1周后24h尿蛋白定量、SBP、DBP、BUN、Scr比较

从表3可见，两组治疗1周后24h尿蛋白定量、SBP、DBP、BUN、Scr比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），治疗组24h尿蛋白定量、SBP、DBP、BUN、Scr改善程度优于对照组。

3 讨论

APSGN非典型表现发病有上升趋势。有文献报道，其临床可分为大量蛋白尿型、肾外症状型、亚临床型、急进性肾炎型[3]。大量蛋白尿型APSGN发病率各家报道不一，Rolovie[4]报道APSGN10%患者表现大量蛋白尿；Couser[5]指出大约20%APSGN住院患者表现为大量蛋白尿。肾小球滤过膜由肾小球毛细血管内皮细胞、基底膜和脏层上皮细胞构成，滤过膜屏障作用包括：①分子屏障；②电荷屏障；任一屏障的损伤均可引起蛋白尿。急性肾炎蛋白尿的产生主要在于循环免疫复合物沉积于肾小球基底膜，使肾小球滤过膜的屏障损伤而导致。传统治疗以控制饮食、治疗感染灶、对症（降压、利尿）治疗为主疗效差。免疫复合物引起肾小球毛细血管腔的闭塞以及免疫炎症损伤对肾小球基底膜的破坏可能是APSGN的发病原因。但是，组织缺血和发生免疫反应后引起组织器官结构破坏和功能损伤，研究表明与氧自由基的大量堆积有关。氧自由基引起肾损伤的途径有脂类过氧化性损伤、共价键结合性损伤、通过中性白细胞引起的肾脏损害[6]。

雷公藤多甙（multi-glycosides of tripterygium wilfordiihook.f，TW）是从雷公藤植物根中提取的总甙，经现代制药工艺加工而成，主要成分为环氧二萜内酯类化合物。1981年黎磊石院士等报道应用雷公藤治疗肾小球肾炎，对降低尿蛋白有显著疗效。雷公藤多甙可以通过以下机制降低肾性蛋白尿[7]：保护和修复肾小球电荷屏障、改善肾小球机械屏障的损伤、抑制免疫应答、减少细胞因子对肾小球的损伤、诱导单个核细胞凋亡、非特异性清除氧自由基；维生素E又称“生育酚”，它是脂质抗氧化剂和自由基清除剂，能降低体内脂质过氧化水平，抑制血小板黏附，可终止氧化应激的链式反应[8]。近年来越来越多的证据显示肾性蛋白尿患者存在氧化损伤，抗氧化剂可能减缓进展速度，最近研究显示实验性模型中氧自由基过度产生，维生素E能减轻这种损伤[9]。

在临床中发现，大量蛋白尿型APSGN患者有增多趋势，我们用雷公藤多甙联合维生素E治疗APSGN疗效确切。研究结果也表明，雷公藤多甙联合维生素E能较好地降低伴有大量蛋白尿的小儿急性肾小球肾炎患者的尿蛋白，改善水肿、高血压、血尿等症状，从而缩短了治疗时间和住院时间。从机理上分析，通过雷公藤多甙抗炎、抑制免疫、抑制肾脏系膜细胞及基质增生的作用，修复了肾小球基底膜的断裂，从而减少了蛋白的渗出，能较好地降低APSGN尿蛋白。维生素E通过抑制肾小球肾炎时肾组织中浸润的炎症细胞产生大量的氧自由基，减少氧自由基对肾小球基膜、上皮细胞的损伤，抑制血小板发生凝聚时与纤维蛋白交织形成血栓，减少肾小球损伤出现蛋白尿。雷公藤多甙联合维生素E从不同路径共同抑制了APSGN患者尿蛋白的生成，从而较好地控制了临床症状，缩短了治疗时间。

[参考文献]

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[2] 叶任高，沈清瑞. 肾脏病诊断与治疗学[M]. 北京：人民卫生出版社，1993：129.

[3] 杨霁云，白克敏. 肾脏病基础与临床[M]. 第2版. 北京：人民卫生出版社，2000：232-235.

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[6] 燕茂河. 氧自由基在小儿急性肾小球肾炎中的作用研究[J]. 山西妇幼卫生，2008，9（1）： 34.

[7] 顾左宁. 雷公藤多甙片治疗肾性蛋白尿机制及案例分析[J]. 中国中西医结合肾病杂志，2008，9（8）：744-746.

[8] 孙忠实，朱珠．维生素E临床应用再评价[J]．中国药学杂志，2003，38（3）：222.

免疫球蛋白e范文第4篇

【摘要】 目的 观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillinresistant staphylococcus aureus，MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法 用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡；通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY；双紫外光波长测定抗体含量，SDSPAGE电泳检测抗体纯度；Western blot免疫印迹法测定该抗体来源；ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果 抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液，抗体纯度达96%；免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性；IgY具有良好的热稳定性，对酸碱具有一定的耐受力。结论 改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY，而且有良好的生物学活性。

Abstract:Objective To observe the yield， purity， source， and stability of the methicillinresistant staphylococcus aureus (MRSA). Methods Taken the methicillinresistant staphylococcus aureus (MRSA) as antigen immuned Leghorn fowl， IgY was extracted with improved water dilution method. Antibody’s content was determined with double beam UV/VIS spectrophotometer， and antibody purity was detected with SDSPAGE electrophoresis. Antibody’s source was determined by Western blot. IgY’s constancy to temperature and acidity or alkalinity was determined with ELISA. Results Antibody contained yolk liquid at 13.3 mg/mL; purity of antibody: 96%; immunoblotting showed that IgY and IgG in chicken serum had the same molecular weight and antigenicity， IgY had favorable heat stability and tolerance to acid and base.Conclusion High yield of IgY that had highly purified specificity and favorable biologic activity can be prepared with improved water dilution method.

Key words:methicillinresistant staphylococcus aureus (MRSA); immunoglobulin of yolk (IgY); antibody

免疫球蛋白(immunoglobulin )是具有抗体活性的一种糖蛋白，主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白可分为5类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE），其中IgG是最主要的免疫球蛋白。而母鸡血液中的免疫球蛋白可传递到鸡卵黄中，并且在鸡发育过程中起保护作用，此种免疫球蛋白称为鸡卵黄免疫球蛋白(IgY) ［1］。IgG是存在于鸡卵黄中的主要免疫球蛋白，而IgM和IgA则主要存在于血清蛋白中［2］。IgY属多克隆抗体，多克隆抗体在疾病的诊断和防治方面具有许多特定优点，通常一次性大量制备是相当困难的，而多次制备又导致抗体的均一性差。母鸡一经免疫应答后，可从其卵黄中不断获得特异性的抗体。IgY纯度高、特异性强，不会像其他哺乳动物产生的抗体那样会发生交叉血清反应或过敏反应，因而它是最安全的生物制剂，可替代免疫小鼠、豚鼠或兔等哺乳动物所制备的抗体而大量生产。近年来，IgY的研究和应用是免疫学领域的热点和十分活跃的课题。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是引起院内感染的重要致病菌，其致病性强，对多种抗菌药物耐药，在治疗上十分棘手。本文用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为抗原免疫母鸡制备了抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IgY［3，4］，并对其理化性质和生物学活性进行了研究，旨在为其以后的诊断和防治应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 Leghorn鸡，25周龄，购于华南农业大学实验动物中心，合格证号：2007A025，常规饲养。

1.1.2 试剂 TrisHCl缓冲液；硫酸铵；PBS缓冲液；SDSPAGE成套电泳试剂；考马斯亮蓝R250(购自北京索莱宝科技有限公司)；聚苯乙烯酶标板(96孔，浙江黄岩新丰塑料制品厂出品)；兔抗鸡卵黄免疫球蛋白IgG（上海生物制品所血液制品室提供）。

1.1.3 菌种 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA标准菌株 ATCC25923)获自中国药品生物制品鉴定所。

1.1.4 仪器 高速冷冻离心机(HC3018R型，科大创新股份有限公司)；电泳仪(DYYII2，北京六一仪器厂)；酶联免疫检测仪（MR2000型，南京思腾医疗器械有限公司）；微量进样器。

1.2 方法

1.2.1 免疫抗原的制备 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌经接种，摇瓶传代扩大培养后，收集MRSA，用生理盐水反复洗涤3次，离心收集置于0.4%（φ）的甲醛溶液中，于37 ℃ 24 h灭活，用pH7.0 的0.01 mol/L PBS缓冲液洗涤3次，将菌液调成2×109/mL备用。取等量的菌液和不完全福氏佐剂(羊毛脂∶液体石蜡=7∶3)混合，每毫升混合液中加入卡介苗2.5 mL，充分乳化后作为免疫抗原备用。

1.2.2 母鸡免疫 12只产蛋母鸡随机分成实验组和对照组，每组6只。实验组每只每次注射1 mL免疫原，同时注射4个部位:双翅膀皮下和左右背部皮下注射，每周1次，连续注射3周。免疫后第16天测定鸡血清IgG效价(>1∶2 000)，第21天开始拣取免疫蛋。对照组用相同方法注射生理盐水。以后每月强化免疫1次。

1.2.3 抗MRSA卵黄免疫球蛋白(IgY)的分离和纯化 采用改良水稀释法(WD)［5］。步骤如下：①打蛋分离收集蛋黄液。②以6倍双蒸水稀释蛋黄液，调节pH值为5.5，4 ℃冰箱放置过夜。③离心，弃去沉淀收集上清液。④盐析：上清液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达45%，置4 ℃冰箱静置8 h。⑤离心，弃去上清液，沉淀物按每毫升卵黄液加5 mL PBS缓冲液(0.01 mol/L，pH7.0)溶解。⑥透析：将溶解液装入透析袋对蒸馏水透析除NH4+，最后一次改用对PBS缓冲液透析。⑦透析液除菌过滤，即得IgY提取液。

1.2.4 IgY的抗原性鉴定 用Western blot免疫印迹法，二抗为HRP酶标兔抗鸡IgG。

1.2.5 IgY的含量测定

采用260 nm和280 nm双波长紫外分光光度法。取2只小试管，甲管加入1.5 mL IgY提取液、1.5 mL蒸馏水，乙管加入3 mL蒸馏水，测定样品在280 nm、260 nm的吸收值。计算公式：提取液中IgY浓度（mg/mL ）=1.45A280-0.74A260。

1.2.6 IgY纯度测定 采用十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺（SDSPAGE）凝胶电泳法测定［6］。凝胶染色后扫描显示其纯度。

1.2.7 IgY的稳定性测定 用ELISA法。

1.2.7.1 IgY提取液的预处理 热处理：分别于25、37、50、60、70、80 ℃水浴内处理15 min。酸碱处理：分别置于pH1～14，室温处理3 h。

1.2.7.2 稳定性检测 用ELISA法，将上述处理过的IgY提取液稀释1 000倍后按下列步骤进行ELISA检测：①将MRSA用10%（φ）甲醛固定过夜后用pH8.5碳酸盐缓冲液稀释为3×108cfu/mL。②包被96孔酶联板，4 ℃下放置72 h。③依次加入不同预处理后的IgY稀释液(每样品各做2孔)；兔抗鸡IgG(稀释浓度1∶1 000)；底物液显色30 min后滴加1滴2 mol/L硫酸终止反应。④490 nm比色。检测所用洗涤液为0.05%Twen20、pH7.4、0.001 mol/L PBS，阳性对照为未处理IgY稀释液，阴性对照为未免疫鸡蛋卵黄提取液物。

2 结果与分析

2.1 IgY的抗原性

蛋黄提取物和鸡血清经免疫印迹试验，显示二者均在高分子量附近出现单一的特异性酶染色条带，说明卵黄提取物和鸡血清中目的条带均为鸡IgG分子，具有相同的抗原性。表明卵黄中的IgY为鸡血清中IgG传输而来，并且鸡血清中的IgG与IgY分子量相同。有报道［7，8］鸡血清IgG分子量为180 kD，由67～70 kD的重链和22～30 kD的轻链形成四聚体。IgY中的重链有4个稳定区，而哺乳动物IgG的重链只有3稳定区，IgY多出的一个稳定区为绞链区。见图1。

2.2 IgY含量

提取液经280 nm和260 nm波长测定出蛋白的含量平均为13.83 mg/mL蛋黄液。

2.3 IgY纯度

如图2所示，经SDSPAGE电泳，卵黄液提取物基本呈现为一条带，通过凝胶扫描显示其纯度高达95%。

鸡血清中该带纯度不足50%，且含有较多低分子量和高分子量带，见图3。

1-2: 蛋黄IgY; 3-4: 鸡血清IgG

图1 IgY抗体免疫印迹（略）

Fig.1 Western blot of IgY

图2 IgY的SDSPAGE电泳(从13加样逐渐减少)（略）

Fig.2 SDSPAGE electrophoresis of IgY with reducing samples from lane 1 to lane 3

1-2:鸡血清IgY; 3-4:鸡蛋黄IgY

图3 鸡血清和IgY的SDSPAGE电泳（略）

Fig.3 SDSPAGE electrophoresis of chicken serum and IgY

2.4 温度对IgY稳定性的影响

以温度为横轴，ELISA吸光值为纵轴，各温度热处理后的吸光值见图4。

从曲线中可以看出，在低于65 ℃时，IgY具有较良好的热稳定性，IgY活性下降甚微。超过65 ℃时IgY活性开始明显下降，超过70 ℃时IgY的活性迅速丧失。

2.5 pH对IgY稳定性的影响

IgY经不同pH条件处理后的抗原结合活性见图5。在pH11后活性开始下降，在pH>12时，IgY迅速失去活性。说明IgY具有较强的耐酸碱性，在中性、弱酸、弱碱环境中十分稳定。

图4 IgY的热稳定性（略）

Fig.4 Heat stability of IgY

图5 IgY的酸碱稳定性（略）

Fig.5 pH stability of IgY

3 讨论

通常应用于研究和诊断的多克隆抗体，传统方法是从免疫哺乳动物(特别是兔子)的血液中分离提取。现在也能够从免疫母鸡所产蛋的蛋黄中获取，这种技术替代传统的采血技术生产抗体，不仅可获取更有效的抗体，而且对动物的应激也最小。利用免疫母鸡生产多克隆抗体IgY的过程称为IgY技术，包含母鸡饲养、免疫过程、产蛋收集、IgY分离提取等程序［9］。目前IgY生产技术上的问题已经得到克服，方法简单实用。

本研究提取出的MRSA IgY，实验证实具有良好的耐热、耐酸碱的理化特性。IgY抗体安全环保、来源丰富、造价低、抗体含量高、特异性强，可作为诊断试剂应用于早期、快速、灵敏诊断疾病或感染。耐甲氧西林的金色葡萄球菌(MRSA)，其致病性强，在全球范围内感染率不断增加，成为包括泌尿系统在内的各种感染的重要致病菌之一，也是引起院内感染的重要致病菌［10］。临床上，将万古霉素作为治疗MRSA感染的首选药物，但万古霉素有较强的不良反应，且随着MRSA感染的迅速增加和万古霉素的用量增加，已出现了对万古霉素产生耐药的MRSA［11］，因此在治疗上十分棘手。抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IgY有可能为临床治疗MRSA感染提供新的手段，具有一定的应用前景。

【参考文献】

［1］ 任平国，徐启红.鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）分离纯化的研究［J］.现代食品科技，2007，23（11）：24-26.

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［7］ 尹红章，李秀华，王兵，等.应用鸡卵细胞大量制备多克隆抗体［J］.中国生物制品杂志，1993，16(4):167.

［8］ 杨婷婷.鸡卵黄抗体(IgY)的提取及其在医学上的应用［J］.中国人畜共患病杂志，2000，16(3):76.

［9］ 彭玉麟，呙于明.鸡卵黄免疫球蛋白在畜禽生产中的应用前景［J］.中国饲料，2002，10(6):26-28.

免疫球蛋白e范文第5篇

【关键词】 输血反应；发生原因；防治

文章编号：1004-7484（2013）-12-7771-02

临床治疗中输血已经得到了广泛应用，但其导致的不良反应至今仍是一个阻碍输血安全的重要难题[1]。本次研究旨在通过对2010年1月――2013年1月间本院出现的输血反应的82例患者进行初步分析探讨，为临床提高输血安全性和降低输血反应的发生率提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年1月――2013年1月间本院收治的出现输血反应的患者82例，其中男性45例，女性37例，年龄在41-82岁之间，平均年龄（60.51±7.17）岁。根据患者输血成分及其反应症状进行实验室相关检查，进而确诊出输血反应的类型。

1.2 实验室检查方法 对入选患者的恶血液样品进行RH（D）定型、ABO正反定型、直接抗球蛋白实验、血浆蛋白抗体检测、不规则抗体筛选、血小板白细胞相关抗体检测。在进行抗体特异性检测和不规则抗体筛选时，除去进行菠萝酶实验、抗球蛋白实验之外还可采用盐水介质法进行试验和优化的聚凝胺技术。其中RH定型试剂、抗球蛋白试剂和ABO定型试剂均由长春生物制品所提供。

1.3 血小板抗体交叉配型、血小板抗体筛选实验 应用简易致敏红细胞血小板血清学实验技术，对血小板抗体进行筛选，对检测呈阳性的患者进行交叉配型实验，选择阴性反应的供体血小板进行输注。血小板抗体鉴定应用磷酸氯喹SEPSA实验。试剂盒购于上海血液中心。

2 结 果

本次研究的82例患者中，由于输入异性血导致了溶性输血反应的患者数41例，其中自身免疫溶性性贫血患者10例，表现为直接抗球蛋白试验阳性，Rh抗-E引起的7例，Rh抗-D引起的12例。出现荨麻疹、皮疹等过敏反应的患者20例，其中存在有血浆蛋白抗体的8例。出现发热反应的患者34例，临床表现为输血之后较输血前上升了1℃，其中白细胞抗体、血小板抗体、两者同时存在的患者例数分别为16例、2例、2例。

3 讨 论

本次研究显示，输血反应主要包括免疫反应和发热反应，主要发生原因为输入的血液和患者的血型不完全吻合，可以看出进行红细胞不规则抗体筛选和特异性鉴定具有重要的作用。在实际工作中由于检验条件的限制，未能对造成过敏反应的血浆蛋白特异性抗体进行进一步检测。

近年来临床工作中由于对于RhD阴性血液的同型输注比较重视，Rh抗-D的发生比率有所降低，但是多种抗体合并出现和其它红细胞相同抗体的发生率有所上升，Rh抗-E是最为主要的红细胞同种抗体。与此同时抗-Lex和抗-M+E+c多价抗体导致的溶血性输血反应也有相应的报道[2-3]。可见，为了达到血液成分输注的较好相容性，对输血不良反应有效进行预防，在临床实际工作中要对献血者和输血患者进行多种介质的抗体筛选。因为盐水介质法只能对IgM抗体进行有效检测，对于IgG抗体敏感性很低，因此可能导致对临床有意义的抗体的漏检[4]。多种检测技术可有效提升血型配合程度，对于输注的红细胞的存活起到有效的保护作用[5]。改良Polybrene、抗人球蛋白等非盐水介质法，可有效提高检验的准确性[6]。

要真正达到有效预防和减少输血反应的发生，在进行输血之前应当对患者和献血者进行全方位的免疫血液学检测，其中包括有血型鉴定、交叉配合试验等，同时应用Polybrene、SEPSA等最新研发的技术，并应用白细胞过滤器将血液内的白细胞等成分去除。将以上方法联合应用可显著提高输血的安全性和有效性。

参考文献

[1] 向东，金丽，丁苏鄂，等.Polybrene方法的改良及其应用[J].中国输血杂志，2007，12（3）：166.

[2] 刘达庄，陆萍，王健莲，等.血小板同种抗体与输血效果[J].中国输血杂志，2009，6（2）：76.

[3] Nordhagen R，Flaathen ST.Chloroquine removal of HLA antigens from platelets for the platelet immunofluo rescence test [J].Vox Sang，2012，48（2）：156.

[4] Schmidt NJ，Lennette EH，Ho HH.An apparently new enterovirus isolated from patients with disease of the central nervous system [J].J Infect Dis，2008，129（3）：304-309.