1方法

1.1亚甲蓝标准品的制备

精密称取亚甲蓝粉末38mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，混匀，此为亚甲蓝储存液。精密量取亚甲蓝储存液50μL置50mL容量瓶中，用血浆稀释至刻度，混匀，配成最终浓度为1．0μmol／L的亚甲蓝对照血浆。

1.2血浆中亚甲蓝的固相萃取

将3mL固相萃取小柱数支装入萃取装置，连接真空泵并检查抽真空效果。柱的预处理：用6mL甲醇活化。加样：在其中一个小柱中加入6mL亚甲蓝对照血浆，其他小柱中加入6mL供试血浆。清洗：待血浆完全吸入小柱后，用30％的甲醇6mL清洗。洗脱：用含1％乙酸的甲醇溶液4mL洗脱。离心：将洗脱液离心（3500r／min，10min），取上清液作为样品溶液。

1.3亚甲蓝含量测定

用含1%乙酸的甲醇溶液作试剂空白，在（654±2）nm波长处测定各管吸光度。亚甲蓝含量计算公式：供试血浆吸光度÷对照血浆吸光度×对照血浆亚甲蓝浓度（1．0μmol／L）。

1.4重复性试验

取不同规格的病毒灭活血浆标本各1份，重复测定10次，考察试验的稳定性。

1.5统计学处理

实验结果用spss14.0统计学软件进行统计学处理，资料用x±s表示，数据比较用t检验及方差分析，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同规格的病毒灭活血浆亚甲蓝残留量测定结果

5种规格的病毒灭活血浆亚甲蓝残留量测定结果均小于0.3μmol／L，各组间两两比较，P均大于0.05。

2.2重复性试验结果

5份样品检测结果的CV值均小于7％，具有较好的稳定性。

3讨论

亚甲蓝又名美蓝，是一种酚噻嗪类化合物，也是一种表面携带正电荷的光敏剂，在临床作为解毒药物用于治疗氰化物和亚硝酸盐引起的高铁血红蛋白症和抑郁症。在MBP法中，亚甲蓝可与带负电荷的病毒核酸的G－C碱基对以及病毒的脂质包膜相结合，在可见光氧化损伤的作用下，使病毒的核酸断裂，包膜破损，从而使病毒完全失去穿透、复制及感染能力，达到灭活病毒的目的。亚甲蓝作为一种外来物质进入人体后，对人体的潜在影响尚不可知，因而控制病毒灭活血浆中亚甲蓝的残留量很有必要。

本实验采用的检测波长为（654±2）nm，考虑到在此波长下，血浆蛋白的吸收度远大于残存的微量亚甲蓝的吸收度，因此不能直接采用分光光度法检测血浆中残存的微量亚甲蓝，而采用固相萃取方法。固相萃取是一种试样预处理技术，是利用固体吸附剂将样品中的目标化合物吸附，将样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和富集目标化合物的目的。试验需要注意的是，配制亚甲蓝储存液时，亚甲蓝不需要烘干，因为亚甲蓝带有3个结晶水，易溶于水或乙醇，烘干后反而极难溶于水，溶解不充分，导致所配溶液的浓度低于预期浓度，造成检测结果偏差。从表1中可以看出，血浆病毒灭活后再使用一次性病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝，可大幅降低血浆中亚甲蓝的残留量，不同规格的血浆检测结果均小于0．3μmol／L，与2012年刚下发的《全血及成分血质量要求》（GB18469－2012）规定的标准相吻合。从表2中可以看出，采用本研究方法检测血浆中的亚甲蓝，稳定性好，不同规格的血浆检测CV值均小于7％，平均为5．42％。本试验所建立的方法工作流程严谨、操作性强、方法简便、适用于采供血机构质量管理部门的日常血液质量检查。

作者：梁启忠葛健民程玉根柏则蓉掌友湖单位：盐城市中心血站质量管理部