本文作者：陈鑫王延伟作者单位：中国人民解放军第210医院检验科

FCM在肿瘤学中的应用

由于人体中正常细胞大部分都是以二倍体存在，正常细胞在发生癌变时DNA数量会发生变化。FCM可以检测细胞中DNA的含量变化从而运用于肿瘤的检测，在病理形态学诊断上一直把FCM技术视为肿瘤诊断的一个“金标准”。但由于癌症早期缺乏客观明确的诊断指标，给治疗工作带来很大困扰，FCM的出现使肿瘤治疗有了质的飞跃。其应用主要是通过测定DNA含量实现的，包括癌前病变检查、早期癌变的检出、化疗指导以及预后评估等［6］。FCM检测标本包括实体瘤标本或穿刺标本、胸腹腔液体、膀胱冲洗液、尿液、食管镜及支气管镜钳取的少量活检组织等。DNA非整倍体的出现是癌变的一个重要标志。因此，临床上可利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA倍体分析。辅助肿瘤诊断，包括监测癌前病变、肿瘤的早期诊断、交界性肿瘤诊断和肿瘤细胞学诊断等［7］，比如通过流式细胞仪检测样品中染色体的数量来实现甲状腺对比分析染色体中的整倍体和异倍体的改变情况，从而实现对甲状腺乳头状瘤的诊断［8］。根据细胞周期分析结果，适当选用周期特异性药物或非周期特异性药物，可协助拟定治疗方案;化疗过程中肿瘤细胞DNA含量分布直方图的变化，可反映细胞动力学的变化，作为评估药物疗效的依据［9］。大量临床实验已经证实，FCM在肿瘤学检验诊断方面的准确率很高，可以达到一般的细胞诊断。由于它具有自动化和处理量大的优点，因此已经逐渐成为肿瘤诊断学方面的首选工具。另外，FCM在评价B细胞淋巴瘤方面具有重要的临床意义。由于B细胞根据成熟度不同可以分为B淋巴母细胞、成熟细胞及浆细胞，而不同细胞和不同的疾病中所表达出来的抗原不同，因此可以通过不同抗原染色达到免疫分型的作用，从而诊断出肿瘤细胞的不同亚型，有助于选择正确的治疗方案［10］。

FCM在血液学中的应用

FCM在各种血液病的诊断、治疗和预后判断方面也起到了十分重要的作用，主要是通过分析外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测来实现的。由于不同的血细胞系统都有其特有的表面抗原，FCM通过采用特异的单克隆抗体，借助于不同的荧光染料可同时检测一个单细胞的不同参数，根据所测的参数结果来判断出该血细胞的属性。在各种急性白血病的诊断和鉴别中，一般形态学检查很难区分，而FCM就起到了举足轻重的作用。FCM在白血病免疫分型应用方面也起到重要的作用。目前国内外均主张采用FCMCD45/SSC双参数散点网设计方法进行白血病免疫分型。该方法可以将骨髓细胞清晰地分成淋巴细胞、成熟粒细胞、单核细胞、幼稚细胞和有核红细胞群，排除了正常细胞对免疫分型的干扰，使细胞免疫分型的准确性大大提高［11］。FCM在血小板相关疾病的诊断中也有许多应用。当受到外界刺激时血小板会被活化而发生一系列改变。从血小板膜的糖蛋白表达水平的高低可判断血小板的活化程度，FCM通过测定血小板膜糖蛋白的表达情况来为血小板膜糖蛋白异常所致疾病的诊断提供依据。在血栓性疾病的诊断和治疗中，这种测定可以评价活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前状态发生、发展中的作用［12］。FCM在血液学中的临床应用主要包括:白血病的检测、淋巴瘤的检测、混合性白血病、部分髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病、微小残留病灶白血病、血小板相关疾病等方面［13］。此外，在网织红细胞、微小残留病灶的检测等方面，FCM均有广泛应用。

FCM在免疫学中的应用

机体是否患病的一个重要指标是免疫状态是否正常，FCM技术目前已广泛用来监测机体的免疫状态，T、B和自然杀伤淋巴细胞的水平是检验免疫状态的一个重要指标。其中T细胞主要包括Th和Ts两个细胞亚群，Th细胞是T细胞中表面分化抗原簇标志为CD4+的一种亚群，而Th细胞是以CD8+为表面主要标志的T细胞。CD16和CD56等是自然杀伤细胞的表面主要标志;CD19是B细胞的表面标志［14］。通过表面标志物质监测各细胞及细胞内各种细胞因子在体内的水平，以及对患者淋巴细胞各亚群数量的测定，可监控患者的免疫状态，并作为诊断、治疗相关疾病的重要依据。FCM结合单克隆抗体技术与普通免疫学相比具有定量准确的优点，在免疫学临床主要应用于对细胞表面抗原、细胞内抗原、细胞膜受体和癌基因蛋白进行定量检测，并且已经取得了长足的发展。FCM结合单克隆抗体技术在人体细胞免疫功能方面的评估具有重要的意义。有报道对外周血淋巴细胞免疫表型的参考值及其种族、性别、年龄等影响因素进行了探讨［15］。

FCM在其他方面的应用

1FCM在器官移植中的作用

在器官移植中，FCM可被用来判断供者与受者配型是否合适，并鉴别和定型同种异体反应抗体。FCM还可通过监测移植后免疫表型的变化来预测移植后的免疫排斥反应、细胞免疫治疗效果以及移植的存活情况等，可以更敏感地预测排斥反应的发生，从而为临床治疗提供有效依据［16］。

2FCM在细胞凋亡方面的作用

FCM是目前应用较多的对细胞凋亡进行分析和检测的方法，结合荧光染色，可对单细胞做多参数分析。FCM除了可以定量监测细胞凋亡数和凋亡指数外，还可同时测定凋亡细胞发生于某个特定的细胞周期;通过测定细胞的增殖率与死亡率，可以早期测定药物的疗效。FCM技术在细胞凋亡方面的另外一个优势在于它可以将凋亡和坏死区别开来［10］。

3FCM分析神经系统疾病

FCM技术在神经系统疾病中的应用主要是分析脑脊液中T淋巴细胞及其亚群，根据脑脊液中的T淋巴细胞亚群不同来进行疾病诊断和治疗。在分析神经系统炎性疾病方面，FCM技术比常规的脑脊液检测具有更高的敏感性，并可同时分析出脑脊液免疫状况，对神经系统炎性疾病病情的了解和监测具有一定的临床意义［17］。

4FCM检测冠心病患者

血清P选择素水平可早期反映冠状动脉损伤事件，因其与Gensini冠状动脉病变评分呈正相关，也可用于检测冠心病病情及预后判断。在检测冠心病患者方面，FCM与其他技术相比的优势也在于它的敏感性，其敏感度为酶联免疫吸附试验的25倍［18］。

5FCM在精液检测中的应用

主要是通过对不同时期的细胞数据和精子的各种指标进行分析，为临床诊断精子发生障碍的性质、原因和程度提供客观的数据支持，对无、少及弱精子等的判断、治疗及治疗效果进行评估［19］。