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细胞生物学实验

细胞生物学实验

细胞生物学实验范文第1篇

【关键词】医学细胞生物学实验教学PBL模式

前言

作为生物医学领域重点学科,医学细胞生物学专业性强,囊括诸多理论、概念、实验内容等。其中,实验教学尤为关键。其能够把理论、实践结合起来,对课堂知识加以巩固,培养医学生的创新能力、动手操作能力等,增强课堂有效性,为后续各类相关学科的学习奠定良好基础,引导学生对所学知识进行融会贯通。

1.医学细胞生物学实验教学问题

1.1教材实验内容陈旧单一

在现有教材中,医学细胞生物学实验内容丰富,操作过程完整。教师照本宣科,向学生逐一讲解实验操作流程及各个步骤。课堂之初,学生没有预期相关内容,课堂上又没有预留出充足的思考时间,导致实验教学过于枯燥,又不具备探索性。这使学生过于依赖教材标准答案,导致医学细胞生物学实验教学过程缺乏思考和创新。

1.2教师教学方法不当

开展医学细胞生物学实验时,教师为了避免学生在实验中出现错误,总是再三强调实验内容、方法、流程及相关注意事项,使学生在实验操作过程中比较顺利。这一过程中,学生严格按照教材内容、教师要求等开展实验,课堂讨论、提问等不足,仅是简单重复上书本上已有的实验内容及知识[1]。这种实验方法违背了医学细胞生物学的探索性,导致课程教学过程中,趣味性不强,很难对学生的思维能力、问题分析能力等进行培养。

2.医学细胞生物学实验教学创新方法

2.1问题导向法

问题导向法即PBL,在医学细胞生物学实验教学中备受青睐。这一教学模式,以问题为导向,将学生作为课堂主体,在教师引导下,进行自学和讨论。在临床实践中,依据课程背景、教学内容等,带领学生分组讨论,通过提出问题、查阅资料、研究讨论、总结反思获取相关知识,熟练掌握正确的实验操作方法。具体实施方法如下:教师提出问题或任务之后,要求学生把观察对象、实验方法等确定下来,通过课堂探究,给出正确答案,由教师点评。

2.2多媒体实验教学

医学细胞生物学涵盖的专业实验内容、知识点等比较多,倘若采用传统实验教学方法,很难把细胞内部结构及功能描绘出来,教学内容抽象,实验操作难度大。发挥网络多媒体优势,在医学细胞生物学实验课堂上加以应用,依托线上指导,完成实验过程,降低学习难度。将图片、声音、动画等融入实验教学中,使医学生物细胞学课堂具备动态性特征,实验教学质量和效率兼具。例如,染色、离心等相关实验,操作难度大,耗时长。借助网络多媒体,向学生展示往届学生实验效果及不规范操作,使学生对该实验内容、流程具备深刻的认识和了解,从而成功参与到医学细胞生物学实验中。

2.3自主探索法

医学细胞生物学中涉及到的各类实验相对比较难,教师往往需要花费大量时间做准备工作,为学生提供最佳实验时间、条件等,使之规范操作,以保证实验准确度。这种实验教学方法对医学生创造能力培养非常不利。以“利用甲基绿—派洛宁染液进行细胞内DNA和RNA染色观察”这一实验教学为例,在实验之前,反复向学生强调实验标本大小、染液染色时间等,导致学生课堂主动性不强。实验过程中,依据医学细胞生物学特性及要求,给予学生充足的自由,使之自主参与到变量设计中,在不同变量条件下,探索实验结果。通过这种方式,提高学生的实验积极性[2]。完成实验操作之后,带领学生总结实验结果,回顾实验过程,真正把实验原理、方法等了解透彻。

细胞生物学实验范文第2篇

关键词:细胞生物学;教学经验;准备工作

细胞生物学实验作为理论课的必要补充,除了进一步巩固理论知识之外,在培养学生科研思维、创新精神、提高学生动手能力等方面发挥着至关重要的作用。然而实验教学的前期准备是保证实验课顺利开展,并预期教学效果的基础。因此做好实验准备工作就显得尤为重要。

1仪器设备的检查

细胞生物学实验所需的实验设备主要是显微镜、移液器、离心机、恒温水浴锅、二氧化碳培养箱、超净工作台、高压锅等。实验课前对所需仪器设备都必须认真调试和校正。在细胞生物学实验中使用频率最高的仪器设备就是显微镜、移液器和水浴锅,在使用前必须逐个排查所需实验设备的稳定性和所存在的问题。比如,显微镜会存在物镜不清楚、粗调或细调下滑、移片器或片夹损坏等现象;恒温水浴锅会出现温度不稳定现象,如设定温度和实际温度显示有很大出入,就不能保证试验时所需的恒温等现象;移液器会出现套柄松动、套柄裂开、密封圈磨损、活塞受损等现象;仪器设备存在以上的异常情况都会严重影响实验结果,所以,实验前必须及时维修和妥善处理。

2实验器械的准备

细胞生物学实验对器械的需求特别严格,相对准备工作也比较繁杂,特别是细胞培养的实验,要达到绝对的无菌条件,才能保证实验顺利开展。离心管、培养瓶、冻存管、滤器、手术剪刀、眼科镊子、手术刀柄等器材除了清洗之外,还必需高压灭菌。以往是把需要灭菌的各种器械(剪刀、镊子)单独用牛皮纸包扎并做相应的标识后,进行高压灭菌并烘干,然后再按实验所需,将处理后的各种器械放在铝制饭盒里,以超净台为单位,每个超净台一盒。可是在学生实验过程中发现弊端很多,一来是学生在操作过程中,不能立即找到所需器械,导致实验所需时间延长;二是有的学生不认真看标识,打开纸包发现不是自己所需器械,继续找继续打开,这样就失去了灭菌的意义。通过多年积累的实验准备经验和使用中存在的情况,现在是先用锡纸把各种器械的尖(头)包严,然后再把一组所需的各种器械用牛皮纸包扎一包,放在饭盒里直接高压灭菌并烘干,然后以超净台为单位直接摆放。通过方法改进,既方便学生的使用,又避免了器械的污染,达到了无菌操作的要求。同时提高了学生对细胞培养所用物品清洁度的认识,并增强了无菌观念和学习各种无菌处理的方法。

3试剂的配制

生物染料特别是活体染料绝大多数是具有特异性的。应该根据不同的实验内容准确选用特异性染料。詹姆斯绿B是一种活体染色剂,能穿过细胞膜,可以特异性地和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合,从而出现蓝绿色;而在周围的细胞质中染料被还原成无色。因此,配制詹姆斯绿B染液必须要快速,为防止被氧化,需要立即置于4℃的冰箱保存。配制其他试剂的要求也相当严格,如“PEG(聚已二醇)法诱导细胞融合”实验中使用的50%PEG溶液,配制的时候条件要求相当严格,首先将50gPEG放入100mL的广口瓶中,高压灭菌20min,让其冷却至50~60℃,勿让其凝固。再加入50mL预热至50℃的GKN溶液中,充分混匀,然后再置于37℃水浴即可。因此,合理的配制染料和试剂,是保证实验成功的重要环节。

4执行预实验

预实验是整个实验教学过程中不可缺少的重要环节。每次实验课前必须对每个实验项目都要认真一一进行预试实验,通过预实验可以检测试剂的配制效果、熟悉操作过程、摸索实验条件,及时发现问题、从中掌握第一手资料。同时,由于细胞生物学实验受很多因素的制约,实验条件要求较高。即使有一点失误,都会直接导致实验失败或效果不理想。比如“动物骨髓细胞染色体标本的制备与观察”实验中使用的0.1%秋水仙素,必须使用经高压灭菌后冷却到室温的纯水配制,配好后还必须置于4℃冰箱避光保存,使用前严格按用量取出。如果在常温下放置过久或使用过程中没有避光,就会出现染色体形态不好的现象。这是通过多次认真的预实验,我们总结了0.1%秋水仙素最佳的使用方法。还有实验中的鸡红细胞储备液,最初我们采用的是Ala-ver液。资料介绍此储备液可在4℃冰箱保存一周。但经教师多次预实验及本科生实验证明,该储备液所保存的红细胞只有在24h内使用实验效果良好,如果超过24h就会出现严重溶血现象,经镜检发现,细胞膜已完全破裂。为此,我们对此储备液进行了改良,并与此储备液的保存效果进行了对比实验。所以,特别是针对新开设的实验项目,我们必须严格按照实验方法的要求,先认真做好该实验的一些前提准备,再按照实验具体操作步骤来做预实验,在预实验过程中,若没有结果或出现的结果不够理想,都必须分析和摸索引起这些情况出现的原因,并及时采取措施重新试验,直到结果理想为止。只有这样反复的进行预实验,才可排查实验过程中可能存在的问题,从而保证了实验的质量及效果。

5提升实验准备和预实验能力

实验准备是脑力劳动和体力劳动的结合,是实验技术和基本理论的结合。将自己的经验与体会记录下来,和大家交流经验在实验准备过程中不断积累、总结经验、创新,才能提高实验准备和预实验能力,从而促进教学质量的提高。

参考文献:

[1]魏玲,张小萍.提高细胞生物学实验教学质量需重视实验准备工作[J].蚕学通讯,2010(3)30:45-48.

[2]许杰,钱杰.如何做好细胞生物学实验教学准备[J].教育教学论坛,2013(17):47-48.

[3]肖静,杨智敏,廖吉文.浅谈《细胞生物学》实验教学准备工作中的几点体会[J].遵义医学院学报,2004(2)27:210-211.

[4]任丽丽,杨黎明.细胞生物学实验教学准备工作的体会[J].继续医学教育,2014(10)28:81-82.

细胞生物学实验范文第3篇

医德教育不只是人文社科类教师的职责,而是全体教师的职责,医德教育应贯穿渗透于整个专业教育中。在医学细胞生物学实验课中,时刻加强学生医德医风的教育。比如,在实验操作中教育学生认真细致,因为将来他们面对的是鲜活的生命,他们在对病人的诊断和手术操作中不容许一点失误,否则将会造成无法弥补的后果。因此,在实验课上要求学生每一步操作都要小心翼翼,将实验操作想象成对病人的手术。另外,一些学生在写实验报告时出现错别字,不善于总结分析实验结果,这时要提醒学生在未来的工作中一旦病例上出现错误或者没有对病人的病情进行认真的分析都可能导致严重的医疗纠纷。通过这些在实验课中发现的问题教育培养学生一丝不苟、严谨细致的工作态度,提高医学生的整体医德医风。

2教学方式的改革

兴趣是学习最好的老师,但是现在单的教学方式往往使学生处于被动地位。因此,改变学生的学习地位,配合多元化的教学方式来调动学生学习的积极性成为亟待解决的问题。

2.1变被动学习为主动学习

中国当前的教育模式几乎仍是填鸭式教学,而实验课的教授更是老师讲解为主,学生完全处于被动地位。许多学生在实验过程中不知前因后果,只是草率结束实验,课后将实验内容抛之脑后,一无所知。为调动学生的主观能动性,在实验开始前,只是简单介绍相关的知识,提出实验目标。然后由学生在课下预习实验内容,查找资料,熟悉每一个实验步骤的原理、所需试剂的作用及配备方法,做好充足的准备工作。在实验结束后,分组讨论在实验过程中出现的问题,及对结果的多样性进行分析,鼓励大家畅所欲言,探讨该次实验内容能够用于解决哪些实际的问题。最后,要求学生认真整理出一份实验报告。在整个实验过程中,老师只起到引导、鼓励及评价的作用,而使学生处于主动地位。突然之间的角色转变使很多同学学习起来有些吃力,但是坚持一学期下来,发现学生的自主学习能力明显提高,这正是“授之以鱼,不如授之以渔”。

2.2变传统教学为多元化教学

现在一些高校的实验课教学方式仍为传统的板书讲解,这种教学方式早已不符合时代的发展。为使学生更直观生动的了解实验过程,将实验过程制作成录像,上课前通过多媒体播放教学示范录像。例如,对于原代培养细胞实验,前期的准备工作繁琐,耗时长,不可能每个同学都参与,这时通过播放教学示范录像[6],使学生深刻了解整个实验的来龙去脉。另外,在实验课上由“老师讲”变为“学生讲”。课前要求学生预习实验目的、原理及注意事项等,上课时随机挑选学生为大家讲解,其他同学对讲解的内容进行补充和纠正。在显微镜的使用实验课中,将学生分为2~3人的小组,小组中的每位同学分别操作显微镜,其他同学在旁观看,指出这位同学在操作过程中存在的问题,进而加深学生对显微镜使用方法及注意事项的印象。

3考核方法的改革

随着对实验课的重视程度提高,实验课成绩在总成绩中所占比例也相应增加。实验课的考核不再只依靠实验报告,而在于对学生实验原理的掌握及实验操作能力的评价。通过课前提问形式,了解学生的预习情况并给予一定评分。在实验课结束时,随机抽取部分学生,考核其对该次实验中关键技术的掌握,如显微镜、离心机、天平等仪器的正确使用及临时装片的制备,并叙述在操作过程中的注意事项等,从而对学生的操作技能进行测试。另外,在批改实验报告时,主要依据学生对实验数据的分析及总结程度给予评分,强化学生的分析思考能力。

4结语

细胞生物学实验范文第4篇

关键词:细胞生物学;医学遗传学;实验教学;教学质量

中图分类号:G40-034 文献标志码:A 文章编号:1008-3561(2015)03-0085-01

细胞生物学和医学遗传学是医学院校的基础课程,也是一门实验性很强的学科。细胞生物学和医学遗传学的教学分为理论教学和实验教学两部分。实验教学与理论教学联系密切,相辅相成,不可或缺。细胞生物学和医学遗传学实验教学要重视对学生独立观察、思考和操作能力的培养,学习能力和创新能力的培养,以及分析问题、总结问题能力的培养。综合多年来对临床医学、口腔医学等专业学生的实验教学实践和探索,笔者就实验教学提出几点体会,以期培养出高素质专业型医学人才。

一、提高教师自身素质

首先,教师应通过网络高校教师在线培训和查阅最新文献,不断学习新的理论和技术,应用到日常实验教学中,让学生了解一些科学前沿的知识,充实教学内容。其次,基础学科教师还要兼具临床医学方面的知识,为学生日后走向临床打下坚实的基础。另外,高素质的师资队伍是保证实验教学水平不断提高的关键。近年来,我科室教师不断提升自己的学历,通过在职进修、脱产学习等方式提升师资队伍的学历水平。

二、改变教学模式,提高学习兴趣

在以往的教学中,学生的一切实验行为都由教师安排,教师是主体,学生只是被动地接受,忽视了学生的自主意识。标本片都是教师给准备好的,直接在显微镜观察即可。整个教学过程学生缺乏主动性,教学效果欠佳。如学生进入教室,首先就把教师提前在黑板上写好的目的、原理和实验步骤抄写下来,显微镜下观察标本片也是敷衍看看,结果有的就按照书上画,或者互相抄袭,如同完成任务一样完成实验报告。事实上,在细胞生物学和医学遗传学实验课中,学生也应该是实验的参与者,而不是任务的执行者。因此,适当地安排一些由学生自己动手制作完成的实验用品对于提高学生的学习兴趣能起到很好的作用。如以前我们实验课学习显微镜的使用,我们让学生学会显微镜如何操作后,给学生一些已经制作好的各种组织的标本片进行观察。而现在,我们让学生自己动手制作标本片,取材更是取自学生自己的口腔上皮细胞,这样,学生的制作热情和观察热情就被激发了出来。每个学生都积极地制作一张自己的口腔上皮细胞标本片,放在显微镜下仔细观察,认真绘图。有的学生还用手机拍下来,看着自己亲手制作的标本片,很有成就感和参与感,教学效果显著提高。

三、采用多种教学手段辅助教学

有些实验理论较为抽象,学生理解起来有一定的难度。尤其是对于文科学生,细胞生物学和医学遗传学的知识以前几乎没有学习过,基础薄弱。怎么能让这些学生快速入门呢?我们除了常规的板书以外,应利用现代科技手段、多媒体动画辅助教学,真正做到抽象的理论直观化,让学生对于整个实验原理是如何发生发展的一目了然。举例来说,在细胞有丝分裂观察实验中,细胞有丝分裂的过程既是重点又是难点,复杂且抽象。但是借助于三维立体动画展示,可把整个有丝分裂过程,即两组完全一样的染色体如何精确分离的过程清晰明了的呈现在学生眼前。通过这样的展示,学生轻松地掌握了实验理论,为接下来的细胞形态观察和画图打下了良好的理论基础。

四、改进教学方法,理论与实际相结合

教师在教学过程中常规使用的教学方法是讲授法,这样学生理解起来比较被动,只能跟着教师的思路走,忽视了学生对知识获得的自主性和能动性。现在,我们除了讲授法外还加入启发式教学,并注重理论与实际结合起来,调动了学生思维的主动性,为学生的持续发展创造了更广阔的空间。例如人类染色体观察与核型分析实验中,在讲授正常染色体形态、数目前,先提问学生是否见过先天愚型的人。学生在教师的启发下开始积极思考,回答出自己见过哪些人,有什么样的特征,如表情呆滞、发育迟缓、身材矮小等。教师接着提问这些人为什么有这样的缺陷,学生一般答不上来。教师就可以解释因为他们多了一条23号染色体,就造成了人生这么大的缺憾,所以今天我们要先把正常染色体的形态数目了解清楚,才能对一些遗传学疾病采取积极地预防措施。通过这样的讲解,学生明白了学习和研究染色体的重大意义,学习态度也认真了许多。同时,还激发了学生投身科研、造福人类的热情。

五、教学相长,亦师亦友

传统教学中,学生对老师是比较敬畏的,课堂气氛也比较严肃,教师在前面讲,学生在下面做笔记。实际上,我们应该改变这种刻板的场景,与学生多一些交流与沟通。如可让学生畅谈自己对于某些理论、某些现象的看法,教师给予纠正和补充,从而加深学生对知识的理解与记忆。尤其是实验课,学生有任何问题随时都可以提出来让老师帮助解决,或者学生有更好的建议可以应用于实验教学,这样才能做到教学相长。

通过以上几点,充分调动了学生的学习积极性,活跃了课堂气氛,丰富了教学内容,培养了学生严谨的实验态度和科研意识,细胞生物学和医学遗传学实验教学取得了较好的教学效果。

参考文献:

细胞生物学实验范文第5篇

【摘要】 目的:研究131I标记的Rituximab对B细胞淋巴瘤细胞的生物学效应以及对荷人Raji细胞移植瘤裸鼠的放射免疫治疗效果,为放射免疫导向治疗提供实验依据。方法:体外培养人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞,裸鼠皮下接种Raji细胞成瘤,IODO- GEN法将131I标记于Rituximab,将细胞分为131I- Rituximab组、单纯抗体组、单纯核素组及空白对照组4组,流式细胞仪检测各组Raji细胞凋亡和细胞周期;取30只成瘤裸鼠随机分成高、中、低剂量治疗组及单纯抗体组、单纯核素组、空白对照组6组,进行裸鼠的放射免疫治疗研究。每周测量裸鼠荷瘤大小1次,4周后处死裸鼠,取瘤称重,常规病理分析。结果:131I- Rituximab组凋亡率高于其他各组;131I- Rituximab组细胞周期发生变化,大部分被阻滞在G2期。裸鼠各治疗组与对照组比较,肿瘤生长减慢,肿瘤生长抑制率具有剂量时间依赖性,组织病理学检测显示治疗有效。结论:131I- Rituximab能够诱导Raji细胞凋亡并调控细胞周期,而且可特异性地定位于肿瘤组织,发挥放射免疫导向治疗作用,具有潜在的临床应用价值。

【关键词】 放射免疫治疗; B细胞淋巴瘤; 抗CD20单克隆抗体; 131I-Rituximab

非霍奇金淋巴瘤(NHL)是最常见的淋巴系统恶性肿瘤之一,其绝大多数是B细胞来源,放射免疫治疗(RIT)属于内照射治疗,已成为目前B细胞NHL治疗的研究热点。本实验将Rituximab-人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体偶联放射性核素131I,从体外和体内实验两方面研究其对B细胞淋巴瘤的生物学效应。

1 材料与方法

1.1 细胞与实验动物

人B淋巴瘤细胞系Raji细胞购于中国科学院上海细胞研究所;BALB/c裸鼠(4~6周龄)购于中国科学院上海实验动物中心,于东南大学医学院SPF动物房饲养。

1.2 主要试剂及器材

Rituximab购于罗氏制药公司,Na131I购于南京森科公司,Iodogen(四氯二苯基甘脲)由苏州大学医学院核医学实验室提供,流式细胞仪为FACS Vantage SE型,SPECT显像仪为德国西门子公司E.CAM9358型。

1.3 细胞培养

用含10%胎牛血清、100 U·ml-1青霉素、100 U·ml-1链霉素的RPMI 1640培养液,在37 ℃、5%CO2、95%湿度的培养箱中培养,2~3 d传代1次,取对数生长期细胞用流式细胞仪测定CD20表达率。

1.4 131I- Rituximab的制备

应用IODO- GEN法[1]标记,标记产物经Sephadex G- 25分离纯化,检测标记产物的标记率及放射化学纯度。

1.5 体外实验

1.5.1 分组 细胞换液后24 h,将细胞浓度调整为1×106 ml-1,分为4组。A组(131I- Rituximab组):将131I- Rituximab加入Raji 细胞中,使131I- Rituximab的最终比放射性活度为3 μCi·ml-1(1 Ci=37 GBq),Rituximab的最终浓度为50 μg·ml-1;B组(单纯核素组):将Na131I加入Raji细胞中,使Na131I的最终比放射性活度为3 μCi·ml-1;C组(单纯抗体组):将Rituximab加入Raji细胞中,使Rituximab的最终浓度为50 μg·ml-1;D组(空白对照组):加入等量培养液。上述各组剂量参照文献[2]确定。

1.5.2 观察指标 加药24 h后显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期:以Annexin Ⅴ- FIFC/PI双染法测定药物对细胞的早期诱导凋亡作用,采用DNA倍体分析法检测细胞周期,重复测定3次。

1.6 体内实验

1.6.1 B细胞淋巴瘤动物模型的建立 将处于对数生长期的Raji细胞,用不含血清的RPMI 1640调整细胞密度为1×107 ml-1,每只裸鼠皮下接种0.2 ml,30 d后部分裸鼠成瘤,挑选肿瘤直径约为0.8 cm的30只成瘤裸鼠进行实验分组。

1.6.2 实验动物分组 成瘤裸鼠模型随机分为6组(每组5只)。a组(高剂量组):尾静脉注射131I- Rituximab 400 μCi;b组(中剂量组):尾静脉注射131I- Rituximab 150 μCi;c组(低剂量组):尾静脉注射131I- Rituximab 50 μCi;d组(单纯抗体组):尾静脉注射Rituximab 0.8 mg;e组(单纯核素组):尾静脉注射Na131I 150 μCi;f组(空白对照组):尾静脉注射生理盐水0.2 ml。上述各组剂量参照文献[3]确定。

1.6.3 治疗效果观察 (1)观察实验动物的一般状况包括精神状况、皮肤光泽、活动度、饮食、饮水情况,并称体重;(2)每隔3~4 d测量肿瘤的长径和短径,根据公式计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率(IR):V=ab2/2(a为长径,b为短径),IR=(V0-Vn)/V0×100%(V0代表非治疗组的肿瘤体积,Vn为治疗组的肿瘤体积);(3)SPECT显像:分别于注射后4、24、48、72、96、168 h显像;(4)组织病理学检测:治疗4周后处死裸鼠分离肿瘤,称重后用10%福尔马林固定,HE染色,作常规病理检查。

1.7 统计学处理

采用SPSS 13.0软件处理,进行方差分析,两两比较采用LSD法。

2 结

2.1 Raji细胞形态改变及CD20表达率

倒置显微镜下可见细胞为圆形,生长旺盛,聚集成团,透明度高,折光性强。流式细胞仪测定CD20表达率为98.03%。

2.2 131I- Rituximab的标记率及放化纯度

131I- Rituximab采用纸层析法测其标记率为90%,其稳定性好,4 ℃贮存24 h,其放化纯度为91%。

2.3 体外实验结果

2.3.1 镜下细胞形态学改变 A、B、C组细胞生长受到抑制,数量减少,细胞收缩,胞核变小。

2.3.2 细胞凋亡情况 细胞凋亡率 A组为59.94%,B、C、D组依次为48.21%、40.40%、1.06%,各组间差异具有统计学意义(P

2.3.3 细胞周期分析 (1)A组有17.13%的细胞截止于S期,B、C、D组依次有24.31%、25.73%、33.32%,除B组和C组之间差异没有统计学意义以外,余各组间差异有统计学意义(P

2.4 体内实验结果

2.4.1 实验动物的一般情况 b组裸鼠精神状况、活动度、皮肤状况、饮食饮水量及体重均未发现明显异常变化;a、c和d组裸鼠精神情况尚可,活动度较b组略差,饮食饮水量轻度减少;e组和f组在实验后期裸鼠精神萎靡,皮肤暗淡,体重减轻,饮食饮水量明显减少。a组分别在注射后第2、3天各有一裸鼠死亡,说明剂量过高,射线对裸鼠本身有一定伤害作用。

2.4.2 131I- Rituximab对肿瘤的抑制情况 如图1所示:a、b组随时间的延长肿瘤体积无明显增大甚至有所缩小,c、d组随时间的延长肿瘤体积稍增大,e、f组随时间的延长肿瘤体积有明显增大。各组裸鼠经治疗后第4周计算肿瘤生长抑制率,结果,a、b、c、d、e组依次为48.69%、47.60%、29.60%、17.27%、6.81%,各治疗组与对照组之间差异具有统计学意义(P

2.4.3 SPECT显像 给药后4、24、48、72、96及168 h利用SPECT显像。于注射后4 h肿瘤未见明显显影,周围组织及血本底较高;24、48 h后a、b、c组可见肿瘤部位放射性浓聚(图2),e组未见明显肿瘤部位浓聚;72、96及168 h a、b、c 3组可见肿瘤图像逐渐变浅;24 h b组可见肿瘤部位放射性浓聚。

2.4.4 病理观察结果 e、f组肿瘤细胞增生活跃,可见较多的病理性核分裂相,偶见小灶性坏死;c、d组瘤细胞体积缩小,病理性核分裂相可见,肿瘤细胞核固缩、结构不清、破裂,肿瘤组织见小片坏死,部分区域肿瘤细胞全部坏死、消失;a、b组瘤细胞体积明显缩小,病理性核分裂相可见,肿瘤组织见大片坏死(图3)。

3 讨

放射免疫治疗(RIT)是近几年在分子靶向治疗基础上发展起来的新的治疗方法,即利用特异性抗体作载体,与能释放射线的放射性核素偶合,注入体内与肿瘤细胞特异性结合,实现对瘤体的内照射治疗,它不仅能杀伤与抗体结合的肿瘤细胞,还能杀伤邻近的不表达抗原及无法与抗体结合的细胞。

RIT淋巴瘤具有许多优势[4- 6]:(1)淋巴瘤细胞对射线具有高度敏感性;(2)RIT通过射线杀伤肿瘤,不必完全依赖补体依赖的细胞毒作用(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC),因此即使机体免疫缺陷、抗原表达阴性或肿瘤免疫逃避等导致抗体及免疫毒素无效时,内照射仍可发挥作用;(3)标记抗体本身固有强大的抗肿瘤效应;(4)放射性核素释放的β射线能穿透多个细胞直径的距离,因此对于周围抗原表达阴性而没有结合核素的肿瘤细胞同样也有杀伤作用,这种作用称为“交叉火力作用”(cross fire);(5)与传统的分次、短时、高剂量外照射治疗相比,RIT为持续性低剂量内照射治疗,避免肿瘤细胞在放疗间隔期DNA的修复,且持续低剂量辐射使肿瘤细胞被阻止在对射线敏感的细胞周期G2期,从而增加放射性细胞毒作用。国外对该方面研究成果显著:90Y- ibritumomab和131I- tositumomab已被FDA批准用于难治、复发性NHL及CD20阳性的转型NHL的治疗[7]。

本实验从体外和体内实验两方面研究131I标记的Rituximab对B细胞淋巴瘤的生物学效应:体内实验观察131I- Rituximab对Raji细胞的早期凋亡及细胞周期的影响,体外实验观察131I- Rituximab对荷B细胞淋巴瘤裸鼠的治疗效果。选用IODO- GEN法把131I标记到Rituximab上标记方法简单,标记率及放化纯度均在90%以上,标记物稳定,证明IODO- GEN法有很强的实用性。Raji细胞的CD20表达率达98.03%,证明CD20是放免治疗B细胞淋巴瘤的良好靶点[8],131I- Rituximab可与Raji细胞表面抗原CD20特异性结合,将131I固定到肿瘤细胞,131I所发射的β射线对肿瘤细胞产生辐射生物效应[9],Rituximab在行使载体功能[8]的同时,其所产生的补体依赖的CDC和ADCC[10]共同作用抑制肿瘤生长。

体外实验中,由于131I- Rituximab中131I所发射的射线对细胞产生的辐射生物效应,使细胞内DNA断裂、交联,影响了DNA的复制和细胞的有丝分裂。本研究显示,131I- Rituximab作用于Raji细胞后其凋亡率为59.94%,而单纯抗体组仅为40.40%。131I- Rituximab组有17.13%截止于S期,单纯核素组、单纯抗体组、对照组依次为24.31%、25.73%、33.32%,提示治疗组肿瘤细胞增殖状态不佳;131I- Rituximab组有69.01%截止于G2期,单纯核素组、单纯抗体组、对照组依次为65.10%、51.83%、50.13%,提示射线将肿瘤细胞阻滞于G2期,阻止细胞进一步分裂。以上说明131I- Rituximab具有生物导向的治疗作用,通过持续低剂量辐射,使细胞被阻止在对射线最敏感的有丝分裂期,增强放射性细胞毒作用。

体内实验中,从6组裸鼠肿瘤的增生情况及治疗后第4周对肿瘤生长的IR来看,单独使用Rituximab已经有一定的抑瘤效果,其抑瘤率达到17.27%;使用低剂量131I- Rituximab的抑瘤效果要好于单独使用Rituximab的效果,这说明核素在其中起了增强作用;中剂量131I- Rituximab组的抑瘤效果最明显,甚至使肿瘤略缩小;高剂量131I- Rituximab组由于剂量太高,虽然也有明显的抑瘤效果,但是造成了正常组织的损伤,治疗效果不理想。

总之,131I- Rituximab在体内和体外均显示了较强的特异性杀肿瘤作用,适合以后作为免疫导向治疗的药物,针对B细胞淋巴瘤高表达的CD20抗原作为治疗靶点的免疫导向治疗前景乐观。肿瘤放射免疫治疗的发展为难治性复发性B细胞NHL治疗开辟了新的天地。通过131I- Rituximab对B细胞淋巴瘤生物学效应的实验研究,希望能够为其进一步临床应用提供实验依据。

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