军人同志

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军人同志范文第1篇

根据国务院《退役士兵安置条例》和《省人民政府关于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》（府〔〕80号）精神，结合我市实际，现就做好我市年冬季退役士兵接收安置工作通知如下：

一、接收安置对象

年冬季退役士兵接收安置对象为：符合国务院《退役士兵安置条例》和《省人民政府关于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》（府〔〕80号）规定的年冬季退出现役的士兵。

二、安置原则

年冬季退役士兵安置工作实行“扶持就业为主，重点安置为辅”的安置原则。对重点安置对象实行“按系统分配任务，包干安置”的原则，由各级政府下达指令性计划一次性安置就业，并务必于接收退役士兵的6个月内，开出安置介绍信，并督促有关单位尽快落实，确保退役士兵真正上岗就业。待安置工作期间，由安置地人民政府按最低生活保障标准发给其生活补助费。对于无正当理由不服从分配者，政府不再负责安置。本人选择自谋职业的，按规定发给一次性安置补助金。一般安置对象，没有选择自主就业的城镇退役士兵，可领取自谋职业一次性安置补助金，选择自主就业的城镇退役士兵，可领取一次性经济补助金；没有选择自主就业的农村退役士兵，可领取一次性生产生活补助金，选择自主就业的农村退役士兵，可领取一次性经济补助金。一般安置对象由政府提供优惠政策扶持就业。

（一）重点安置对象（符合下列条件且未选择自主就业安置的退役士兵，可以选择由政府安排工作或者自谋职业的方式安置）。

1、服现役满12年的士官；

2、服现役期间获得大军区以上（含大军区）单位授予荣誉称号、平时荣立二等功以上奖励或者战时荣获三等功以上奖励的士兵；

3、因战致残被评定为5级至8级残疾等级的士兵；

4、烈士子女士兵；

5、服现役满10年、11年符合全程退役条件的士官；

6、服现役满上士军衔规定年限的直接从非军事部门招收的士官；

7、因公致残被评定为5级至8级残疾等级的士兵；

8、退出现役前父母已双亡的退伍义务兵和退出现役前父母已双亡的未婚退役士官。

（二）除重点安置对象外，其余的退役士兵为一般安置对象。

（三）年冬季开始，在退出现役1年内，退役士兵可自主选择参加高等职业教育、成人高等教育、普通高等教育和最短不少于3个月职业技能培训，每人只能选择其中1项，退出现役1年以上的，参加职业技能培训按《国务院关于加强职业培训促进就业的意见》（国发〔〕36号）规定执行。

三、补助金标准及资金来源

（一）、和区补助金标准

1、城镇退役士兵一次性安置补助金（一次性经济补助金）标准，根据全市上年度在岗职工人均工资收入水平确定，即中心城区城镇退伍义务兵、服役满一、二期的城镇复员士官基本补助金标准按我市上年度在岗职工人均工资收入的100%发放，转业士官基本补助金按我市上年度在岗职工人均工资收入的150%发放，从服满义务兵年限后第一年算起，每多服役一年，增加上年度在岗职工人均一个月工资的补助。

2、农村退役士兵一次性生产生活补助金（一次性经济补助金）标准，根据当地上年度农村居民人均纯收入确定，即农村退伍义务兵、服役满一、二期的复员士官基本补助金按照当地上年度农村居民人均纯收入的100%发放，从服满义务兵年限后第一年算起，每多服役一年，增加上年度农村居民人均一个月纯收入。

3、获得大军区以上（含大军区）单位授予荣誉称号或荣立二等功（含二等功）以上的、烈士子女、弟妹接枪入伍、退役时父母已双亡的退役士兵，以及七、八、九、十级残疾军人增发20%的补助金；五、六级残疾军人增发50%的补助金。

（二）、和区经费来源

金平、龙湖和濠江区的城镇退役士兵的一次性安置补助金（一次性经济补助金）及市举办的职业技能培训费用（培训标准每人按800元计），由市、区财政按1:1比例负担。农村退役士兵一次性生产生活补助金（一次性经济补助金）由区财政负担，省财政按照当地上年度农村人均纯收入的50%给予补助。

（三）、、区和县可根据上述（一）、（二）原则，制定具体补助标准，资金来源按原财政渠道解决。

军人同志范文第2篇

【关键词】人格教育；心理素质

一、通过人格教育构建学员健全的心理结构

人格是人的素质的重要组成部分，是人心理面貌的集中反映。人格教育是着眼于发展受教育者全部心理面貌的教育，其目标是使个体具有良好的心理素质与健康的心理状态，促进个体心理结构的健全发展，构建一个多层次、高效能的心理调节与控制系统，使个体潜力得到最大的发挥。通过人格教育可以促进知、情、意协调统一，建立一种完整和健全的心理结构，提高人的总和心理素质，从而有助于个体更好地适应社会环境。军队院校人格教育的基本内容应该从认知、情感和自我意识三个方面入手。首先是认知教育。军校教育不仅要帮助学员掌握先进的军事理论和广泛的军事知识，更要培养学员适应未来现代化战争所应具备的快速的思维能力、精准的判断力，合理的认知方式和健全的认知结构。其次是情感教育。情绪是心理健康的晴雨表，要使学员认识常见的负性情绪，学会调节和控制自己的情绪，防止负性情绪对心理健康的伤害，使自己经常保持稳定的情绪状况，以适应高强度、超负荷的现代化战争。第三是自我意识教育。自我是人格的核心，只有正确地认识自己，才能形成健全的人格，正确的自我认知是心理全面发展的基础。对自己能有正确认识的人是自尊、自强、自信的人。能正确认识自己的人往往具有较强的亲和力与团队合作精神，具备自我调控能力，能努力改变和发展自身的能力素质，适应不断变化的客观环境。

二、通过人格教育锻造学员坚韧的意志品质

学员健康人格的形成是与克服脆弱、鲁莽、多疑等性格弱点和各种困难相联系的。战争是以鲜血和生命为代价的激烈角逐，学员身系重大责任，将面对未来高技术战争下异常的心理压力，因而必须塑造他们勇敢顽强、坚忍不拔的意志品质。坚韧的意志品质不是与生俱来的，只有经过后天的培养和有意识、有目的的磨砺才能获得。这就要求在教学与训练中要有意识地创设困难情境，指导、鼓励学员刻苦磨练，锻造他们坚毅顽强的优良性格。实践证明，在越困难的环境下，越有能力克服困难完成任务的人，人格越完善，才能是越有希望取得成功的人。具有坚韧意志品质的军人，往往有更强的心理承受能力，面对各种应激事件时能应付自如，处变不惊，临危不惧，更好的适应战场环境，完成任务使命。因此，锻造坚韧的意志品质应成为军校学员人格教育的一项重要内容。

三、通过人格教育帮助学员树立坚定、正确的信念。保持统一的人格

信仰危机最容易造成人们心理上的崩溃，没有了精神支柱，人很难承受各方面强大的心理压力。军校学员正处在人生观、价值观的形成时期。作为年轻人他们看问题往往容易偏激和片面，常常不能正确对待和处理好自己在现实生活中遇到的挫折和困难，以致引起心理冲突和矛盾，如果长时间不能排解，就有可能积聚成心理疾患。同时，由于他们的知识和经验有限，对复杂社会问题的分析判断能力还不高，对不健康的思想意识往往缺乏分辨力和抵抗力，容易形成一些错误的态度，甚至做出非理性的行为。因此，通过人格教育，帮助学员树立和巩固正确的人生价值目标的同时，引导他们把个人理想与远大理想、社会期望结合起来，把个人的兴趣、爱好同军队发展的实际结合起来，引导他们从点滴做起，从现在做起，要让他们真正明白由“小”到“大”、不积跬步，无以至千里的道理。最终要落实在具体行动上，落实在日常的学习、训练、生活中，在实践中不断完善自己的人格，保持主观世界客观世界的和谐统一。

军人同志范文第3篇

【摘要】 目的 了解门诊妇科病人两种不同PH值范围真菌感染状况，为临床妇科医生治疗这类病人提供参考资料。方法 收集门诊妇科白带常规检查病人的白带镜检资料，同时对每个送检标本用3.8—5.4的PH精密试纸进行白带的PH直接测试，而后，将所有的检查资料分成PH≤4.5或PH＞4.5两个PH值范围进行归类统计分析。结果 总人次中PH≤4.5的白带1128人次，PH＞4.5的白带856人次。PH≤4.5的白带中有真菌感染的病人352人次，占PH≤4.5的白带的32%。PH＞4.5的白带中真菌感染的病人328人次，占PH＞4.5的白带的39%，两个百分率的卡方值为：x2=0.0800 P ＞0.05。结论 门诊妇科病人白带不同PH范围真菌感染率无显著性差异，两种不同PH状况下存在同样的感染风险。

【关键词】 菌群失调 真菌感染 PH值

【Abstract】Goal: Understood that outpatient service gynecology department patient two kind of different PH the value scope fungal infections condition， treats this kind of patient for clinical gynecology department doctor to provide the reference. Method: The collection outpatient service gynecology department leucorrhea routine inspection patient's leucorrhea microscopic exam material， simultaneously delivers examines the specimen to each to carry on the leucorrhea with 3.8-5.4 PH precise indicator papers the PH direct test， then， all inspection material will pide into PH≤4.5 or PH>4.5LIANG the PH value scope carries on the classification statistical analysis. Finally: Always people of PH≤4.5 leucorrhea 1128 people， PH>4.5 leucorrhea 856 people. PH≤4.5 in the leucorrhea has the fungal infections patient 352 people， occupies PH≤4.5 leucorrhea 32%. In the PH>4.5 leucorrhea fungal infections's patient 328 people， occupy PH>4.5 the leucorrhea 39%， two percentage card Fang Zhiwei: x2=0.0800 P>0.05. Conclusion: The outpatient service gynecology department patient leucorrhea different PH scope fungus infection percentage non-significance difference， under two kind of different PH conditions has the similar infection risk.

【Key words】flora fungal infection PH value

门诊妇科病人白带常规检查中真菌感染的感染率相当高，但这种感染在正常PH范围与异常PH范围两种状况下是否存在差别？差别有多大？带着这样的问题我们进行了调查，现将调查与分析情况作如下报导：

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 标本来源 收集门诊妇科1984例白带常规镜检结果

1.1.2 PH精密试纸：上海三爱思试剂有限公司（原上海试剂三厂生产的“试三牌”）（PH3.8-5.4）精密试纸。

1.2 方法 对送检白带进行常规检查，并同时对每个送检标本用3.8—5.4的PH精密试纸进行白带的PH直接测试，而后将所得的资料进行归类统计和分析。

2 结果

将其分成PH≤4.5和PH＞4.5两种状况，进行两样本率的比较其结果：x2=0.0800;P＞0.05，两者没有明显的差别，也就是说两种PH状况下具有同等的感染真菌的机会。

3 讨论

霉菌性阴道炎又称为“假丝酵母菌性阴道炎”，是门诊妇科病人中最常见的一种妇科炎症，其发病率有逐年升高的趋势，且反复发作的病例非常常见，这些都提示着感染的真菌的耐药趋势在增强。正常的阴道内环境是否对霉菌感染有抵御作用？妇科病人的白带两种不同PH值范围真菌感染状况如何？两种状况的感染率是否存在差别，差别是否存在显著性差异，都是我们这次调查想要了解的内容。正常的阴道内环境变化可以从白带PH的变化很直观的表现出来，因此，我们从2008年7月1日至2008年10月30日，共收集门诊白带常规检查的病人资料1984人次，对这1984名做门诊白带常规检查的病人的白带进行PH值测定，其中PH≤4.5的1128人次，占总人次的57%，PH＞4.5的856人次，占总人次的44%，从PH值测定的情况看，大部分病人的白带PH值在正常范围，小部分病人的白带PH值高出了正常范围，但在正常范围和高于正常范围的都有真菌感染阳性病例出现，PH值高于正常范围的阳性率与正常范围的阳性率比较， 经卡方检验：x2=0.0800 P＞0.05两者没有显著性差异，于是认为两种不同的PH 范围具有同等的感染机会。霉菌性阴道炎大部分是由于接触感染所致，文献介绍的很多感染途径都没有离开这一点，我们的调查也显示不管是正常PH范围（PH≤4.5），还是异常PH范围（PH≤4.5），都存在同样的感染风险。 参 考 文 献

[1] 吕荣.1006例白带异常分泌物的病原学分析[J].中国医学文摘（计划生育妇产科学），2008，（06）.

[2] 李晶，苗志峰.女性阴道分泌物涂片染色结果分析[J].中国妇幼保健 ，2007，（26）.

[3] 范文燕，袁兆康.已婚育龄妇女生殖道感染现状及干预研究[J].实用临床医学 ，2006，（06）.

军人同志范文第4篇

【关键词】 农村 最低生活保障 马丁法 价格指标

马丁法是我国农村最低生活保障制度实施过程中测定最低保障标准的主要方法。我国农村最低生活保障制度是指由地方政府为家庭人均纯收入低于当地最低生活保障标准的农村贫困群众，按最低生活保障标准，提供维持其基本生活的物质帮助。我国农村最低生活保障制度的实施，对改善农村贫困人口的生活状况起到了极大的帮助。在政府提供基本生活的物质帮助时，必须确定最低生活保障对象。确定最低生活保障对象必须确定保障对象的家庭人均纯收入和当地最低生活保障标准，即将家庭人均纯收入低于当地农村最低生活保障标准的家庭成员作为最低生活保障对象。因此，准确计算保障对象的家庭人均纯收入和合理确定当地最低生活保障标准，并使两者具有可比性是执行农村最低生活保障制度的关键。

我国现在很多地方仍缺乏当地的农村最低生活保障标准。以云南为例，只是以国家农村贫困线作为标准来确定农村最低生活保障对象，然后根据地方财力确定几档补助标准，补助标准基本和最低生活保障标准脱节。在现实中，各地物价差异比较明显，以国家农村贫困线作为当地农村最低生活保障标准，往往存在高估或低估农村最低生活保障标准的问题。高估农村最低生活保障标准导致地方财政压力较大，低估标准导致应该救助的农村居民未纳入政府救助。但各地为何不设定当地的农村最低生活保障标准，原因多方面的，其中一个主要原因是确定农村最低生活保障标准方法仍有许多待讨论的问题。例如，我国确定最低生活保障标准的方法是马丁法，据资料查阅显示，在计算农民居民家庭人均纯收入和马丁法确定最低生活保障标准使用的价格指标缺乏统一标准。

一、农民居民家庭人均纯收入的计算

国家和地方政府每年都会公布各地的农民居民家庭人均纯收入的数据。根据国家统计局指标解释说明“农村居民家庭纯收入指农村常住居民家庭总收入中，扣除从事生产和非生产经营费用支出、缴纳税款和上交承包集体任务金额以后剩余的，可直接用于进行生产性、非生产性建设投资、生活消费和积蓄的那一部分收入。农村居民家庭纯收入包括从事生产性和非生产性的经营收入，取自在外人口寄回带回和国家财政救济、各种补贴等非经营性收入；既包括货币收入，又包括自产自用的实物收入。但不包括向银行、信用社和向亲友借款等属于借贷性的收入。”

从以上解释可知，农民家庭纯收入=家庭总收入-生产和非生产经营费用-生产性固定资产折旧-缴纳税款-上交承包集体任务金额。其中家庭总收入=生产性经营收入+非生产性的经营收入+自在外人口寄回带回非经营性收入+国家财政救济、各种补贴等非经营性收入。在家庭总收入中既包括货币收入也包括实物收入。货币收入比较容易计量，但实物收入的计量比较复杂，在现行的农村住户调查中规定，实物收入的计算方法是将农户当年生产的农产品产量扣除出售部分，分品种作价后计算得出。对各品种农产品的作价执行的是与市场挂钩的原则，即以农民在市场出售农产品的价格为基础，粮食、肉类打九折，其他农产品打八五折。如果在下年出售了上年的结余农产品，根据出售价格与上年实物作价的高低，将出售结余农产品的损益计入下年收入。对农作物副产品计算收入的原则是，只有用于生产和生活或明确用于出售的农作物副产品才计算收入，用于生产的农作物副产品在计算收入的同时也要计入生产费用中。农作物副产品作价计算收入的方法，原则上按实物折算收入的作价方法执行。农村居民家庭人均纯收入=农村居民家庭纯收入/农村居民家庭人口。

二、测定农村最低保障标准时指标使用

马丁法是由在世界银行工作的经济学家马丁·雷布林提出的一种计算贫困线的方法，有贫困高、低线之分。马丁法低贫困线的测定方法是在首先测定食物贫困线的基础上，利用回归模型，把一些人均可支配收入或人均消费支出刚好能达到食物贫困线的居民户的非食品支出计算出来。把由此求出的最低非食物支出作为非食物贫困线，加上已知的食物贫困线，就是马丁法的低贫困线。这一贫困线指是一个靠牺牲最基本食物消费而获取少量的非食品消费的住户，其非食物支出是维持生存和正常活动必不可少的，也是最少量的。

低贫困线确定非食物贫困线依据是那些人均生活消费支出仅能达到食物贫困线的超贫困户的情况，包含在低贫困线中的非食物贫困线是偏低的，因此，确定一条比低贫困线高一些的贫困线更符合实际。马丁法高贫困线的测定方法是根据居民的人均食品支出与人均可支配收入或人均生活费支出的关系拟合适当的回归模型求得。

马丁法的高、低贫困线的测定都需要测定食物贫困线。因此，食物贫困线的合理准确测量是关键。食物贫困线的测量方法通常是按照正常人一天需要消耗2100卡路里标准计算。首先，根据当地农村居民家庭人均食品消费量中的消费结构和各种食品的卡路里含量计算人均每天各种食品的消费量，并调查当地居民各种生活食品消费的市场价格，计算人均各类食品消费量乘以市场价格之和，即可得到人均每天最低食物消费水平。将每天食物消费水平乘以360天，即为满足农村居民食物最低消费的食物贫困线。

计算食物贫困线的关键因素是人均食品的消费量和当地食品的消费价格。按照这一计算方法，人均食品消费量在充分考虑了人的体能需要的基础上，还考虑了不同地域人口的食品消费结构的差别，具有一定的合理性。但这一方法用于计算农村最低生活保障标准的时候，由于存在食物的自给自足问题，市场价格的选择将会和农村居民人均纯收入的计算不一致。

三、农村居民人均纯收入与农村最低生活保障标准之间的价格指标矛盾

农村居民人均纯收入与农村最低生活保障标准制定的矛盾主要体现在实物计量的价格指标。农村居民人均纯收入在进行实物计量时，使用的是出售农副产品的价格指标计量，且分别按照粮食和肉类九折，其他八五折计算。而马丁法的农村最低生活保障标准中食物贫困线的计算通常是以市场价格计算，而市场价格往往是农副产品出售价格的1—3倍。

如果直接用市场价格计算农村最低生活保障标准，则出现过高估计的问题。用此标准与农村居民收入相比，确定农村最低生活保障对象将把很多非贫困的农村家庭划入到农村贫困家庭的范围，这将违背了最低生活保障制定的救助原则，也可能使得政府财政无力负担，从而使得应该被救助的对象得不到有效的救助。如果按照农副产品的出售价格计算农村最低生活保障标准，则出现过低估计问题。在农村实际生活中，不是所有的食品都可以自给自足，仍有很多食物需要从市场上够买。这将严重低估农村最低生活保障标准，使得本无法满足农村最低生活条件的居民却得不到政府应有的救助。使用以上两种价格指标计算马丁法的农村最低生活保障标准，都将违背我国农村最低生活保障制度的救助原则。

四、价格指标统一的方法选择

合理确定马丁法中的农村最低生活保障标准、解决价格指标矛盾的关键是确定自留食物和购买食物的价格换算或是比例问题。解决方法有以下几种选择。

1、合理确定自留食物和市场购买食物比例

不同地方由于生产的食物品种不同、饮食结构不同，自留的食物比例也不完全相同；同一地方，不同收入层次的家庭，自留食物的比例也会有区别。通过调查当地农村贫困家庭的生活习惯，计算一个自留食物与购买食物比例。按照这一比例计算农村最低生活保障标准食物贫困线的各种食品的自留与购买比例，分别乘以农村家庭居民纯收入中的收购价格和当地市场价格，求和即可得到食物贫困线。

2、合理确定折扣价格

折价比例仍然应以自留食物和市场购买食物的比例为依据，以此比例对农村家庭居民纯收入中的收购价格和当地市场价格进行加权平均，以平均价格计算马丁法中农村最低生活保障标准中食物贫困线。

3、调整农村家庭居民纯收入中食物收入的计算价格

为了统一价格，可将农村家庭居民纯收入中食物收入的计算价格转为市场购买价格。作为解决方法可以解决价格指标的一致性的问题，但会使得农民收入水平偏高，农村居民不认可该收入水平的计算，从而引发社会矛盾。而且这一解决方法也会使得农村最低保障标准过高，增加政府的支出，影响政府的保障能力。

五、小结

建立各地方的农村最低保障标准是不断完善我国农村最低生活保障制度的任务之一，现阶段建立各地的农村最低保障标准仍有一些问题。其中最主要的问题之一是方法的统一问题。在此讨论了马丁法中价格指标的统一和一致性问题，并提出了三种解决方案。第一、第二种解决方案都比较适用，但第二种解决方案的操作相对简单。

（注：本文属国家社科基金项目“边疆人口较少民族地区农村最低生活保障模式研究”（10XMZ050）。云南省教育厅基金项目“云南农村低保标准线测定的统计研究——以云南部分小少民族地区为例”（2011c179）。）

【参考文献】

军人同志范文第5篇

[摘要] 目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应。 方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292，加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间。Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1（Heme oxygenase-1，HO-1）mRNA和蛋白表达情况；ELISA检测IL-1β和IL-8的产生。同时采用RNA干扰HO-1表达后，观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响。 结果 Pa感染NCI-H292细胞后，IL-1β和IL-8含量分别为（87.52±7.96）pg/mL和（205.63±34.25）pg/mL，50 μg/mL姜黄素孵育8 h后，其含量分别降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL，处理前后差异有统计学意义（P < 0.05）。同时，姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达，其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍，蛋白表达水平提高4.8倍（P < 0.05）。HO-1 siRNA沉默HO-1表达后，与Pa组相比，IL-1β和IL-8分泌进一步增高。 结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用。

[关键词] 血红素氧合酶-1；姜黄素；铜绿假单胞菌；肺上皮细胞；白介素-1β；白介素-8

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）11（b）-0013-04

Study of molecular mechanism of the effect of Curcumin on pseudomonas aeruginosa-induced cytokines production in lung epithelial cells

LI Bo LUO Jinhua HE Zhiguo

Department of Infectious Diseases， the Third Affiliated Hospital， University of South China， Hu′nan Province， Hengyang 421000， China

[Abstract] Objective To investigated the anti-inflammatory effects of Curcumin in pseudomonas aeruginosa -infected lung epithelial cells in vitro. Methods Lung epithelial cell line NCI-H292 was cultured in vitro， and was incubated with Curcumin and pseudomonas aeruginosa for various times. Expression of Heme oxygenase-1 （HO-1） mRNA and protein was detected by real-time PCR and Western blot， respectively； production of IL-8 and IL-8 was detected by ELISA. RNA interference was used to silent HO-1 expression， and pseudomonas aeruginosa-induced production of IL-1β and IL-8 were detected. Results After pseudomonas aeruginosa infection， the concentration of IL-1β and IL-8 was （87.52±7.96） pg/mL and （205.63±34.25） pg/mL， respectively. When incubated with 50 μg/mL Curcumin for 8 h， IL-1β and IL-8 decreased to （15.78±10.74） pg/mL and （49.82±14.28） pg/mL （P < 0.05）. Curcumin could also induce NCI-H292 cells expression of HO-1 mRNA at the transcriptional and translational level， and 50 μg/mL Curcumin increased the mRNA and protein 19 and 4.8 fold， respectively （P < 0.05）. Furthermore， silencing of HO-1 expression could increase NCI-H292 cell secretion of IL-1β and IL-8， as compared with pseudomonas aeruginosa group. Conclusion Curcumin exhibits anti-inflammatory activity through induction of HO-1 expression in lung epithelial cells.

[Key words] Heme oxygenase-1； Curcumin； Pseudomonas aeruginosa； Lung epithelial cells； IL-1β； IL-8

[基金项目] 湖南省衡阳市科学技术发展计划项目（编号2012KJ28）。

血红素氧合酶（Heme oxygenase-1，HO-1）是催化血红素降解为CO、Fe2+和胆红素的限速酶，并在机体的抗炎症、抗氧化损伤中发挥重要作用[1]。研究显示，铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）感染后，肺上皮细胞可反馈性表达HO-1从而在一定程度上对抗Pa感染所诱导的氧化应激损伤[2-3]。因此，以HO-1为出发点，寻求相应的诱导剂，可能对Pa感染所导致的肺黏膜损伤具有重要意义。姜黄素（Curcumin）是从姜科姜黄属植物的根茎中提取的一种植物多酚，大量研究证明，姜黄素具抗氧化、抗炎、清除自由基、抗肿瘤、抗炎症以及对心血管系统、消化系统等多方面药理作用[4-5]。本研究旨在探讨姜黄素对肺上皮细胞表达HO-1的影响，并观察其是否能抑制Pa感染所诱导的细胞因子产生。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

姜黄素购自Sigma公司。SYBGREEN PCR Mix购自ABI，TRIZol为Invitrogen产品。cDNA逆转录试剂盒购自Fermentas；RIPA裂解液、ECL试剂盒为Pierce产品；IL-1β和IL-8 ELISA购自深圳博盛生物科技有限公司。BCA试剂盒购自江苏碧云天生物技术公司，HO-1和β-actin多克隆抗体购自Santa Cruz。RPMI1640培养基和胎牛血清购自Gibco。

1.2 细胞和Pa菌培养

人肺上皮NCI-H292细胞细胞系购自中科院上海细胞库，细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，在37℃ 5%CO2环境中培养。获取Pa单菌落，接种于LB液体培养基，37℃培养3 h。随后取200 μL菌液接种至LB琼脂平板中，37℃条件下过夜培养。洗脱并收集平板上细菌，10 000 r/min条件下离心5 min，随后用无菌PBS洗涤2次。采用分光光度计于650 nm波长下测定菌液OD值并计算细菌的浓度。

1.3 Pa感染和姜黄素处理

NCI-H292细胞铺于96孔板（1×106/mL，0.1 mL），24孔板（1×106/mL，1 mL），或者6孔板（1×106/mL，2 mL），培养48 h，当其达到80%汇合度后，用无菌PBS漂洗，当细胞生长成片生长时，加入培养的Pa（1×109 cfu/mL）以及不同浓度（10、30 μg/mL和50 μg/mL）的姜黄素处理并继续培养24 h。

1.4 实时定量PCR检测HO-1 mRNA的表达

细胞处理结束后，根据试剂盒操作说明提取总RNA并逆转录为cDNA，产物用RNA酶处理。设计特异性引物用于检测HO-1 mRNA表达的定量。HO-1其正向引物：5′ - GCTCAAAAAGATTGCCCAGA -3′；反向引物：5′ - GCGGTAGAGCTGCTTGAACT - 3′。50 μL反应体系包括：25 μL 2 × SYBR Green Master Mix（200 nmol/L dATP、dGTP和dCTP；400 nmol/L dUTP；2 mmol/L MgCl2，0.25 U UNG，0.625 U AmpliTaq Gold DNA聚合酶，25 pmol正向和反向引物，2 μL cDNA。利用ABI Prism 5700仪对HO-1进行扩增。首先50℃ 2 min，95℃ 10 min。随后95℃ 15 s；60℃变形、延伸60 s，共40个循环。同时采用β-actin为内参。mRNA表达倍数改变采用2ΔCt表示，ΔCt=（Ct对照基因-Ctβ-acin）-（Ct待测基因-Ctβ-acin）。

1.5 Western blot分析HO-1蛋白表达

6孔板中细胞经PBS漂洗后，加入RIPA细胞裂解液裂解30 min，4℃ 12 000 g离心15 min，上清即为细胞总蛋白。裂解液中的蛋白用Bradford试剂在分光光度计中测定OD595处吸光度。50～70 μg总蛋白在5%～10%聚丙烯酰胺凝胶中电泳，并转移至PVDF膜上，经5%无脂牛奶封闭后，分别用孵育一抗，二抗。ECL发光，显影。

1.6 IL-1β和IL-8检测

收集感染后24孔板中细胞上清液，按照ELASA 试剂盒说明书检测IL-1β和IL-8水平。即100 μL细胞上清液加入到每个捕获抗体包被的微孔板中，室温孵育2 h。洗板后，加入100 μL检测抗体，室温继续孵育2 h。随后弃混合物，每孔加入100 μL streptavidin-HRP，室温避光孵育20 min。最后，每孔加入100 μL底物，室温避光孵育20 min，然后加入50 μL终止液，分光光度计检测450 nm处OD值。

1.7 HO-1基因沉默实验

HO-1基因特异性siRNA序列由Invitrogen公司合成（forward：5′-AACUUUCAGAAGGGCCAGGUGTT-3′，reerse：5′-CACCUGGC CCUUCUG AAAGUUTT-3′），转染方法按照Ambion公司提供的试剂盒说明进行。生长于100 mm培养皿中的NCI-H292细胞加入0.5 mL瞬时转染液（含8 μL siPORT Amine，20 nmol/L siRNA），使siRNA转入细胞内。37℃、5% CO2条件下孵育5 h后，加入1.5 mL完全培养基并继续孵育48 h，HO-1的干扰效果采用Western blot加以验证。

1.8 统计学方法

计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，多组比较采用单因素方差分析并行Student's t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 姜黄素下调Pa感染所诱导的细胞因子产生

ELISA结果显示，NCI-H292细胞未刺激时IL-1β和IL-8水平较低。Pa感染能显著促进其分泌细胞因子。而经不同浓度姜黄素处理后，细胞因子产生显著降低，见表1。

表1 姜黄素对Pa感染诱导细胞因子产生的影响（pg/mL，x±s）

注：与对照组比较，*P

2.2 姜黄素诱导NCI-H292细胞表达HO-1 mRNA

Pa感染虽然能轻度上调HO-1 mRNA表达，但经10～50 μg/mL姜黄素孵育8 h后，real-time PCR结果显示，30 μg/mL姜黄素能使HO-1 mRNA增高2.4倍，而50 μg/mL姜黄素处理后，HO-1 mRNA增高了19倍，见图1。

与Pa感染组比较，*P < 0.05；1.阴性对照组；2.Pa感染组；3.Pa+10 μg/mL姜黄素组；4.Pa+30 μg/mL姜黄素组；5.Pa+50 μg/mL姜黄素组；Pa：铜绿假单胞菌

图1 姜黄素对NCI-H292细胞表达HO-1 mRNA的影响

2.3 姜黄素对NCI-H292细胞HO-1蛋白表达的影响

如图2所示，不同浓度的姜黄素刺激NCI-H292细胞后，HO-1蛋白的表达量随其浓度的递增而增高，其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1蛋白表达水平提高4.8倍。而内参β-acin在所有处理组中保持恒定。

1.阴性对照组；2.Pa感染组；3.Pa+10 μg/mL姜黄素组；4.Pa+30 μg/mL姜黄素组；5.Pa+50 μg/mL姜黄素组；Pa：铜绿假单胞菌

图2 不同浓度对姜黄素诱导NCI-H292细胞表达HO-1蛋白的影响

2.4 RNA干扰HO-1表达后对Pa诱导IL-1β和IL-8的影响

HO-1 siRNA沉默HO-1表达后（图3A），与Pa感染组相比，IL-1β和IL-8分泌进一步增高（图3B）。

3 讨论

HO-1 是一种诱导性表达酶。基因定位于染色体22q12，几乎表达于所有组织，以内质网含量最高，在各种损伤性刺激下表达增高，又称为热休克蛋白32（HSP32）。HO-1能催化血红素降解为CO、亚铁离子和胆绿素，胆绿素随后在胆绿素还原酶的作用下转变为胆红素。研究表明HO-1及其代谢产物在维护细胞稳态的过程中具有抗炎、抗增殖、抗氧化以及抗凋亡等作用[6]。例如，HO-1表达的降低或缺失（药物性抑制作用或HO-1基因敲除小鼠）使机体对氧化应激的耐受性降低，从而诱发广泛的氧化性损伤或器官衰竭[7]。Zhang等[8]的实验证实了HO-1源性CO能加强cav-1和TLR4的相互作用，进一步减弱了LPS诱导的炎性反应。此外，HO-1源性胆红素既可直接清除氧自由基，还可以通过抑制补体活化而减少炎症细胞的聚集[1]。本实验中以Pa感染的NCI-H292细胞为实验对象，结果显示，Pa感染后能增加IL-1β和IL-8水平，姜黄素能诱导NCI-H292细胞表达HO-1mRNA和蛋白，RNA干扰HO-1表达后，Pa诱导的IL-1β和IL-8的产生进一步增高，这表明HO-1能一定程度上对抗Pa感染所诱导的细胞因子表达，同时也从侧面说明姜黄素可能通过上调HO-1表达从而具有一定的抗炎症效应[9]，从这种意义上讲，姜黄素诱导产生的HO-1可能是抑制肺炎症损伤的重要因素。同时本研究也发现，RNA干扰HO-1表达后，不能完全抑制细胞因子的产生，这表明HO-1可能不是唯一调控IL-1β和IL-8产生的因素。因为细胞因子基因的上游也存在NF-κB、AP-1等转录因子结合位点，因此也可能参与IL-1β和IL-8的基因表达同时，HO-1产物胆红素和CO具有抗氧化、抗炎症、抗凋亡和舒血管活性，可对拮抗各种损伤因素导致的肺黏膜损伤[10]。此外，体内外研究证明，通过胃肠道给予动物和人服用高剂量姜黄素后，尚未发现明显的毒性。这表明姜黄素具有良好的安全性，同时也有临床实验发现，给予志愿者单次口服高达8000 mg的姜黄素，均没有出现明显的毒性作用。姜黄素在胃肠道的吸收率为60%～66%。给药后，主要通过肠道排泄，而静脉给药则主要通过胆汁排泄[11-12]，而本研究采用的最高浓度为50 μg/mL，因此即便服用也可达到诱导HO-1表达所需要的浓度。总之，Pa感染的肺腺癌细胞中，姜黄素通过上调HO-1表达，抑制了细胞因子的过度分泌。由于细胞因子过度分泌是各种感染性疾病发生的重要机制，此从这种意义上讲，诱导姜黄素诱导的HO-1产生对于各种感染性疾病的防治可能具有重要意义。

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