事无巨细范文第1篇

关键词:低年级　班级管理　心得

2005年我从中学调到小学,从此开始了与小孩子共同学习生活的教育之路,一转眼就是五年。五年来我一直担任低年级的班主任工作。说实话起初我并不太善于管理那些还在妈妈怀里撒娇的孩子,班里常常出现状况,不是这个孩子忘了带课本,就是那个孩子和别人打了架,再不就是因为一块橡皮或几张纸起了争端,我整天因为孩子们鸡毛蒜皮的事忙得焦头烂额。为此我曾经很苦恼,这样下去怎么行呢?经过一段时间的摸索我发现,低年级学生虽然参差不齐、自控能力差、言行散漫,却有很强的向师性,在他们眼里老师是无所不能的,老师的话是一定要听的,他们打心眼里尊敬你信赖你,信赖的程度甚至于超过他们的妈妈。这个时期的孩子如同一张白纸等着我去描画,他们的可塑性很强,我给他们什么样的教育他们就有可能成长为什么样的人。怎么让孩子向着我所希望的方向发展呢?几年来的低年级班级管理中我总结出以下四点:

一、倾注爱心给每一个学生

低年级学生刚刚离开幼儿园,正规的学校生活对他们来说是较陌生的,他们需要一些时间去适应。起初有些孩子坐一节课都很困难,学习中也经常出差错。这就需要老师对学生有足够的爱心和耐心,在学生出现状况时多提醒多帮助,让他们逐渐养成良好的学习习惯。我们只要拿出对待自己孩子的爱和宽容,学生们就会亲近你、信赖你、尊敬你。

一年级时我给孩子们削铅笔,教孩子们系鞋带,天冷了告诉他们要多穿衣服,每天放学孩子们排好队我都不忘叮嘱他们靠右走、过马路时左右看,学生间闹了矛盾我先问清情况再充当和事佬,逐渐教会他们解决矛盾的正确方法。对于那些性格顽劣的学生我往往付出更多的耐心和爱心,努力发现他们身上的闪光点,正确引导使之克服缺点不断进步。

教师的关爱如同春雨润物细无声,如果我们常常站在7、8岁孩子的角度上考虑问题,尽量地走进孩子们的世界甚至让自己也变成个孩子,不知不觉中你就会发现孩子们的心和我们拉近了,他们慢慢的也学会团结友爱谦恭礼让了。我所教班级的学生和我的感情都很好,有的孩子不小心就喊我妈妈,更可笑的是有个男生竟然喊过我一次爸爸,虽然被喊错了我心里还是觉得美滋滋的。下课了不时有孩子围着我给我讲他们家里的事,也有时孩子们叫我和他们一起跳绳蹦房子。一有空我就给他们唱歌,教他们折纸、画画、做游戏。我感受着他们的快乐,也把快乐带给了他们。我所教的班级没一个学生怕我,但是他们都很听话,每天像朋友又像孩子般围绕着我。我觉得一二年级的孩子并不是难缠不好管理,只要用心爱他们,你就会发现其实他们个个都是那么活泼可爱一如我们自己的孩子。

二、建立有效的班级管理制度

光有爱心还不够,低年级还需要摸索一套适合本班的管理方法。一年级入学之初我就注意观察学生,发现有上进心、关心集体、又有一定感召力的就作为班干部的培养对象。我一般选三个班长,一个主管班级卫生,一个主管纪律,另一个主管学习。每天下午放学时由卫生班长安排第二天的打扫任务然后督促完成:上自习或课外活动有纪律班长负责,对于迟到、早退,上课说话、下课打闹的学生予以记录汇总并报告给我:学习班长负责检查作业,协调学开展工作。我不定期和班长座谈,及时了解班内每个学生的信息,指导班长如何开展班级工作。现在班委会成员已经能够带领同学们出色地完成学校和老师交给的各项任务,在学生间享有较高的威信。有了小助手的帮助,班里变得井然有序了,我也省了许多心。

三、成立学习小组,激发学习热情

《语文课程标准》要求我们关注学生的个体差异和不同的学习需要,爱护学生的好奇心、求知欲,充分激发学生的主动意识和进取精神,倡导自主、合作探究的学习方法。针对这一理念我采取了分组学习的方法。具体做法如下:

根据学生学习能力和组织协调能力的不同,每四个人分成一组。利用小学生都喜欢管别人的特点,给组内每个人都委以“重任”:组织协调能力最强的为组长,较强的为副组长,稍弱的为副组长助理,最弱的为组长助理。每个小组成员都有自己明确的责任:组长负领导责任,带领大家学习,帮差扶弱共同进步;副组长做好学结及时汇报;两名助理要努力赶超确保自己不掉队。在小组评价上我以小组成绩衡量个人成绩,个人成绩再好小组内有一人掉队也得不到表扬和奖励。我在教室后墙上设计了一个评比台,评比台上每个小组一块园地,每次学习任务完成好的小组都可以得到一个手剪的红苹果贴在评比台上自己的园地里。每个红苹果相当于100分,十个红苹果奖励一颗金星相当于1000分,对于在学习中进步较快或者为班级作出突出贡献的个人视情况给与小苹果或金星的奖励,并在小苹果或金星上写上受奖人的名字。学期末金星最多的小组为优胜小组,小组成员都可得到优秀生的奖状。

德国一位著名的教育学家说:“教师的艺术不在于传授本领,而在于激励、唤醒、鼓舞可喜的收获。”小学生特别是低年级学生正处于独立思考意识迅速发展的时期,一般都有较强的自尊心和上进心,最怕丢脸,怕别人说自己笨,怕被大家瞧不起。教师的功夫贵在循循善诱,只要引导得当,学生就会沿着老师指引的方向去获取新知增长才干不断进步。实行分组学习以来,学生的学习兴趣明显提高了。原先从来不主动举手回答问题的学生为了小组荣誉开始举手了,学习好的学生为了多得几个小苹果也主动帮助羞生背课文写生字了,有的学生完不成学习任务,组长副组长比我都急,下了课还拉着自己的组员学习。学生们个个学的很带劲,我再也不为学生学习不用功发愁了。

事实证明分组学习对于低年级学生是很有效的,几年来我的语文教学成绩一直名列前茅,特别是上学期取得了语文及格率、优秀率均百分之百的好成绩。

四、常与家长沟通。建好和谐师生关系的桥梁

事无巨细范文第2篇

举例：

1、公平无私：公平正直；

2、太平盛世；太平无事；

3、不遗巨细：连极细小处也不放；

4、精打细算：精密地计划，详细地计算。指在使用人力物力时计算得很精细；

事无巨细范文第3篇

[关键词] 骨巨细胞瘤;X线平片;骨壳;偏心性;皂泡状

[中图分类号]R445.4 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)08(a)-114-02

骨巨细胞瘤为一种常见的局部侵袭性肿瘤,富含血管,大部分为良性,部分生长活跃,也有少部分一开始就是恶性。在我国骨巨细胞瘤是常见的骨肿瘤之一,占所有骨肿瘤的14.13%[1],据第三位,在原发骨肿瘤中仅次于骨软骨瘤和骨肉瘤。该瘤最常累及长骨的骨端,呈膨胀性溶骨性破坏,局部刮除治疗容易复发,少数病例可肉瘤样恶变,甚至发生肺转移[2]。及时诊断,有助于及早治疗。现将收集的23例骨巨细胞瘤的X线平片进行分析,旨在提高对本病的诊断正确率。

1 一般资料

本组23例,男性15例,女性8例,年龄16～39岁。临床症状:局部肿胀,不同程度的疼痛,运动受限,局部皮肤温度升高,1例在病理骨折后发现。

2结果

2.1病变部位

肱骨上端5例,股骨上端1例,股骨下端9例,胫骨上端4例,肩胛骨1例,胸椎骨1例,髂骨1例,颅骨1例。

2.2 X线表现

2.2.1 四肢长骨骨巨细胞瘤19例,骨区见偏心性的圆形或椭圆形的透亮区(图1),边缘清楚12例,边缘模糊欠规则7例,局部骨皮质膨胀变薄如壳状。9例破坏区内有骨梁间隔,形成皂泡状;9例呈单房性溶骨破坏,其中5例边缘呈筛孔状;1例有病理骨折;1例为恶性有骨膜反应,呈溶骨性破坏,浸润性生长,软组织肿块中可见多层骨壳,经病理证实为恶性骨巨细胞瘤。

2.2.2 肩胛骨1例,左肩胛骨外侧见3 cm×5 cm大小的椭圆形透光区,边缘稍硬化,并见软组织肿胀。

2.2.3 胸椎1例,第11胸椎椎体骨质破坏,边缘不规则,其内似有骨间隔,周围骨质硬化,椎体略呈楔形。

2.2.4 髂骨1 例,左髂骨翼上部见一6 cm×6 cm的圆形透光区,其内隐约见骨梁间隔,上缘骨质膨胀变薄。

2.2.5 颅骨1例,右颞骨见3 cm×4 cm大小的膨胀性骨破坏区,其内有交错性骨梁间隔,似皂泡状,边缘较清楚,周围骨质有薄层硬化增白。

3 讨论

骨巨细胞瘤起源于骨骼的非成骨性结缔组织,由于本瘤内有大量多核巨细胞,因而称为巨细胞瘤,又因过去认为这些多核巨细胞是破骨细胞,故又称为破骨细胞瘤。肿瘤本身常被结缔组织间隔分隔,邻近的骨皮质膨胀变薄,形成不完整的且菲薄的骨壳,肿瘤也可穿破骨壳而长入软组织中,有时尚有纤维包囊,有时则浸涧周围组织。在肿瘤的四周常有一薄层的反应性新生骨。病理上将骨巨细胞瘤分为三级,Ⅰ级为良性,Ⅱ级为侵袭性即生长活跃的骨巨细胞瘤,Ⅲ级为恶性或恶变,恶性又称为骨巨细胞肉瘤[3]。有些文献中[4]又根据不同的X线表现将骨巨细胞瘤分为三期,即静止期(Ⅰ型)骨破坏主要局限于髓腔内,骨皮质无或少累及,破坏区周围常有一个硬化边缘,活跃期(Ⅱ型)骨皮质膨胀边界清楚。侵袭期(Ⅲ型)表现为边界不清的溶骨性破坏,肿瘤穿破骨皮质侵入软组织。但此分级分型与临床有时不一定符合,必须结合临床、X线及病理三方面的表现全面考虑。

骨巨细胞瘤男女发病率相近,男女之比为1.2∶1,以20～40岁的青壮年发病多见,占65%,儿童及少年很少见。骨骺愈合前的骨巨细胞瘤非常少见,可以说“骨骺愈合”是一个年龄界限。本病好发于四肢长骨骨端和骨突即愈合后的骨骺部,尤其是股骨远端、胫骨近端和桡骨远端,三处发病占全部的60%~70%。以股骨下端最为多见,本组9例发生于股骨下端。早期呈偏心性生长的圆形或椭圆形透亮区,为均匀一致的溶骨性破坏,边缘可不甚清晰并欠规则,随病变进展而逐渐向周围膨胀发展,即肿瘤有横向膨胀的倾向,最后整个骨端和部分干骺端受破坏,骨干似插入肿瘤内,但很少穿破关节软骨面,邻近肿瘤骨皮质膨胀菲薄如壳样,肿瘤边缘可有硬化现象,在肿瘤中有或多或少方向不定的性间隔出现而呈皂泡样,或单房样破坏边缘常有筛孔改变。临床上常以这些特点,作为与其他良性肿瘤和类肿瘤进行鉴别诊断的依据。

在X线平上的皂泡征为骨巨细胞瘤的典型特征,文献报道不一[5-6]。本文认为皂泡征是骨巨细胞瘤在生长发展中的某一阶段出现的典型X线表现,并且此病的好发部位多有此征象。而单房性破坏边缘常伴有的筛孔状改变是否可理解为大小差别较大的皂泡征,是值得研究的。少见部位的骨巨细胞瘤文献[7]上亦以皂泡征作为骨巨细胞瘤的X线诊断依据之一。本文23例骨巨细胞瘤中13 例有皂泡征,10例呈单房性破坏,其中5例边缘呈筛孔状。

恶性骨巨细胞瘤病变进展迅速,X线表现类似于溶骨性骨肉瘤,骨皮质多处被肿瘤穿破,软组织形成肿块,肿瘤呈浸润性生长,边缘模糊,周围无骨质硬化,骨膜反应增多。其与骨肉瘤的唯一重要鉴别点是恶性瘤的软组织肿块之外有或多或少的骨壳。总结起来有以下几点提示恶性:①有较明显的倾袭性表现,如肿瘤与正常骨交界处模糊,有虫噬状、筛孔状骨破坏,骨性包壳和骨嵴残缺不全;②骨膜增生较显著,可有Codman三角;③软组织肿块较大,超出骨性包壳的轮廓;④患者年龄较大,疼痛持续加重,肿瘤突然生长迅速并有恶病质。

综上所述,本文把骨巨细胞瘤的X线平片诊断要点归纳如下:①偏心性生长的圆形或椭圆形透光区,骨皮质膨胀变薄如壳状。②骨的多房性破坏呈皂泡状改变。③骨的单房性破坏边缘有筛孔状改变。④肿瘤突破骨皮质或骨壳,又在肿瘤出现单层或多层骨壳。掌握了以上4点对大多数骨巨细胞瘤的X线平片诊断是有把握的。骨巨细胞瘤的破坏较大,X线是检查骨巨细胞瘤的首选方法,掌握骨巨细胞瘤的X线平片特征,有助于及时诊断,及早治疗。

[参考文献]

[1]白人驹.医学影像诊断学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2008:728.

[2]陶天遵.新编实用骨科学[M].2版.北京:军事医学科学出版社,2006:242.

[3]毛宾尧,林圣洲.临床骨科手册[M].2版.北京:人民卫生出版社,2006:10.

[4]陶天遵.新编实用骨科学[M].2版.北京:军事医学科学出版社,2006:242.

[5]王云钊,曹来宾.骨放射诊断学[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1994:242.

[6]上海第一医学院X线诊断编写组.X线诊断学[M].上海:上海科技出版社,1983:539.

事无巨细范文第4篇

每个普通的工作人员，细节决定成败是被无数事实证明过的国税事业建设的伟大历程中。每个普通的共产党员，都是国税大厦的一块砖，一粒石，既普通又责任重大。普通在于我每项工作，所做的每件事情，相对整个国税事业可能是微不足道的但“海不择细流，故能成其大；山不拒细壤，方能就其高”如果因其细、因其小而心不在焉，可能给国税事业带来巨大的损失：微机操作人员细小的失误，忘记数据备份，可能导致整个数据系统的瘫痪；放过增值税专用发票审核的一个细节，可能导致巨额税款的流失，如此等等。国税事业的建设中，细节决定成败仍是一条不变的法则。身处基层税务部门，面临的大量工作是繁琐细小的事务。但繁琐不能怕麻烦，细小更不能放过细节。要本着对人民负责，对党负责，对国税事业负责的态度，认真履行好自己的职责，让纳税人通过我服务感受到温暖，让国家通过我劳动聚集更多的财富，让人民通过我事业体会国家的繁荣富强。如何重视细节，更好地为国税事业做贡献？觉得应该从如下几点做起：

一、加强学习，增进业务知识，提高精细化管理的能力。征管信息化建设中，精细化管理工作被高度重视。包括征管工作的五到位”五落实”都是管理精细化的具体体现。如何提高地掌握精细化管理水平？途径只有一个，就是加强学习，真正掌握精细化管理的业务，真正在工作运用精细化管理知识，才干胜任工作，发挥更大的作用，做出更大的贡献。如果业务不精，技术不熟练，一个细小的失误，比如误敲一个数码，可能让成千上万的税款流失，带来无法弥补的损失。

二、服务到位，热情细致，方便纳税人。现实工作环境中，细节上为纳税人提供周到服务能更好地协调征纳双方的关系。如进门问好、请座倒水、解答问题热情细致、动作规范周到等等，通过这些细微之处，能拉近双方的距离，使沟通更容易，让纳税人直接感受到国税的温暖，更有利于税收事业的发展。如果没有热情服务的思想，摆出一付高高在上的冷漠表情、甚至一个无意识的不耐烦动作，都可能刺伤纳税人人自尊心，给工作带来许多有利后果。

三、重视细节带来的深远影响，着眼于国税事业的久远发展。细节有时给人带来的影响是巨大的税收宣传中一个醒目的口号可能给无数的人种下纳税光荣的种子；一个热情周到解释可能给只为一个纳税人提供了服务，却给周围的群众留下了国税美好的印象。但一个有损国税形象的形为却会在社会上造成恶劣的影响，为国税事业带来无法估量的后果。原河北省国税局局长李真的飞扬跋扈，曾使国税部门在行风评议中倒数第一，使国税干部人人感觉脸面无光，低人一等。做为国税系统的普通一员，工作中，可能一生都没有机会做出惊天动地的伟业。但细节每天都会遇到要树立以国税事业为已任的思想，以高度的责任心，细微之处下功夫，防微杜渐，做好每件具体工作，积土为山，共同构建国税事业这座壮丽的大厦。

事无巨细范文第5篇

【摘要】 【目的】 探讨辛伐他汀含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达与分泌的影响。【方法】 15只新西兰大白兔随机分为正常对照组（NL， n=5）、粥样硬化模型组（AS， n=5）和辛伐他汀含药血清组（SIM， n=5）。通过喂养高脂饲料，建立兔动脉粥样硬化模型后，予辛伐他汀药液灌胃，获得含药血清。分别予不同浓度含药血清（5%、10%、20%）培养U937单核细胞源巨噬细胞24 h，应用逆转录聚合酶链反应检测MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达，以及应用酶联免疫吸附试验检测MMP-9及TIMP-1蛋白的分泌。【结果】与相同浓度AS组比较，5%、10%、20% SIM组U937单核细胞源巨噬细胞MMP-9 mRNA表达均显著性降低（P值为0.005、0.041和0.013）；5%、10%、20% SIM组TIMP-1 mRNA表达无显著性差异（P值均 >0.05）。而与相同浓度AS组比较，不仅10%、20% SIM组MMP-9分泌显著性减少（P值分别为0.009和0.001），而且10%、20%SIM组TIMP-1分泌均显著性增加 （P值分别为0.017和0.001）。 【结论】 辛伐他汀可抑制单核巨噬细胞MMP-9的表达和分泌，以及促进TIMP-1的分泌。

【关键词】 辛伐他汀； 巨噬细胞； 基质金属蛋白酶-9； 金属蛋白酶组织抑制因子-1

Abstract:【Objective】 To investigate the effects of simvastatin drug-serum on the expression and secretion of matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in U937 monocyte-derived macrophages. 【Methods】 Fifteen New Zealand rabbits were randomized to 3 groups， normal control group (NL， n=5)， atherosclerotic model group (AS， n=5) and simvastatin drug-serum group (SIM， n =5). The rabbit atherosclerotic model was developed by high cholesterol feeding. Then they were medicated with simvastatin liquor by gavage to prepare simvastatin drug-serum. U937 monocyte-derived macrophages were incubated with different concentrations (5%， 10%， and 20%) of simvastatin drug-serum for 24 hours. The mRNA expression and protein secretion of MMP-9 and TIMP-1 were detected by RT-PCR and ELISA. 【Results】 Compared to same concentration AS group， 5%， 10%， and 20% SIM group significantly inhibited the expression of MMP-9 mRNA in U937 monocyte-derived macrophages (P=0.005， 0.041， and 0.013)， and the expression difference of TIMP-1 mRNA were not significant (all P >0.05). Compared to same concentration AS group， 10% and 20% SIM group not only significantly inhibited the secretion of MMP-9 in U937 monocyte-derived macrophages (P=0.009 and 0.001)， but also significantly increased the secretion of TIMP-1 ( P = 0.017 and 0.001) . 【Conclusion】 Simvastatin inhibits the expression and secretion of MMP-9 and enhances the secretion of TIMP-1.

Key words: simvastatin; macrophage; matrix metalloproteinase-9; tissue inhibitor of metalloproteinase-1

冠状动脉粥样硬化斑块由稳定转为不稳定，继而破裂导致血栓形成是急性冠脉综合征最主要的发病机制[1， 2]。斑块脂质核心大、纤维帽薄、巨噬细胞多是结构性易损斑块[3]。斑块内单核巨噬细胞聚集，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases， MMP）增多，金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases， TIMP）减少，导致斑块内胶原降解，纤维帽变薄，是斑块稳定性下降的重要原因[4， 5]。临床研究显示他汀对急性冠脉综合征治疗有效，可能与改善内皮功能、抗炎及稳定斑块等调脂以外的作用有关［6］，但其具体机制尚未完全明确。本研究拟观察辛伐他汀含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达与分泌的影响，以探讨辛伐他汀稳定斑块、治疗急性冠脉综合征的机制。

1 材料与方法

1.1 材料准备

雄性纯种新西兰大白兔，体质量2.0~2.5 kg，购自中山大学动物实验中心。人单核白血病细胞株U937细胞，购自中山大学动物实验中心细胞库。辛伐他汀药片，购自默沙东公司，实验时溶解于蒸馏水灌胃。

RPMI 1640培养基，购自Gibco公司。新生牛血清，购自PAA公司。佛波酯（PMA），购自Sigma公司。Trizol reagent，购自Invitrogen公司。逆转录试剂盒，购自Fermentas公司。Taq酶购自Takara公司。PCR反应引物，由上海生工生物技术有限公司合成。人MMP-9、TIMP-1细胞上清ELISA试剂盒，购自RapidBio公司。

1.2 动脉粥样硬化模型建立及含药血清制备

15只新西兰大白兔随机分为3组：正常对照组（normal， NL）、粥样硬化模型组（atherosclerosis group， AS）和辛伐他汀含药血清组（simvastatin group， SIM），每组5只。正常对照组予普通饲料喂养12周，其余各组予高脂饲料（1%胆固醇、10%猪油、89%普通饲料）喂养10周后，每组随机处死1只，证实有大动脉粥样硬化形成后，继续高脂喂养至12周，其中SIM组于第11周起给予辛伐他汀5 mg/kg，每天1次，灌胃14 d。末次给药前禁食12 h，给药后1 h颈动脉无菌取血，分离血清，同组动物血清混匀，0.22 ?滋m滤膜过滤灭菌，-80 ℃保存备用。

1.3 细胞培养及干预

U937细胞培养于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养基中，置于含5% CO2，37 ℃培养箱中，待细胞生长至接近融合时传代，2~3代后用于实验。调整细胞密度为5×106/mL，接种于6孔培养板，加入PMA使终浓度为50 ng/mL，培养48 h后见悬浮生长的U937细胞分化为巨噬细胞，伸出伪足，贴壁生长。弃去旧培养基，PBS液洗涤后，予不含血清的RPMI 1640培养基继续培养24 h，弃去培养基。分别加入各含5%、10%、20%正常兔血清，5%、10%、20%粥样硬化兔血清，以及5%、10%、20%辛伐他汀含药血清的RPMI 1640培养基，每组设3个平行组，培养24 h用于RT-PCR实验。

1.4 总RNA提取

吸净培养基，每孔加入1 mL的Trizol液，吹打裂解细胞，收集于无RNA酶离心管中，室温静置5 min。加入0.2 mL氯仿，剧烈颠倒15 s，室温静置3 min，4 ℃，12 000 × g离心10 min。转移上层水相液500 ?滋L到新的离心管，加入500 ?滋L异丙醇，室温静置10 min，4 ℃，12 000 × g离心7 min。弃上清，加入1 mL无RNA酶水配制的75%酒精，振荡混匀，4 ℃，7 500 × g离心5 min。重复酒精洗涤沉淀一遍，弃去酒精，室温干燥5 min，融解RNA于30 ?滋L无RNA酶水中，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，紫外分光光度计测定RNA含量，计算出RT-PCR所需样品量。

1.5 RT-PCR

取总RNA1.5 ?滋g，按逆转录试剂盒进行逆转录合成cDNA。以β-actin为内参照，进行半定量逆转录聚合酶链式反应。聚合酶链式反应：95 ℃ 5 min预变性，94 ℃ 45 s变性，56 ℃ 30 s退火，72 ℃ 45 s延伸，共35个循环，最后一次循环在72 ℃延伸7 min。RT-PCR产物用含1.5%琼脂糖凝胶电泳，Labwork成像系统采集图像及分析。合成引物序列，MMP-9-上游引物：5′- AGGACGGCA ATGCTGAT-3′，下游引物：5′- CGCCACGA GGAACAAACT-3′，扩增产物为362 bp；TIMP-1-上游引物：5′- TTCCGACCTCGTCATCAG-3′，下游引物：5′- GCATTCCTCACAGCCAAC-3′，扩增产物为340 bp；β-actin-上游引物：5′- ATCGTGCGTGA CATTAAGG-3′，下游引物：5′-ACAGGACTCC ATGCCCAGG-3′，扩增产物为195 bp。

1.6 ELISA测定

收集细胞上清液，4 ℃，3 000 r/min离心10 min，取上清，-80 ℃保存待检。ELISA采用双抗体夹心法，按照说明书步骤进行，测定细胞上清MMP-9、TIMP-1浓度。

1.7 统计学处理

所有数据均以均数±标准差（x±s）表示，三组间比较用单因素方差分析，两组间比较用LSD-t 检验，应用SPSS 10.0统计分析软件进行统计分析，P< 0.05 为差异有显著性。

2 结 果

2.1 辛伐他汀含药血清对U937单核源巨噬细胞MMP-9 mRNA表达的影响

与相同浓度NL组相比，5%、10%、20%AS组MMP-9 mRNA表达均显著性增高（P值均< 0.05）。与相同浓度AS组相比，5%、10%、20%SIM组MMP-9 mRNA表达均显著性降低（P值分别为0.005、0.041和0.013）。与相同浓度NL组相比，5%、10%SIM组MMP-9 mRNA表达均增高（P值分别为0.034和0.029，表1、图1）。

不同浓度间SIM组MMP-9 mRNA表达差别无统计学意义（F=1.747，P=0.252）。

2.2 辛伐他汀含药血清对U937单核源巨噬细胞TIMP-1 mRNA表达的影响

NL组、AS组和SIM组不同浓度之间TIMP-1 mRNA表达无显著差异（表2、图2）。5%、10%和20%SIM组之间TIMP-1 mRNA的表达有显著性差异（F= 6.498，P=0.032）。与5%SIM组相比，10%、20%SIM组TIMP-1 mRNA的表达显著性增加（P=0.039、0.014），而10%与20%SIM组之间无显著性差异（P=0.446）。

2.3 辛伐他汀含药血清对U937单核源巨噬细胞MMP-9蛋白分泌的影响

与同浓度NL组比较，10%、20%AS组MMP-9分泌均显著性增加（P=0.007、0.002）；5%、10%、20%SIM组MMP-9分泌无显著性差异（P=0.824、0.857、0.658）。与同浓度AS组比较，5%SIM组MMP-9分泌无显著性差异（P=0.427），10%、20%SIM组MMP-9分泌显著性减少（P=0.009、0.001，表3）。

SIM组不同浓度之间MMP-9分泌无显著性差异（F=0.985，P=0.427）。

2.4 辛伐他汀含药血清对U937单核源巨噬细胞TIMP-1蛋白分泌的影响

与同浓度NL组比较，AS组TIMP-1分泌均显著性减少（P=0.004、0.044、0.003）；与同浓度NL组比较，5%SIM组TIMP-1分泌减少（P=0.038）。与同浓度AS组比较，10%、20%SIM组TIMP-1分泌均显著性增加（P=0.017、0.001，表4）。

SIM组不同浓度之间TIMP-1分泌有显著性差异（F=6.555，P=0.031）。与5%SIM组相比，10%、20%SIM组 TIMP-1分泌均显著性增加（P=0.038和0.014）。而10%和20%含药血清之间差异无显著性（P=0.456）。

3 讨 论

3. 1 MMP/TIMP与动脉粥样斑块稳定性

急性冠状动脉综合征患者是易损病人[1]，通常指在冠状动脉粥样硬化的基础上，斑块破裂，继而血小板粘附聚集和血栓形成，引起完全或不完全的血管阻塞，导致不稳定型心绞痛、非ST段抬高心肌梗死、ST段抬高心肌梗死及猝死。有报道[7-9]冠脉“罪犯”病变处多是软斑块、以正性重构为主，常伴血栓形成。斑块内细胞外基质过度降解，导致斑块中胶原含量减少，纤维帽变薄，是影响斑块稳定的重要因素。斑块破裂常发生在富含单核巨噬细胞的斑块肩部，此处巨噬细胞可分泌大量MMP，促进纤维帽降解[10]。MMP-9，又称明胶酶B，是巨噬细胞分泌的主要基质金属蛋白酶。TIMP是MMP的抑制物，目前已发现有4种：TIMP-1～TIMP-4，它们均可与激活的MMP 呈1 ∶ 1结合，从而使MMP失活。用免疫组化方法检测动脉粥样硬化斑块显示TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3显著性增多，且多存在于斑块肩部的巨噬细胞、纤维帽和脂核内，与MMP分布部位一致，部分抑制MMP的活性[11]。急性冠脉综合征患者存在着由炎症反应导致的以MMP-9升高为主的MMP-9/ TIMP-1失衡状态[2]。因此MMP与TIMP之间的平衡，对斑块稳定性的调节具有重要意义。研究还表明[12]，MMP-9在转录水平上受多种细胞因子、生长因子及活性物质的调节，而TIMP的表达很少受细胞因子和生长因子的影响。本实验采用血清药理学方法观察到，与同浓度NL组相比较，5%、10%和20%AS组U937单核源巨噬细胞MMP-9表达均显著性增高（P值均< 0.05）。这可能是因为粥样硬化血清中含有较高的低密度脂蛋白胆固醇，以及大量激活的炎性细胞因子、生长因子以及其他活性物质，促进MMP -9的表达。与相同浓度NL组比较，AS组TIMP-1 mRNA表达无显著性差异，但TIMP-1的分泌均显著性减少（P< 0.05），提示动脉粥样硬化血清不但可使巨噬细胞MMP-9增加，同时还可使TIMP-1分泌增加（翻译后水平）而表达（mRNA水平）并未增加，具体机制尚不清楚。

3. 2 他汀药与MMP/TIMP

PROVE IT（TIMI-22）研究[13]显示强化他汀治疗可使ACS患者30 d的临床事件减少，在稳定的患者，使临床事件长期降低，但其具体机制尚未完全明确。Luan等[14]报道，西立伐他汀呈剂量依赖性抑制兔平滑肌细胞和巨噬细胞MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-9，但对TIMP-1和TIMP-2无影响。本研究显示，与相同浓度AS组相比，5%、10%和20%SIM组MMP-9 mRNA表达均显著性降低（P值< 0.05）；10%、20%SIM组MMP-9蛋白的分泌显著性减少（P值均< 0.01）。与相同浓度AS组相比，SIM组TIMP-1 mRNA表达无显著性差异（P >0.05）；但10%、20%SIM组TIMP-1分泌均显著性增加（P值均< 0.01）。与Luan等[14]的报道有所不同，本研究显示辛伐他汀不但在一定剂量范围内可抑制巨噬细胞MMP-9的转录与分泌，而且增加TIMP-1的分泌。这可能是辛伐他汀稳定斑块、减少临床事件的机制之一。他汀具有多效作用（Pleiotropic effects）[15]，除了调脂作用外，还有抗炎、改善内皮功能等作用。辛伐他汀可能通过抑制巨噬细胞MMP-9的转录与分泌，同时还增加TIMP-1的分泌，从而调节MMP与TIMP之间的平衡，起到稳定斑块的作用。

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