抗疫剖析材料范文第1篇

【关键词】  动脉硬化

    Relationship between cell components in human coronary atherosclerosis plaque and stability of plaque

【Abstract】 AIM:  To evaluate the relationship between the plaque stability and the cell components in human coronary atherosclerosis plaque and to investigate the interrelation of cell components. METHODS:  One hundred and twentyfive cases of coronary cardiac diseases including acute myocardial infarction, unstable angina and stable angina, who died in recent 12 years and had full data, were selected. The coronary arteries of each case were transversely cut, embedded and stained with HE. After observing and analyzing the morphologic features, parts of the coronary artery segments were selected for immunohistochemical staining of 6 markers against αsmooth muscle actin (SMA), CD20, CD3, CD68, HLADR and mast cell tryptase. RESULTS:  More macrophages, T lymphocytes and mast cells were observed infiltrated in unstable plaque and smooth muscle cells were more common in stable plaque. A significant negative correlation was found between the expression of SMA and CD68, CD3, tryptase. CONCLUSION:  The decrease in the number of smooth muscle cells and the increase in the number of macrophages, T lymphocytes and mast cells may be the major pathologic mechanism responsible for plaque instability. The infiltration of macrophages, T lymphocytes and mast cells is closely related to the decrease of smooth muscle cells in plaque.

【Keywords】 arteriosclerosis; unstable plaque; T lymphocytes; macrophages; myocytes, smooth muscle; mast cells

【摘要】 目的： 探讨人冠状动脉粥样硬化斑块内细胞成分与斑块稳定性之间的关系，以及各种细胞成分之间有无必然的联系. 方法： 选取解放军总医院近12年间具有完整资料的急性心肌梗死、不稳定心绞痛和稳定心绞痛尸体解剖病例共125例，对每一例的全部冠状动脉进行取材制片，观察分析形态学指标，并从中挑选一部分蜡块切片行免疫组化染色(包括： SMA， CD3， CD68，CD20， HLADR，  mast cell tryptase). 结果： 免疫组化标记不稳定斑块组SMA的表达明显低于稳定斑块组，而CD68, CD3和mast cell tryptase的表达正好相反（P<0.05）；SMA的表达与CD68, CD3和mast cell tryptase的表达呈明显负相关关系. 结论：  斑块内平滑肌细胞明显减少，巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞显著增高，可能是导致斑块不稳定的主要病理学机制；斑块内平滑肌细胞数量减少与巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞浸润密切相关.

【关键词】 动脉硬化；不稳定斑块；T淋巴细胞；巨噬细胞；肌细胞，平滑肌；肥大细胞

0引言

冠状动脉粥样硬化斑块破裂并触发血栓形成是导致急性冠状动脉综合征的重要机制， 斑块是否破裂主要取决于斑块的稳定性，斑块自身的组织结构与斑块的稳定性关系非常密切［1，2］. 由于冠状动脉粥样硬化的动物模型复制不理想以及人体材料来源困难，国内采用人体材料对斑块中的各种细胞成分的数量及功能状态与斑块稳定性关系的研究很少［3］，我们收集我院12年来125例冠心病尸检材料，应用免疫组化对斑块内各种细胞成分进行定性和定量研究， 探讨这些细胞与斑块稳定性的关系，以及各种细胞成分相互之间的作用机制.

1材料和方法

1.1材料

选取我院199201/200412间临床诊断或(和)病理证实为稳定心绞痛、不稳定心绞痛和急性心肌梗死的尸体解剖病例共125例，其中稳定心绞痛组34例，不稳定心绞痛组22例，急性心肌梗死组69例. 标记抗体有鼠抗人αsmooth muscle actin （SMA）, CD20, CD3, CD68, HLADR, mast cell tryptase （tryptase），均购自北京中山公司.

1.2方法

1.2.1取材及染色分离出所有病例之主要冠状动脉（右冠状动脉、左冠状动脉前降支和左旋支），经EDTA脱钙并取材，共取材3748块，其中稳定心绞痛组1095块，不稳定心绞痛组791块，急性心肌梗死组1862块. 常规脱水、包埋、切片并行HE染色，光镜观察区分稳定及不稳定斑块，并在每支有病变的分支挑选1个具有代表性的组织块，共143块（其中不稳定斑块89块）行免疫组织化学染色，采用北京中山公司提供的SP法，操作流程如我科常规免疫组织化学方法，CD68和tryptase两种抗体采用胰蛋白酶和微波联合处理的抗原修复法.

抗疫剖析材料范文第2篇

Stability test and SPF chick immune test of recombinant adenovirus containing major outer membrane protein of Chlamydia psittaci of chicken origin

【Abstract】 AIM: To detect the stability of the recombinant adenovirus plasmid containing major outer membrane protein (MOMP) gene from Chlamydia psittaci in HEK293 cells， to evaluate whether cross reactivity exists or not between recombinant adenovirus and positive serum of Egg Drop Symdrome (EDS)， and to evaluate whether SPF chicks vaccinated with the recombinant adenovirus were protected or not when challenged with virulent CpL strain. METHODS: The recombinant adenovirus plasmids were passaged in HEK293 cells in series and the target gene was detected by PCR. The recombinant adenovirus was mixed with positive serum of EDS in vitro and then infected HEK293 cells. The SPF chicks were vaccinated with recombinant adenovirus and then challenged with the CpL strain. RESULTS: The target gene of recombinant adenovirus plasmid could be amplified by PCR in different passages of HEK293 cells. There was no cross reactivity between recombinant adenovirus and positive serum of EDS. 90% of the SPF chicks vaccinated with recombinant adenovirus were protected when challenged with the CpL strain. CONCLUSION: The recombinant adenovirus plasmid can be passaged stably in HEK293 cells. The recombinant adenovirus can not react with positive serum of EDS. The SPF chicks inoculated with the recombinant adenovirus vaccination are protected.

【Keywords】 Chlamydophilophila psittaci MOMP; recombination， genetic; adenoviridae; neutralization tests; chicks immunity

【摘要】 目的： 检测重组腺病毒质粒在HEK293细胞中的稳定性；重组腺病毒是否与减蛋综合征阳性血清发生中和反应，以及用重组腺病毒免疫SPF小鸡是否产生保护. 方法： 将重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代，并用PCR法检测目的基因；用减蛋综合征阳性血清在体外中和重组腺病毒，接种HEK293细胞；用重组腺病毒免疫SPF小鸡，然后用CpL菌株攻击. 结果： 重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代后，仍然用PCR检测能检测出目的基因；重组腺病毒与减蛋综合征阳性血清之间无交叉反应；用重组腺病毒免疫SPF鸡，用CpL菌株攻击，90%的小鸡获得了保护. 结论： 重组腺病毒质粒在HEK293细胞中能稳定传代；重组腺病毒不受减蛋综合征阳性血清的影响；用重组腺病毒免疫SPF小鸡，能够获得保护.

【关键词】 衣原体，鹦鹉MOMP；重组，遗传；腺病毒科；中和试验；雏鸡免疫

0引言

禽衣原体病是由嗜性鹦鹉热衣原体感染禽类而引起的一种疾病. 目前该病被称为“鹦鹉病”或“鹦鹉热”，该病最早被认为与鹦鹉以及与这些鹦鹉接触的人相关联. 鹦鹉热衣原体由8个血清型组成. 这些血清型是通过使用血清特异性单克隆抗体直接免疫荧光试验［1］或通过PCR核苷酸序列分析或限制型片断长度多态性分析（RFLP）被鉴定出来［2-3］. 至少有6个血清型（A~F）被认为在家禽中流行.

鹦鹉热衣原体感染大部分宠物鸟、家禽（包括火鸡、鸭、鹅、鸡以及相关的家养品种）和野鸟［4］. 在家禽中，大爆发也经常发生在火鸡场和鸭场，并且导致人的感染［5-8］.

目前国内外尚无商业化疫苗预防禽衣原体病，而化药防治本病存在成本高、食品安全隐患等系列问题. 因此，为了控制本病，保护人类健康，促进养禽业的发展，研究和开发高效、低廉的疫苗势在必行. 本研究将构建的重组腺病毒质粒免疫SPF小鸡，获得良好的结果，为进一步的免疫试验奠定了基础.

1材料和方法

1.1材料人胚胎肾细胞（HEK293）由兰州兽医研究所病毒室刘在新研究员提供；DMEM， RPMI1640培养基购自Gibco公司；重组腺病毒质粒由本室构建并鉴定［9］；胎牛血清购自杭州四季青生物科技有限公司；植物血凝素（PHA）购自北京博大泰克生物科技有限公司；7日龄SPF小鸡购自甘肃省中医学院.

1.2方法

1.2.1重组腺病毒与减蛋综合征阳性血清的中和试验鸡减蛋综合症病毒（EDSV）为腺病毒，因此有必要用减蛋综合征阳性血清检测是否对重组腺病毒有抑止作用. 聚体操作步骤如下：取反复冻融的重组腺病毒HEK293 细胞液1 mL，进行10-1， 10-2……10-11系列稀释. 将购买的减蛋综合征阳性血清置56℃水浴中，灭活30 min. 取稀释的重组腺病毒HEK293细胞液100 μL，加入灭活的减蛋综合征阳性血清100 μL， 37℃作用1 h. 将中和液加入到已长满的HEK293细胞单层，37℃， 50 mL/L的CO2条件下培养，观察结果. 同时作对照.

1.2.2重组腺病毒稳定性试验将重组腺病毒连续传代20代以上，观察并记录细胞病变时间. 取第5代、第10代、第15代、第20代病变细胞，反复冻融3次. 取1 mL的冻融液，加入50 μL 100 g/L SDS和3 μL（20 μg/μL）， 60℃作用30 min，然后置37℃作用2 h. 提取腺病毒基因组DNA，进行PCR检测.

1.2.3重组腺病毒电镜观察取于36 h内病变的细胞，反复冻融3次，取2 mL 3000 r/min离心30 min，除去细胞碎片. 将磷钨酸配置成20 g/L的溶液，以1 mol/L的氢氧化钠调整pH为6.8，滤过后盖紧瓶盖，4℃保存. 将染液与病毒液等量混合后，在无菌柜或防尘罩内用喷雾器将样品喷到带膜的载网上，待干燥后进行电镜观察.

1.2.4重组腺病毒制备免疫用重组腺病毒AdMOMP为第21代毒，其毒价为3.4×1013 TCID50/L. 收集于30 h内病变的HEK293细胞，用PBS重悬，反复冻融3次，6000 r/min离心30 min，收取上清，直接用于小鸡免疫. 空白对照HEK293细胞悬液、野生型腺病毒Ad5的制备方法同上.

1.2.5CpL鸡胚适应毒CpL菌株在7 d龄鸡胚测定其毒力，毒力为2.8×1011.

1.2.6试验动物及分组试验动物为7日龄SPF雏鸡，共60只，分重组腺病毒组、野生型腺病毒组、HEK293细胞组，经翅根肌肉和皮下两个途径进行接种，每组10只，接种量分别为： 7.7×109 TCID50， 4×108 TCID50和0.4 mL.

1.2.7血清抗体效价测定于接种前1日和免疫后15 d，分别于试验鸡翅根部静脉采血，用衣原体间接血凝（IHA）试验检测血清衣原体抗体. 操作步骤如下： 取经处理过的干净的96孔V型板，每孔加入25 μL的稀释液. 取25 μL自然析出的血清，加入到第一孔中，混匀，吸取25 μL，加入到下一孔，如此对倍稀释，直至第7孔，混匀后吸弃25 μL. 同时作对照. 每孔加入抗原致敏红细胞25 μL，在振荡器上轻轻振荡1 min. 置室温下2～3 h，观察并记录结果.

1.2.8攻毒保护试验免疫后21 d，经翅根肌肉免疫的小鸡用分离株CpL进行攻击，攻毒量为0.2 mL（5.6×1010 ELD50），攻毒途径为鼻内接种. 攻毒后逐日观察，记录发病情况.

2结果

2.1重组腺病毒减蛋综合征阳性血清中和试验将重组腺病毒HEK293细胞反复冻融，系列稀释后与减蛋综合征阳性血清作用，接入已长满HEK293细胞的96孔细胞培养板，37℃， 50 mL/L的CO2条件下培养培养2~6 d，对照组只接入系列稀释的减蛋综合征阳性血清(表1).

表1重组腺病毒减蛋综合征阳性血清中和试验（略）

［注］A， B， C， D， E， F为试验组， G， H为对照组. “+”表示有细胞病变，“-”表示无细胞病变.

从表2中可以看出，减蛋综合征阳性血清对重组腺病毒没有中和作用.

2.2重组腺病毒稳定性检测取第5代、第10代、第15代、第20代重组腺病毒，提取腺病毒DNA，进行PCR扩增，扩增产品用8 g/L的琼脂糖凝胶电泳观察(图1). 所选择的代次均扩增出了与预期大小一致的片段，说明重组腺病毒质粒中均含有禽源鹦鹉热衣原体MOMP基因，重组腺病毒质粒比较稳定.

M: DL2000 marker; 1~4: 第5代、第10代、第15代、第20代重组腺病毒PCR产物.

图1重组腺病毒稳定性测定（略）

2.3重组腺病毒电镜观察通过对HEK293细胞反复冻融，进行病毒分离、染色、电镜观察，病毒的直径大约为80 nm，呈六边形，与腺病毒相似，说明产生的细胞病变是由腺病毒感染而引起的(图2).

图2重组腺病毒电镜观察（略）

2.4免疫前的鹦鹉热衣原体抗体水平用兰州兽医研究所生产的衣原体IHA试剂盒对7 d龄小鸡衣原体血清抗体进行检测，随机抽样，结果根据IHA的判定标准，供试的雏鸡在免疫前无衣原体感染，可以用于试验.

2.5免疫后血清抗体的测定免疫后15， 21 d采血，测定出抗MOMP血清抗体(表2). 从免疫后15 d和21 d的血清抗体来看，15 d时血清抗体平均达到1∶6.96，而这时的血清抗体还没有达到保护水平（1∶16）. 对21 d抗体水平进行检测发现，小鸡的血清抗体平均达到1∶27.85，达到了相应的保护水平.

2.6肌肉免疫和皮下免疫抗体水平比较通过两种途径对小鸡进行免疫，在15 d和21 d分别采血，用衣原体IHA分别对两组进行抗体检测，检测结果表明，二者产生抗体的水平基本一致.

表2免疫后各组SPF小鸡的衣原体抗体检测情况（IHA法）（略）

2.7攻毒保护试验野生型腺病毒免疫组、HEK293细胞免疫组用CpL菌株攻击后6 mo开始发病，部分产蛋鸡产软壳蛋，产蛋率下降. HEK293免疫组有1只鸡死亡，剖检肝脾肿大，心包积液，输卵管囊肿. 将野生型腺病毒免疫组和其他HEK293细胞免疫鸡全部处死，剖检，全部出现肝脾肿大，部分鸡心包积液，部分鸡肺部有纤维素性渗出，部分鸡输卵管肿胀，但没有观察到有结膜炎的现象.

重组腺病毒免疫组除1只出现肝脾肿大外，其他9只剖检肝脾正常，无肿大现象. 产蛋鸡输卵管正常，并且无畸形蛋、软壳蛋(表3).

表3雏鸡攻毒保护试验（略）

3讨论

在本试验中，重组腺病毒疫苗免疫途径采取了皮下注射和肌肉注射两个途径，来确定哪一个途径更为有效，从试验的结果来看，二者在重组腺病毒刺激机体产生抗MOMP抗体和T淋巴细胞方面没有多大的区别，这为后来的免疫试验及田间免疫提供了依据.

从免疫后15 d所测的血清抗体来看，抗体水平较低，可能与免疫的早期产生IgM有关，在理论上IgM的抗原结合价为10价，但与大分子抗原结合时，由于受到空间结构的限制，实际上只表现出5价有效［10］. 21 d测定抗体水平时，平均水平已上升到1∶27.85，个别小鸡抗体水平达到1∶64.

EDS疫苗是鸡场的常用疫苗之一，因此，种鸡携带EDS抗体的现象十分普遍. 用EDSV试剂盒抗原检测重组腺病毒抗体，来判断二者之间是否存在抗原抗体反应，若二者之间发生反应，说明EDSV与重组腺病毒之间具有相同的抗原位点，致使带有减蛋综合征母源抗体的小鸡免疫失败，使重组腺病毒活载体疫苗的使用受到限制. 从检测的结果来看，二者之间不存在抗原抗体反应. 所以该重组腺病毒活载体疫苗既可以用于带有减蛋综合征母源抗体的雏鸡，也可以用于EDS疫苗免疫过的鸡群.

鹦鹉热衣原体可感染100多种禽鸟. 持续性感染可存在几个月，几年是很正常的. 禽感染鹦鹉热衣原体强毒株后表现为精神萎顿、不食，眼和鼻有粘性分泌物，腹泻，后期脱水，消瘦. 剖检肝脾肿大，气囊发炎，纤维素性心包炎. 有的有严重的肠炎病变. 但鸡对衣原体表现出一定的抵抗力［11］. 在本动物试验中，攻毒后对照鸡没有表现出眼和鼻有粘性分泌物，但表现出轻度的腹泻，生长缓慢的症状. 到6 mo后个别鸡死亡，其他鸡处死后剖检，可见肝脾肿大，心包积液，肺部纤维素性渗出，部分鸡卵巢肿大，输卵管囊肿. 这与国内报道小鸡感染衣原体大约为15～50日龄，死亡率达20%～30%不相符［12］. 免疫组除1只鸡未获得保护外，其他9只鸡剖检肝脾大小正常，输卵管无肿胀. 说明，用该重组腺病毒疫苗免疫鸡产生了良好的保护效果.

【参考文献】

［1］ Andersen AA. Serotyping of Chlamydia psittaci isolates using serovarspecific monoclonal antibodies with the microimmunofluorescence test ［J］. J Clin Microbiol， 1991，29(4):707-711.

［2］ Sayada CH， Andersen AA， Storey CH， et al. Usefulness of ompI restriction mapping for avian Chlamydia psittaci isolate differentiation ［J］. Res Microbiol， 1995，146(2):155-165.

［3］ Vanrompay D， Butaye P， Sayada C， et al. Characterization of avian Chlamydia psittaci strains using omp1 restriction mapping and serovarspecific monoclonal antibodies ［J］. Res Microbiol， 1997，148(4):327-333.

［4］ Vanrompay D， Ducatelle R， and Haesebrouck. Chlamydia psittaci infections: A review with emphasis on avian chlamydiosis ［J］. Vet Microbiol， 1995，45(23): 93-119.

［5］ Hedberg K， White KE， Forfang JC， et al. An outbreak of psittacosis in Minnesota turkey industry workers: Implications for modes of transmission and control ［J］. Am J Epidemiol， 1989，130(3):569-577.

［6］ Newman CP St J， Palmer SR， Kirby FD， et al. A prolonged outbreak of ornithsis in duck processors ［J］. Epidemiol Infect， 1992，108:203-210.

［7］ Durfee PT， Pullen MM， Currier RW II， et al. Human psittacosis associated with commercial processing of turkey ［J］. J Am Vet Med Assoc， 1975，167(9):804-808.

［8］ Hinton DG， Shipley A， Galvin JW， et al. Chlamydiosis in workers at a duck farm and processing plant ［J］. Aus Vet J， 1993，70(5):174-176.

［9］ 周继章，邱昌庆，张小英，等. 禽源鹦鹉热衣原体MOMP基因重组腺病毒载体的构建与鉴定［J］. 中国兽医科技， 2006，36(1):13-17.

［10］ 龚非力. 医学免疫学［M］. 北京： 科学出版社， 2001:37-39.

抗疫剖析材料范文第3篇

关键词：中药组方；鸽新城疫；治疗试验

中图分类号： S858.31 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.06.019

鸽新城疫俗称鸽瘟，是目前危害我国鸽业养殖的一个主要烈性传染病。发病鸽多见于25～50日龄左右的青年鸽，以排泄绿色粪便、扭头、翅膀下垂等为主要临床表现。发病率可高至70%。急性发病期，如果有其他细菌性疾病和寄生虫病继发感染，死亡率可达到30%。目前，该病没有特殊的治疗方法。根据鸽子的生理特点以及鸽新城疫的发病情况，以“燥湿运脾，固本扶正”为治则，运用中药复方制剂试用于该病的治疗，取得了良好的效果，现报道如下，以期为该病的有效控制提供借鉴和参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 药品 中药复方制剂：由苍术、厚朴、山楂等八味中药组成，中药饮片均购自扬州市大德生药店；对照治疗药物：头孢喹诺购自山东鲁抗医药股份有限公司；黄芪多糖购自郑州百仕达生物科技有限公司。

1.1.2 试验动物 试验动物为江苏省某鸽场自然感染发病的商品肉鸽，经临床剖检和实验室诊断等确诊为鸽新城疫。

1.2 试验方法

1.2.2 大群治疗试验 选择自然感染较严重的9个青年鸽棚的36 000只青年鸽进行大群治疗试验。试验分组情况及给药方式参照上述对比治疗试验进行。

1.2.3 试验结果评价 试验期间统计鸽子的死亡率、总发病率及精神状态等。

2 结 果

2.1 实验室诊断结果

2.1.1 病理剖检 病死鸽临床剖检，肉眼可见腺胃点状出血，脾脏肿大充血，十二指肠、盲肠等糜烂、溃疡性出血，肾脏肿大出血等，初步确诊为鸽新城疫。

2.1.2 血清学和核酸检测 采用常规血清学和分子生物学方法，参照有关文献进行。通过抗体检测、鸡胚半数致死率、脑内致病指数及F融合蛋白的核酸序列分析等，最终确诊为鸽新城疫感染。

2.2 治疗结果

近期该鸽场青年鸽普遍出现扭头、排泄绿色粪便等症状，青年鸽棚每天死亡率达到10%左右。本试验开展前，曾用4倍剂量鸡新城疫IV苗和油乳剂苗紧急接种，并结合喹诺酮类、氨基糖苷类等药物抗继发感染，未能控制住病情。改用中药复方制剂组和其它药物治疗组治疗后，鸽群病情明显出现好转，采食量增加，死亡率降低，排泄绿色粪便鸽只数减少，而空白对照组未改善。

3 结论和讨论

鸽新城疫是鸽子常见的消化道疾病之一。有关调查报告显示，鸽新城疫在我国首先流行于广东、福建等省份，近几年在华南和华东地区已经普遍发生。我国每年因鸽新城疫问题造成了数亿计的经济损失。尽管我国已经陆续开展了有关鸽新城疫防治方法的研究，但目前未见有文献报道有关有效的治疗鸽新城疫的特殊方法。鸽新城疫之所以防不胜防，一方面可能与我国鸽业发展相对滞缓有关，相关鸽病方面的研究仅有数十年之久，另一方面，可能与目前还没有针对鸽新城疫的发病特点生产的专用商业化疫苗有关。尽管市场上销售的干扰素、转移因子、活性肽等生物类抗病毒药物层出不穷，在一定程度上缓解了病情，但在实际应用中很难达到确切的治疗效果，彻底控制病情。

随着抗病毒药物金刚烷胺和利巴韦林等在食物源性动物中被禁用后，针对鸽新城疫等病毒性传染病，目前在实际生产和应用中还没有有效的治疗方法。中药具有显著的免疫调节和抗病毒效果，这在全世界已经得到公认。近几十年来日本、韩国、美国等相应积极展开了中药的研究，取得了重大的突破。中药是我国的国粹，无论从资源及实践经验等都优于世界其他国家。因此，开展抗鸽新城疫等病毒病的中药复方制剂的研究，具有得天独厚的优势和极大的潜力。

肉鸽的脾脏为重要的外周免疫器官，能够引起脾脏病变的因素虽然很多，如沙门氏菌、大肠杆菌等细菌病，以及腺病毒、霉菌毒素中毒等，但近期鸽新城疫所表现的脾脏肿大出血、严重腹泻、排泄绿色粪便等病症与上述病并非完全相符。临床治疗上往往以抗生素为主导，以免疫增强剂为辅，并结合疫苗紧急预防，但该病仍然是持续性蔓延。有学者和专家定论是由于长期、大量和不规则用药造成了肉鸽的免疫器官钝化。尽管目前还没有确凿的证据证明，但能够解决规模化鸽场鸽新城疫流行发病问题成为当务之急。遵循中医的治疗理念和药物的使用原则，我们尝试使用中药复方制剂对发病试验鸽群及大群进行了治疗和预防，取得了显著效果。本试验方剂中，选用苍术、厚朴等多味中药，其目的是运脾、行气、和中、健胃、制水、燥湿等功能，脾胃调和，则正气内存，湿邪不可干。

本次治疗试验尽管取得了一定的效果，但笔者认为，不同的鸽场发病情况、内外环境及混合感染程度等不一样，采用本方剂的治疗效果可能存在差异。但“燥湿运脾，固正扶本”的中医治则是不变的。因此，鸽场在实际生产中，一旦暴发鸽新城疫，治疗时还要结合本鸽场及鸽子本身的感染情况等综合考虑，本试验结果仅供参考和借鉴。

参考文献：

[1] 姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京:中国农业出版社，2001：108-113.

[2] 刘钊，杨占秋，肖红，等.MTT法在抗病毒药物筛选中的应用[J].武汉大学学报：医学版，2004，25（3）：332-334.

[3] 魏振英.克感败毒散治疗鸡非典型性新城疫试验[J].中国动物检疫,2001,18(11):36-37.

[4] 王学林，刘文森，王承宇.五种中草药抗鸡新城疫病毒作用研究[J].中国兽医杂志，2003(5):5-8.

[5] 蒋文灿，刘军.“克瘟灵”防治鸡新城疫的疗效观察[J].中兽医医药杂志,1997(5):10-11.

[6] 胡元亮，孔祥峰，李祥瑞，等. 10种中药分成对CEF的增殖和抵抗NDV感染的影响[J].畜牧兽医学报，2004，35（3）：301-305.

抗疫剖析材料范文第4篇

人们常用“四肢发达，头脑简单”来形容运动员，但英国研究人员发现，优秀的职业运动员，甚至就连一些业余运动员的认知功能都比普通大学生发展得更好，因为他们具有“超焦”能力。研究人员要求受试者描述一系列在三维空间移动的场景，如开车、横穿马路或是体育运动，尽管这与真正的运动没有关系，但是职业运动员在具有干扰项的环境下对大量移动目标的注意能力，以及追踪大视场、高速运动的物体的能力和感知深度的能力比业余运动员更好，而业余运动员在这方面又优于普通大学生。但目前还不清楚这种能力是先天的还是后天训练的结果。

从人体汗液中提取抗生素

英国一项研究发现，人体汗液中的物质可以对抗包括肺结核在内的很多已知病原体。科学家发现，汗液中的化学物质人汗腺抗菌肽能够在略带酸性的含盐汗液中激活，刺透有害细菌的细胞膜，最终杀死这些细菌，例如“超级细菌”和致命的肺结核细菌。科学家希望利用人汗腺抗菌肽研发新型抗生素，其长期功效将超过传统抗生素，因为细菌无法快速进化出针对人汗腺抗菌肽的抗药性。

西伯利亚人为何能抗寒

在一项针对西伯利亚族群的遗传学分析显示，当地人对寒冷环境的适应可能与特殊的基因相关。此前的研究发现，在寒冷气候下生活的人群，其体内一对名为UCP1和UCP3的基因表达更为活跃。这些基因帮助身体把储存的脂肪直接转化为热量，而不需要经过肌肉运动的化学能转化或大脑调节干预。新研究在肯定此前研究的基础上，又发现了另外两组基因的变体ENPP7和PRKG1，在自然选择过程中也体现出积极的作用。

夫妻关系差 女性易得病

美国一项研究发现，关系差的夫妻，更容易患上多种疾病。夫妻对彼此关系感到焦虑时，体内的应激激素水平会提高，这种激素水平和某些免疫细胞有关，会降低人体抵抗疾病的能力。研究还发现，不良的夫妻关系，对女性身体健康影响更大，这是因为女性对婚姻的情感依赖更多。夫妻关系差时，女性更容易产生焦虑、沮丧的情绪。不过，这种负面影响并非永久性的，当夫妻关系转好时，身体的免疫能力也会随之增强。

世界上最省油的汽车

德国大众汽车公司近日宣布，他们研制出了“世界上最省油的汽车”，百千米油耗仅约为0.9升。这辆名为XL1的汽车的动力由一台排量仅为0.8升的小型柴油发动机和一个独立的电动马达及电池组提供，最高时速为每小时159千米。XL1还能在全电动的模式下行驶50千米，此时的二氧化碳排放量为零。平均而言，XL1每千米的二氧化碳排放量仅有21克。由于采用了碳纤维材料，XL1整车重量仅为795千克。XL1首款车型将于2013年年底制造完成。

“近视基因”被发现

英国研究人员分析了4.5万名屈光不正患者的基因状况，发现了24个与近视有关的基因。其中包括与视觉信号传输、眼组织构造和眼部发育有关的基因，携带这些高危基因

者患近视的风险是常人的10倍。此前研究发现，近视与用眼过度、户外活动少等环境因素有关，而这项新的研究则证实遗传因素也与近视密切关系。

石墨或可制成人造肌肉

美国研究人员正在开发石墨前所未有的特性和功能。他们采用不同的高分子膜对石墨进行分层处理，以创造出一种可伸缩的“软性”材料，未来或可用于制成人造肌肉。当接触电源时，人造肌肉可延伸出一定的面积，而当电源切断时，该肌肉便恢复松弛状态。通过电压的调整，可控制人造肌肉的伸缩程度，而其伸缩度可超过100%。

“纸质”太阳能电池

为了保证透光率，通常太阳能电池板使用透明的玻璃或塑料制成。日本一个研究小组以木浆中的植物纤维为原料，通过压缩加工，成功研发出厚度仅有15纳米的透明材料，并以此为基板，将光电转换有机材料和配线用压力嵌入，从而制成纸质太阳能电池。这种纸质太阳能电池光电转换效率只有3%，远不及一般发电用太阳能电池10%～20%的转换率，但和玻璃基板太阳能电池差不多，而且便携易用，制造简单，成本极低，将来可能大有用武之地。

打印“人造耳”

美国研究人员利用牛耳细胞在3D打印机中打印出人造耳朵，可以用于先天畸形儿童的器官移植。研究人员首先利用3D相机拍摄数名儿童现有耳朵的三维信息，然后将其输入计算机，3D打印机会据此打印出耳朵模子。研究人员随后在模子中注入特殊的胶原蛋白凝胶，这种凝胶含有能生成软骨的牛耳细胞。此后数周内，软骨逐渐增多并取代凝胶。3个月后，模子内出现一个具有柔韧性的人造外耳，其功能和外表均与正常人耳相似。

剖腹产儿童易患过敏

美国研究人员的一项分析结果显示，剖腹产儿童患过敏的风险高于顺产儿童。研究人员评估了1200多名新生儿在1个月、6个月、1岁以及2岁时的情况，结果发现，到2岁时为止，如果接触宠物皮屑、螨虫等居家常见的过敏源，剖腹产儿童患过敏的比例是顺产儿童的5倍。这项研究表明，早期暴露于微生物环境将对儿童免疫系统发育和过敏发作产生影响，而儿童在顺产过程中接触到的母体细菌可能对他们的免疫系统产生有益影响。

抗疫剖析材料范文第5篇

关键词：肉鸽；H9亚型禽流感病毒；分离

中图分类号：S836 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）09-2170-03

H9亚型禽流感（Avian influenza，AI）是持续危害中国及世界养禽业发展的重要禽类传染病之一。禽类感染H9亚型禽流感病毒后，常表现为呼吸道疾病、产蛋量降低、急性死亡等多种形式[1]。虽然对禽的致病率低，但可引起生产性能下降，造成免疫抑制，因而在普遍存在复合感染的情况下，对养禽业造成的经济损失也很大。同时H9N2亚型禽流感病毒还可感染人，提供内部序列与H5N1亚型禽流感病毒重组；并且具有人流感病毒的受体结合位点[2]，因此研究H9N2亚型AI的病原及防控对养禽业持续健康发展具有重要意义。

1994年陈伯伦等[3]首次报道从中国广东某鸡群分离到H9亚型AIV以来，陆续的有文献报道在各类鸡、鸭、鹌鹑等养殖场有H9亚型AIV发生和流行，给养禽业造成了巨大的经济损失。2014年12月，湖北一肉鸽场1月龄肉鸽出现食欲下降、羽毛蓬松、精神不振、头颈歪斜或头扭转置于背上呈观星状等典型的神经症状，死亡率为15%，疑似新城疫或禽流感症状。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用SPF鸡胚购自北京梅里亚公司；试验鸽由湖北某鸽场提供。抗新城疫阳性血清、抗禽流感阳性血清（H5N1、H9N2）、抗减蛋综合征（EDS76）阳性血清由湖北省农科院畜牧兽医研究所制备和保存。

1.2 病料的采集与处理

病料采自湖北某肉鸽场，鸽群日龄26～45日龄。取病变严重的气管、喉头和肺脏，剪碎，加2倍的PBS溶液和终浓度为2 000 IU/ml的双抗，研磨后，反复冻融2次，置-20 ℃冰箱备用。

1.3 病料的初步检测

参照GenBank公布的NDV、H9亚型禽流感病毒基因组序列Primer primere5.0软件设计NDV，引物为：NDV-F-U CCTTGGTGAITCTATCCGIAG，NDV-F-D CTGCCACTGCTAGTTGIGATAATCC，长度254 bp；禽流感H9（H9AIV）：HA基因检测引物H9N2-HA-U CTCCACACAGAGCAYAATGG，H9N2-HA-D GYACACTTGTTGTTGTRTC，长度488 bp。引物合成由生物工程（上海）有限公司完成。

1.4 0.85%鸡红细胞制备

取SPF公鸡血 5 mL，加 入抗凝剂 ，生理盐水冲洗，1 500 r/min 离心7 min，反复操作3次，制备鸡红细胞悬液 。

1.5 病毒分离

取反复冻融后的上清液接种9日龄鸡胚，每枚鸡胚接种0.25 mL，37 ℃孵化120 h ，24 h内死胚弃去，取 24～120 h死亡的鸡胚，观察鸡胚病变，收获鸡胚有明显病变的尿囊液，测定尿囊液是否有血凝性，检测有无细菌污染，并盲传3代，测其血凝效价（HA）。

1.6 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验

按常规β-微量法进行尿囊液血凝效价（HA），并以抗NDV、抗禽流感（H5N1、H9N2）、抗减蛋综合征（EDS）阳性血清进行 HI 反应。

1.7 动物回归试验

用分离的病毒尿囊液0.2 mL，分别对20只30日龄非免疫肉鸽进行点眼、滴鼻。观察10 d，每日记录发病和死亡情况，剖检发病死亡鸽，取其气管、肺、泄殖腔等组织进行病毒分离。

1.8 分离毒株毒力的测定

《采用国际兽医局的标准诊断方法和疫苗标准手册》进行毒力检测，将分离毒株经鸡胚复壮一代的尿囊液进行试验。1日龄雏鸡脑内接种致病指数的测定，10日龄鸡胚平均致死时间。

2 结果与分析

2.1 病料初步检测结果

由图1可知，2-4号样品用H9AIV特异性引物进行检测，3个样品均出现480 bp大小的片段，而5-7号样品为NDV特异性引物进行检测，均无254 bp大小的片段，说明鸽群感染的是H9亚型禽流感病毒。

2.2 病毒分离结果

经尿囊腔接种的SPF鸡胚在72 h内全部死亡，可见死亡胚全身出血、尿囊膜上也有较多的出血点。测其尿囊液HA效价为6～8log2。将尿囊液传至第3代，死亡胚尿囊液平均HA效价达到9～11log2。用分离毒与NDV、H9N2、H5N1、EDS76阳性血清做HI试验，其血凝作用可被H9N2阳性血清抑制，而不能被NDV、H5N1和EDS76阳性血清抑制。

2.3 动物回归试验结果

经攻毒的20只肉鸽，36 h后陆续出现精神沉郁、食欲下降、拉水便、呼吸音等发病症状，71 h后开始死亡至第14天，共16只死亡。剖检死亡鸽，发现喉头充血、气管环出血、肺脏肉变、腺胃及肌胃与腺胃交接处形成出血带、胰腺有点状出血点、十二指肠、泄殖腔黏膜有出血斑。取病死鸽气管喉头、肺、泄殖腔组织，进行病毒分离，均能分离到H9亚型禽流感病毒，基因序列比较有待进一步研究。将攻毒后存活的4只肉鸽血清进行血凝抑制试验，其HI效价为27、27、28、28。

2.4 分离毒株毒力的测定

经毒力测定，鸡胚半数致死量为107.5/0.2 mL，鸡胚平均致死时间为54.3 h，1日龄雏鸡脑内接种致病指数为1.8，6周龄小鸡静脉接种致病指数为2.0，可判定该分离株应为强毒株。

3 讨论

禽流感不仅严重危害养禽业，而且给公共卫生造成巨大威胁。H9N2亚型AIV在我国（特别是南方地区）持续流行，且宿主范围广泛，包括鸡、鸭、珍珠鸡、鹌鹑等[4-7]。发病情况差别较大，有的出现急性死亡，有的无症状带毒。但国内对于鸽子感染发病的报道很少，其病原的研究就更少了。

通过对发病鸽群临床症状的观察，显示本次发病鸽群疑似新城疫或禽流感病毒感染，因为其发病死亡率相对较低，不太像高致病性禽流感病毒的感染。新城疫和H9亚型禽流感感染在临床上很难区分。本次调查首先通过分子生物学初步诊断，排除了新城疫病毒感染的可能性，判断为H9亚型禽流感病毒感染。进一步进行其血凝、血凝抑制试验检测及毒力测定，确定为毒力较高的H9亚型禽流感病毒感染。病毒进化分析表明，我国禽群中主要流行Y280-like和G1-like两个分支的H9N2亚型AIV。其中在我国鸡群中主要流行 Y280-like 分支病毒， 而G1-like分支病毒仅在鹌鹑等珍禽中流行。另外，Y439-like和Ty/66-like分支病毒在我国也偶尔被分离到，但没有形成流行[8，9]。本次分离到的H9亚型AIV到底是从哪里传播来的？属于哪个进化分支？还有待于进一步进行遗传进化分析。

参考文献：

[1] 甘孟侯.禽流感[M].北京：北京农业大学出版社，1995.

[2] SUN Y， TAN Y， WEI K， et al. Amino acid 316 of hemagglutinin and the neuraminidase stalk length influence virulence of H9N2 influenza virus in chickensand mice[J]. Journal of Virology， 2013， 87（5）： 2963-2968.

[3] 陈伯伦，张泽纪.禽流感研究：I.鸡A型禽流感病毒的分离与血清学初步鉴定[J].中国兽医杂志，1994，20（10）：3-5.

[4] LI C，YU K，TIAN G， et al. Evolution of H9N2 influenzaviruses from domestic poultry in Mainland China[J].Virology，2005，340（1）：70-83.

[5]XU K， SMITH G， BAHL J，et al.The genesis and evolution of H9N2 influenza viruses in poultry from southern China，2000 to 2005[J]. Journal of Virology， 2007， 81（19）：10389-10401.

[6] XU K， LI K， SMITH G， et al. Evolution and molecular epidemiology of H9N2 influenza A viruses from quail in southern China， 2000 to 2005[J]. Journal of Virology， 2007，81（6）： 2635-2645.

[7]CONG Y L， PU J， LIU Q F， et al. Antigenic and genetic characterization of H9N2 swine influenza viruses in China[J]. Journal of General Virology， 2007， 88（7）： 2035-2041.