胚胎工程范文第1篇

分析：①可缩短育种时间；②可定向改造生物的性状；③可提高粮食产量，解决粮食问题

（1）对供体母牛、供体公牛的要求是______ _____。受体母牛必须和供体牛_____ ____。

(2)同期发情处理的方法是____________________________,它可以促进______________的分泌和_____________的生成.

(3)一次给受体移入多胚胎,产生的多个后代,其基因型都相同吗?________

为什么? __________________________________________________

胚胎工程范文第2篇

河川径流条件对水生生物生存，生长和繁殖具有重要的影响。其中温度和溶氧是淡水鱼类生活水环境的重要因子。国内外水产工作者对不同鱼类的胚胎发育与水温、盐度和溶氧的关系进行了许多研究[1-3]，为这些优质经济鱼类的人工繁育研究积累了丰富的资料。鲤鱼是黄河流域的主要鱼类，但由于受到环境影响，其种质资源遭到了严重破坏。因此，研究黄河径流条件（温度和溶氧）与鲤鱼胚胎发育的关系，可以为保护黄河流域鲤鱼种质资源、监测鲤鱼种群动态和鲤鱼黄河流域产卵场的确定提供一定的基础资料。 1材料方法 1.1试验地点及材料试验场所选在西安市东大镇罗非鱼良种养殖基地，试验用鱼采自西安市西留堡渔场，在产卵季节对亲鱼进行人工催产，获得正常发育的受精卵。受精卵初期黏性大，为黏性卵。 1.2试验方法 1.2.1温度对鲤鱼胚胎发育的影响试验 通过野外监测调查，设计接近黄河径流温度的四个温度梯度：16℃，20℃，24℃，28℃。使用加热棒控制恒温条件，误差±1℃。试验设计50cm×30cm×25cm的容器中盛1L养殖基地地下用水，放入10g发育正常的鲤鱼胚胎（在发育期处于64细胞期前完成），每一温度梯度设两个平行组。每天定时观察、记录胚胎从受精起发育到仔鱼出膜(简称孵化)所需的时间(以孵出1～2尾仔鱼的时间为准)和孵化率。定时轻轻搅动水体，让胚胎变动位置以防缺氧。实验温度经标准温度计校准。 1.2.2溶氧对鲤鱼胚胎发育的影响试验 由于试验中直接控制溶氧含量较为困难，所以选用密闭容器中添加不同数量鲤鱼正常胚胎，由于胚胎发育需要耗氧，通过定时监测密闭容器中溶氧量，可以得出一定范围内溶氧对鲤鱼胚胎发育的影响。本实验设计了40cm×25cm×15cm的密闭容器三个，并向其中分别放入不同密度的鲤鱼正常发育胚胎（在发育期处于64细胞期前完成）：10g，20g，30g。每一梯度设有两个平行组，每天定时观察、记录胚胎从受精起发育到仔鱼出膜(简称孵化)所需的时间(以孵出1～2尾仔鱼的时间为准)和孵化率，并定时监测三个梯度密闭容器中溶氧量。试验水温定为20℃（±1℃）。 1.2.3模拟黄河径流条件最适温度和溶氧值的确定 这些值的确定均以能够有胚胎孵化出膜为准，孵化合适温度和溶氧范围的确定则以孵出率达到50％或以上，且仔鱼能正常存活为准。 2结果 2.1水温对鲤鱼胚胎发育的影响 2.1.1水温对鲤鱼胚胎孵化时间的影响 胚胎发育的速度在适宜的孵育下，依赖于水的温度，即在一定的范围内，水温在鱼类胚胎发育过程中起到主导作用，温度越高发育越快，反之，则胚胎发育越慢。本实验中由于模拟黄河径流水温，在四个温度梯度中，鲤鱼的胚胎发育也是如此（见表1）。由表1可见，鲤鱼胚胎在模拟的四个温度下，鲤鱼胚胎的孵化时间随着温度的升高而缩短，表明水温与鲤鱼胚胎的孵化时间呈现负相关关系，得出其方程为Y=267.0e-0.06x，其中X为水温，Y为鲤鱼胚胎的孵化时间。由方程绘制鲤鱼胚胎发育与水温的关系图（见图1）。由图1和表1还可以看出，在16℃～20℃温度范围内，两个相隔温度下鲤鱼胚胎孵化时间之差要明显的大于20℃～28℃温度范围内的两个相隔温度下胚胎孵化时间之差。如16℃下鲤鱼胚胎发育时间比20℃下多50.75h，而20℃下鲤鱼胚胎发育时间只比24℃下多8.75h，24℃与28℃比较，胚胎孵化时间仅差2h。这与谢钢等进行的试验结果相吻合。 2.1.2水温对鲤鱼胚胎孵化率的影响 由表1可见，四个模拟黄河径流水温对鲤鱼胚胎孵化率的影响还是存在着一定差异的。20℃和24℃水温条件下，鲤鱼的胚胎能够正常孵化，孵化率分别达到59.97%和69.36%，而16℃和28℃水温时，对鲤鱼胚胎孵化率的影响较为明显，都未达到50%，分别只有19.11%和43.14%。并且后者孵化后的仔鱼多为畸形，成活率较低分别只有24.25%和～24℃范围内，鲤鱼的胚胎可以正常发育，为最适胚胎孵化温度范围。而当黄河径流水温在较低温度（16℃）和较高温度（28℃）时，鲤鱼胚胎正常发育受到严重影响。 2.2溶氧对鲤鱼胚胎发育的影响 2.2.1溶氧对鲤鱼胚胎孵化率的影响 适宜的水体溶解氧水平是保证水产动物胚胎正常发育、孵化和幼体健康生长的重要条件之一。由表2可以看出，在较充足水体溶解氧水平下（6.75mg/l和6.28mg/l）鲤鱼胚胎的孵化情况正常，孵化率分别达到87.31%和87.34%，并且孵化后仔鱼生长状况正常。但是当水体溶解氧水平低至5.01mg/l时，已经严重影响到鲤鱼胚胎的发育过程。在低水体溶解氧水平下，其孵化率仅为19.32%，孵化出的仔鱼死亡率达到79.37%。表明低水体溶解氧水平对鲤鱼胚胎的正常发育有抑制作用。 2.2.2溶氧对鲤鱼胚胎孵化时间的影响 由表2可见，低的水体溶解氧水平下（5.01mg/l）鲤鱼的胚胎孵化时间要短于高的水体溶解氧水平下鲤鱼的胚胎孵化时间，孵化时间为49h。溶氧量最高的一组（6.75mg/l）即密闭容器中只放置10g鲤鱼受精卵的试验组，鲤鱼胚胎的孵化时间长达58.5h，比另外两个试验组分别延长了2.5h和8.5h。 3讨论 鱼类在胚胎发育阶段是死亡率最高的时期，受到许多因素限制，如：温度，盐度，溶氧量，光照等。本研究主要讨论了黄河径流中两个主要条件温度和溶氧对其表征性鱼类（鲤鱼）的影响，是初步建立黄河径流条件和其水生生物生存状态响应关系的主要内容之一。 温度作为一个主要的生态因子，影响着水生生物的胚胎发育。本研究结果显示，低温条件下鲤鱼胚胎发育较慢，高温条件下胚胎孵化最快但多数胚胎死亡。可能是由于低温抑制了孵化酶的活性，而长时间的高温条件下可能会使孵化酶失活。同时，研究结果显示鲤鱼胚胎孵化时间与温度呈现负相关，这与大多数鱼类胚胎发育过程相同[4-5]。#p#分页标题#e# 关于溶氧对水生生物胚胎发育影响，大多数研究表明适宜的水体溶解氧水平是保证水生生物胚胎正常发育、孵化和幼体健康生长的基本条件。通过本研究结果可以发现，鲤鱼胚胎正常发育所需的溶氧量阈值约为6.0mg/l。另外在低氧环境下（约5.01mg/ml），鲤鱼胚胎的孵化时间最短，而高氧环境下（约6.75mg/l），鲤鱼仔鱼的孵化推迟了。这与OppenBerntsen,D.o等的试验结果一致。Rombough认为当受精卵内氧气供应不足时，仔鱼迫于氧气的需求提前孵化而保证生存。 黄河流域主要经济鱼类（以鲤科为主）产卵场近年来由于受到过度捕捞，水质污染，建造涉河工程等因素的影响，渔业种质资源遭到严重破坏。黄河流域鱼类种群动态研究已经刻不容缓。本研究通过实验室水槽试验，为建立黄河流域径流条件与表征性鱼类相应关系积累了资料，同时为后期建立黄河流域鱼类种群动态模型打下了基础。

胚胎工程范文第3篇

【关键词】小鼠；胚胎；体外培养

0.前言

在迈入新世纪以后，我国的科学技术发展十分迅猛，尤其是我国的生物科技得到了广泛的推广与使用，从而加快了人类社会的发展。胚胎工程是指主要针对胚胎哺乳类动物的胚胎所进行的工程技术操作，之后再将胚胎继续发育，从而使人们获得所需的成体动物的一种全新技术。当前，胚胎工程在蓄牧种繁殖预遗传资源保护、利用方面得到了广泛推广和使用，并且在人类疾病真毒、药物研发等研究方面蕴含巨大应用价值，因此，受到人们高度的关注。

1.材料预方法

1.1实验所需的材料

实验所需的动物：清洁过的雌性预雄性小鼠，所选用的雌性小鼠年龄约在28—35日的日龄范围内，共约250只，而选用的雄性小鼠日龄在56天以上，共有32只。选用的实际预药品主要有，丙酮酸钠、青霉素钠、链霉素、探索氢钠、氯化镁、牛磺酸等。而所选用的仪器主要有倒置显微镜与实体显微镜，离心机、PH仪、显微图像管理系统等。小鼠胚胎培养液主要有三种，即HTF、CZB、KSOM溶液。在配制每一种溶液时都要进行过滤，以便除菌，并且还要放在4摄氏度的环境下进行保存。

1.2小鼠超数排卵

从中选用体重超过25g雌性小鼠，要在小鼠腹腔中注射PMSG20IU，待48小时之后再在腹腔中注射Hcg10IU。雄性小鼠要选用体重超过30g的，严格按照雌性鼠预雄性鼠比例为2：1的比例放在同一个笼中混合养殖，在第二天早晨要检查小鼠的阴道栓，将具有阴道栓的雌性小鼠在20—23小时范围内提取卵母细胞预卵丘细胞的复合体。

1.3采集小鼠的原核胚

在注射hCG后的22小时后，采用颈椎脱臼方法将小鼠处死，在用酒精消毒之后，剪开腹腔，在沿着小鼠卵巢端剪取输卵管，将输卵管放在生理盐水的35mm培养器皿中，然后将培养器皿放进实验室，将小鼠的输卵管放入到洗卵液培养器皿中浸泡一段时间。与此同时，要求实验人员在体视显微镜下准确找到输卵管膨大位置，再使用专门的注射器将其划破，然后轻轻挤压小鼠输卵管端部，从而大量溢出小鼠卵母细胞复合体。

1.4培养小鼠原核胚

首先，要制作一胚胎培养碟，然后将小鼠原核胚放入其中，并且在上部覆盖一层石蜡油，将其放置在碳培养箱中，调节至37度环境下预热四个小时。把细胞复合体取出放在500uLHTF溶液中，利用移液枪吹打几次，并将卵丘细胞原核胚抽取出。多次反复进行此操作，待卵细胞全部脱落后，再将其移动到胚胎培养碟中培养。在移入时标记为0小时，在24小时以后，便开始观察小鼠卵细胞的分裂情况，而在48小时之后便开始观察小鼠细胞分裂情况，在72小时后观察小鼠桑椹胚分裂，在96小时后观察小鼠囊胚分裂轻，而在120小时之后，便开始观察小鼠囊胚孵化情况。

1.5实验设计方案

实验1不同培养基培养小鼠原核胚体，将正常受精之后的小鼠原核胚分为3小组，并且分别放入到三种不同培养基中，即HTF、CZB、KSOM中，共培养约120小时。并且要不断观察小鼠原核胚发育状况，对三组胚胎发育率加以统计，此次实验要进行多次。

实验2置于不同浓度的EGF或者是bFGF的KSOM溶液培养小鼠原核胚体将受精后的正常原核胚分成7组，分别在含有EGF以及bFGF的KOSM溶液中培养120小时。并且要不断观察小鼠的原核胚发育状况，再将各组培养基中小鼠胚胎发育率加以统计。此实验重复进行几次。

实验3利用WOW法培养小鼠原核胚，在受精后的原核胚分成2组，利用WOW法以及成组培养法培养小鼠原核胚胎。在培养约120小时左右，观察其原核胚发育情况，统计各组胚胎发育率，此实验重复进行多次。

实验4将小鼠原核胚体放在不同培养气相中培养，将受精后的原核胚分成3组，分别放在不同的混合气体中培养约120小时。观察小鼠原核胚体发育状况，统计各组胚胎发育率。此实验重复进行多次。

2.结果分析

2.1三组溶液对小鼠原核胚体发育产生的影响

通过实验我们得出：在这三组溶液中，其卵裂率、囊胚率、囊胚细胞并没有较大差异。其中，在KOMS溶液中的卵裂率是最大的，而CZB溶液中囊胚率比其它两种溶液要高，然而，HTF囊胚细胞数是最多的。

2.2 KSOM中EGF或者bFGF含量不同对小鼠原核胚体发育产生的影响

在培养基中，加入不同溶度的EGF或者是BFGF，并不会对小鼠原核胚发育产生较大的影响。

2.3 WOW对小鼠原核胚体发生产生的影响

实验结果表明：从卵裂率方面来分析，WOW要高于对照组，但是，效果不是十分明显；从小鼠受精细胞的囊胚率、囊细胞数角度分析，利用WOW法分裂能力要明显高于对照组。因此，便得出培养小鼠原核胚应该最好利用WOW法，其培养效果较好。

2.4培育气相不同对小鼠原核胚胎发育产生的影响

通过实验证明，在氧气浓度为5%的KSOM培养液与在肺气组CZB溶液中的的培养效果最好。

3.讨论

3.1不同溶液对小鼠原核胚体发育影响

对于哺乳类动物胚体的发育来说，是受很多因素影响的，但是，最主要的影响因素是培养基。然而，当前，哺乳类动物胚体体外发育往往会选用集中溶液包含HTF、CZB、KSOM等。虽然其它类型的胚胎培养液也可以支持哺乳动物胚胎的体外发育。然而，在体外培育胚胎过程中，常表现出一定程度的发育阻滞。在通过大量实验证明，HTF培养效果最好。

3.2不同浓度EGF或者是BFGF对小鼠胚体发育带来的影响

通过实验证明，小鼠的早期胚胎在体外发育过程中，因小鼠胚体原性生长因素在胚体发育中有较强的分泌调控能力，能够快速使胚体发育至囊胚时期。然而，只依靠内源性生长因素，会导致胚胎发育非常缓慢，并且囊胚的发育率偏低，最终导致囊胚细胞较少。因此，胚胎发育需要来自怒踢生殖管道分泌的生长因子的共同参与。但是，如果不具有外源性生长因素，那么会严重阻碍小鼠胚胎发育。

3.3培养方法不同对小鼠胚体发育产生的影响

在体外培养胚胎时，采用微滴方式可以促进胚胎的发育，但是，在选用WOW法培养胚胎时，因胚胎间相互隔离，能够使胚胎分泌的因子不被稀释，通过自分泌的方式作用在胚胎上，与此同时，又可以阻碍有毒物质作用在胚胎上，阻碍其发育率。

3.4培养气相不同对小鼠胚体发育产生的影响

通过上述实验证明，在氧气浓度为5%的条件下，KOSM培养溶液效果要高度其它几组，但是，其它两组培养效果没有较大差异。虽然小鼠胚体能够在高浓度的氧气环境中生长预发育，然而，在低浓度氧气环境下，能够提高胚胎的存活率，更会促进胚胎的发育。

【参考文献】

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胚胎工程范文第4篇

关键词激素;小鼠胚胎;体外发育;影响

abstractthe system for mouse embryo culture,and the effects of two different hormone on mouse preimplantation embryos in vitro were explored.one-cell mouse embryos were cultured in different culture media to determine the optima system,and thendifferentconcentrationhormone were added to the medium to observe the effect ofhormone on mouse embryo development in vitro. htf +10% fbs medium was the best culture system of mouse preimplantation embryod in viting. after hormone of different concentrations and kinds were added to htf +10% fbs medium,the development rate of different stages embryos declines compared with control group. high concentration hormone could depress development of mouse preimplantation embryos in vitro,and lessens the developmental proportion of different stage embryos,then significant decreased the occurrence of blastocyst.

key wordshormone;mouse preimplantation embryos;development in vitro;effects

早期胚胎体外培养技术在发育生物学、胚胎移植、转基因动物等领域的研究工作中都有很重要的作用[1]。早期胚胎发育是一个复杂的过程,在此过程中,可受到各种激素的影响,激素通过不同途径来调控早期胚胎发育[2,3]。目前,在不孕治疗中经常使用到各种促排卵激素,在孕妇妊娠期间也经常使用一些激素类药物,有报道,使用不同剂量和不同种类的激素,可能影响到胚胎的质量[4-7]。另外,环境中也存在着多种激素的类似物,这些激素和激素类似物对胚胎发育的影响研究,目前还缺乏系统性,尤其是较高浓度的激素水平如何影响胚胎的发育、胚胎发育与激素的浓度之间是否存在着剂量依存性、同种激素对不同发育阶段的胚胎的影响等,这些都还不十分明了,很有必要进行深入的研究。本研究旨在以小鼠为试验动物模型,在基础胚胎发育培养液中分别加入不同种类和不同浓度的激素,以探讨其对鼠早期胚胎体外发育的影响机理。

1材料与方法

1.1试验试剂

孕马血清促性腺激素(pmsg)和人绒毛膜促性腺激素(hcg)购自宁波第二激素厂,htf培养液购于美国in-vitro公司,透明质酸酶购自vitrolife公司,bsa 粉剂购自bovomax公司,fbs(胎牛血清)购自gibco公司。胚胎操作液配制:czb-hepes(nacl为478.9mg/100ml,kcl为36.3mg/100ml,kh2po4为15.9mg/100ml,mgso4为14.195mg/100ml,nahco3为210.0mg/100ml,c6h12o6为100.0mg/100ml,cacl2·2h2o为25.0mg/100ml,乳酸钠(60%糖浆)为370mg/100ml,链霉素为50mg/100ml,青霉素为60mg/100ml,hepes为238.0 mg/100ml)。使用时,添加bsa粉剂4mg/ml,过滤除菌,使用前加温,用于体外胚胎的收集和清洗操作。

1.2试验动物及处理

昆明品系性成熟小鼠,6～8周龄,购自浙江中医药大学动物实验中心,饲养于光照控制(10l∶14d)、恒温恒湿的饲养室,自由采食饮水。雌鼠于17∶30左右腹腔注射10iu孕马血清促性腺激素(pmsg),48h后腹腔注射10iu人绒毛膜促性腺激素(hcg),hcg注射后与正常雄鼠按1∶1比例合笼,次日清晨检查有无阴栓。有阴栓者于注射hcg后14～21h采用颈椎脱臼法处死小鼠。

1.3胚胎收集

取出输卵管移入操作液,在体视显微镜下找到输卵管膨大部,划破输卵管膨大部使受精卵(云雾状)游离出来。用枪头吸出卵团,移入含透明质酸酶的液滴中反复吹打,镜下观察,当受精卵游离出来后,用移卵管(自制巴氏管)吸出来移入新液滴内清洗3次,备用。

1.4试验分组与胚胎培养

1.4.1检查通过2-细胞阻滞情况。收集洗净的胚胎,选择形态较好的受精卵分为2组,分别置于htf+10% fbs和htf+4mg/ml bsa培养液小滴中。于37℃、5% co2、95%空气、饱和湿度的培养箱中培养,24h后观察2-细胞发育情况并做好记录。

1.4.2检查培养体系。收集洗净的胚胎,选择形态较好的受精卵分为多组,分别置于htf+10% fbs培养液小滴中。于37℃、5% co2、95%空气、饱和湿度的培养箱中培养,每 24h观察1次,并记录各发育阶段胚胎数目。

1.4.3激素对胚胎发育的影响。选择形态较好的受精卵分为多组,分别置于添加100、50、10iu/ml的hcg和100、50、10iu/ml pmsg的htf+10%fbs培养液中。于37℃、5% co2、95%空气、饱和湿度的培养箱中培养,每24h观察发育情况,并记录各发育阶段的胚胎个数。以不添加激素的htf+10%fbs培养液作为对照组(ck)。

2结果与分析

2.1培养液中添加fbs和bsa检查培养系统突破2-细胞阻滞效果

在试验体系中,分别在htf培养液中添加胎牛血清-fbs(10%)和牛血清白蛋白-bsa(4mg/ml),检查培养系统能否突破小鼠胚胎发育的2-细胞阻滞情况,结果发现:添加fbs和选购的bsa均可以使原核期胚胎突破2-细胞阻滞,而以添加血清效果较好,在以下的试验中将选择htf添加血清作为基础培养液(见表1)。

2.2培养体系检查

应用htf+fbs培养原核期胚胎,可以平均获得2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚的比例分别为80.3%、78.3%、76.0%、75.5%、68.5%,各发育阶段胚胎个数的具体数值见表2。

2.3小鼠胚胎发育各阶段的显微摄影

培养后每间隔24h,在相差显微镜下观察胚胎的发育情况,并拍照,各发育阶段胚胎的形态如图1所示。各发育阶段胚胎发育正常,培养系统相对稳定。

2.4激素对小鼠原核胚胎体外发育的影响

不同浓度的激素对小鼠胚胎体外发育的影响结果见表3。由表3可知,添加激素后,各发育阶段胚胎的发育率与对照组相比均有所下降,原核期胚胎的2-细胞发生率与对照组相比有所下降,但未发现浓度依赖性;添加不同浓度的hcg使4-细胞胚胎及其后的各阶段胚胎发育下降尤为明显,并且未发现发育到囊胚阶段;添加不同浓度的pmsg,囊胚的发育率与对照组之间也存在着显著差异;添加hcg似乎可以降低胚胎异常分裂率,而添加pmsg 似乎使异常分裂胚胎的比例升高,具体情况如何还需要深入的研究。

3结论与讨论

胚胎的早期发育过程中,很容易受到激素的影响,在辅助生殖实施过程中,往往需要使用激素进行超数排卵处理,激素对早期胚胎的发育影响研究可以为人类辅助生殖技术提高成功率提供一定的理论基础。近年来,随着动物胚胎工程的发展,试管动物、转基因动物和体细胞核移植动物已相继出现,而生产这些动物的一个关键步骤就是胚胎的体外培养,获得稳定的体外发育率是这些技术广泛推广的基础。

试验发现,应用htf添加10%血清的培养系统可以很好地支持小鼠胚胎体外发育,使用的系统在多次试验检测过程中相对比较稳定,几次试验培养的原核期(1-细胞期)胚胎可以在体外发生分裂,并可以发育到囊胚阶段。

昆明品系小鼠早期胚胎体外培养中表现出严重2-细胞阻滞现象[8],应用模拟输卵管培养液添加血清和血清白蛋白的方式可以突破2-细胞阻滞,在本研究中进口血清突破2-细胞阻滞的效果要好于选购的bsa。这可能与血清中含有多种促进胚胎发育的细胞因子有关[9]。

pmsg和hcg这2种激素经常被用于动物的超数排卵。孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,pmsg)具有体内的fsh和lh的作用,而人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hcg)是模拟体内lh的作用,促进黄体发育,fsh和lh二者在体内促进卵泡发育、排卵和黄体发育。hcg由人胎盘和胞体滋养层细胞合成,现已可高度纯化,并可由基因重组生成。自1978年首例经体外受精胚胎植入创造的louise brown诞生后,近10余年来随着art技术的进展,hcg的临床应用也日益广泛,但其在妊娠早期的功能迄今仍未完全明了。虽然hcg对维持黄体功能是必需的,在不孕症患者诱导排卵出现黄体功能障碍时,重复给予hcg能有效地支持黄体功能[10],但也有hcg溶解黄体的报道,试验表明在大鼠、小鼠、兔和羊于胚胎植入前和植入时,给予1次或多次hcg,会导致产生不同程度的胚胎死亡[11]。特别是最近用促性腺激素诱导排卵,在体内或体外受精治疗不孕症时,常继之出现缩短黄体期致胚胎植入失败、妊娠率降低等现象,其机理也还很少阐明。在程渭玉等[12]的研究中也表明hcg对胚胎的毒性,且存在时间、剂量依赖关系。试验添加不同浓度的hcg使4-细胞胚胎及其后的各阶段胚胎发育下降尤为明显,并且未发现发育到囊胚阶段的胚胎。

pmsg在母马妊娠38~40d时可以检测出,60d时达到高峰,而在120d时开始下降,170d时下降到检测不出的水平;hcg在非孕妇女处于较低水平,在胚胎发育早期也处于低水平,在妊娠第2周以后显著增加。近来也有学者研究认为胚胎体外发育与激素pmsg、hcg存在关联[13],其他激素也可能影响到胚胎的质量[14-16]。在辅助生殖和超数排卵过程中,需要使用高浓度的pmsg和hcg,在血中二者的浓度高于正常值。在培养体系中添加高浓度的pmsg和hcg,调查其对早期胚胎发育的影响,研究发现胚胎暴露在高浓度的pmsg和hcg降低了胚胎体外发育到各阶段的比例,尤其是明显降低了囊胚的发生率,而hcg对胚胎体外发育的影响似乎更大。由于所调查的样本还较小,其具体情况和具体机制等尚需要深入研究,下一步将扩大试验次数并深入研究多种激素的联合作用对胚胎体外早期发育的影响。

4参考文献

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(上接第321页)

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[14] orvieto r,nahum r,rabinson j,et al.ultrashort flare gnrh agonist combined with flexible multidose gnrh antagonist for patients with repeated ivf failures and poor embryo quality[j].fertil steril,2009,91(4):1398-1400.

胚胎工程范文第5篇

[主题词]胚泡移植；妊娠/针灸效应；受精，人工EffectofAcupunctureonPregnancyRateinEmbryoTransfer

ZhangMingmin，HuangGuangying，LuFuer，etal.(AffiliatedTongjiHospitalofTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScience&Technology，Wuhan430030，China)

[Abstract]Purpose

Toobservetheeffectofacupuncturebeforeandafterembryotransferonthepre

gnancyrateinproconceptivetherapysuchasin-vitro-fertilization(IVF)an

dintracytoplasmaticspermatozoeninjection(ICSI).Methods

100casesundergoingIVForICSIweredividedrandomlyintotwogroups，

acupuncturegroupandcontrolgroup.Theacupuncturegroupwastreatedwithbo

dyacupunctureandearacupuncturebeforeandafterembryotransfer，

andthecon-trolgroupdidnotreceiveanytreatment.Theirpregnancyrateswer

eobserved.Results

Thepregnancyratewas46.0%(23outof50cases)intheacupuncturetreatmentgr

oupand26.0%(13outof50cases)inthecontrolgroup，

thepreg-nancyrateoftheacupuncturetreatmentgroupbeingsignificantlyhi

gherthanthatofthecontrolgroup(P

Acupuncturecanimprovethepregnancyrateinproconceptivetherapy.

[Keywords] EmbryoTransfer；Pregnancy/acupeff；Insemination，Artificial 针刺被广泛应用于临床各科，但是针刺在西方国家被用于不孕症的治疗近10年来才始见报道，而且主要集中在男性不育症方面[1，2]，最近几年才开始将针刺与现代的人工助孕技术相结合治疗女性不孕症患者[3，4]。笔者于2000年4～9月在德国乌尔姆生殖医学研究所首次对接受体外受精-胚胎移植(in-vitrofertilization-embryotransfer，IVF-ET)和卵母细胞单注射(intracytoplasmaticspermato-zoeninjection，ICSI)的患者在胚胎移植前后进行针刺治疗，现将结果报道如下。

1 临床资料

对65例体外受精-胚胎移植和35例卵母细胞单注射，共100例患者作为研究对象。按照病历号奇偶数完全随机的原则，将患者分成两组。针刺组年龄31.8±3.8岁；不孕时间3～10年，平均4.8年。对照组年龄32.8±4.3岁；不孕时间2.5～11年，平均4.5年。所有患者的胚胎质量都控制在较好的水平(体外培养的第2、3天胚胎质量在第1、2级，体外培养的第6天胚胎处于囊胚阶段)。

2 治疗方法

2.1 控制性超排卵所有病例从月经第1天开始使用醋酸那法瑞林(nafarelinacetate，Synarela，HEUMANNPharmaNuremberg，Germany)短期对垂体进行降调节直到注射HCG为止。卵泡刺激从月经周期的第3天开始使用2～6支rFSH(folliclestimulatinghormone，75IU，Serono，Unterschleissheim，Germany)或者2～6支HMG(humanmenopausalgonadotropin，75IU，Serono，Unterschleissheim，Germany)，剂量实行个体化并按照以前的反应决定。刺激的第8天(月经周期的第11天)，通过经阴道B超在两个平面对卵泡直径进行测量，并借此调节激素的用量。当至少1个卵泡的最大直径20mm或2个卵泡的直径在16mm时应用HCG(Pregnonis，5000IU，Serono，Unterschleissheim，Germany)诱发排卵。

2.2 卵细胞的收集，体外培养和胚胎移植在HCG注射36～38小时后，经阴道B超探头穿刺针穿刺吸取卵泡液，并立刻收集和处理卵细胞・705・中国针灸2002年8月第22卷第8期

进行体外培养。的准备和培养条件在2组中没有不同。对严重的男性生育功能低下的患者实行ICSI。在常规IVF或ICSI治疗48小时后，根据Staessen等的方法对胚胎的质量按1，2，3，4级进行评估。在穿刺后的第2、第3天将胚胎经阴道移植入子宫腔内，胚胎移植数量最多不超过3个。通过阴道黄体酮(UtrogestKade，200mg，Berlin，Ger-many，每天3次)的给予以支持黄体期。从胚胎移植的当天开始使用黄体酮直到测定血液的HCG值，即胚胎移植后的第14～16天，对于已怀孕的病例则一直持续到妊娠的第8周。

2.3 治疗

对所有的参与本研究的患者均于胚胎移植的当天经阴式B超测定子宫内膜的厚度，子宫动脉的血流阻抗，并查血浆中雌激素的水平。针刺组患者均在胚胎移植前后进行针刺治疗。运用0.25mm×25mm的一次性不锈钢毫针在选定的穴位针刺。胚胎移植前取穴：内关、地机、太冲、百会和归来。胚胎移植后取穴：足三里、三阴交、血海和合谷。根据穴位的所在部位针刺深度10～20mm，以酸、麻、重、胀得气为针刺反应，用平补平泻法在10分钟后捻针1次，留针至25分钟。另外还在胚胎移植前用0.2mm×13mm的不锈钢毫针在耳穴神门、子宫、内分泌、脑点针刺，左右侧耳各取2个穴位，不捻针，留针25分钟；胚胎移植后在双侧耳运用相同穴位行针刺，不捻针，留针25分钟。未进行针刺治疗的对照组在胚胎移植后同样静卧25分钟。

3 疗效观察

3.1 观察指标

观察胚胎移植当天子宫内膜厚度和子宫动脉的血流阻抗，均用LOGIQ400(GE医疗器械公司)阴道探头频率为6.5MHz进行测定。胚胎移植当天血浆雌激素用放射免疫法测定。

本研究主要目标是提高IVF或ICSI治疗后临床怀孕率。在胚胎移植6周后，B超证实胎儿存活为临床妊娠。

3.2 统计方法

采用t检验(Studentst-test)方法。排除针刺治疗组和对照组之间在患者年龄，治疗方法(IVF，ICSI)，取卵与胚胎移植时间间隔，移植胚胎数量，胚胎移植当天子宫内膜厚度，血浆雌激素水平及子宫动脉搏动指数(Pulsatilityindex，PI)的不平衡。

临床妊娠率是两组最终主要评价指标，运用χ2检验。

所有统计分析均用STATGRAPHICS进行。

3.3 结果

为了避免患者由于妊娠失败而再进入本研究可能带有的偏见，每一个患者只对第1次进行针刺治疗人工助孕治疗周期纳入统计学分析。临床结果见表1，表2。

从表1可知，两组在治疗方法(IVF，ICSI)，取卵与胚胎移植时间间隔，移植胚胎数量，胚胎移植当天子宫内膜厚度，血浆雌激素水平及子宫动脉搏动指数等参数上差异没有显著性意义(P>0.05)。

表2中的临床妊娠率结果显示针刺组和对照组之间差异存在显著性意义(P

4 讨论

影响助孕技术中怀孕率的环节，主要是胚胎质量和子宫对胚胎的接受能力。本研究只将胚胎能否在移植后成功着床作为主要观察指标，不涉及体外受精卵形成胚囊的过程。目前体外受精及其培养已经相当稳定，但是人工助孕技术的怀孕率却徘徊不前[5]。现在普遍认为胚胎在移植后能否着床是成功的关键，称为瓶颈效应。除了胚胎的质量、移植时血浆雌激素水平、移植后黄体功能的支持外，在胚胎移植过程中移植管刺激引起子宫体及其子宫内膜的收缩直接影响胚胎着床[6]。

表1中显示针刺组和对照组之间在移植胚胎数量，胚胎移植当天子宫内膜厚度，血浆雌激素水平及子宫动脉搏动指数等参数上差异没有显著性意义。表2结果可以看出，针刺治疗后能明显地提高临床妊娠率，两组之间差异有显著性意义。

本研究所选择的穴位合谷为手阳明经原穴，能振奋周身阳气，三阴交为足三阴经交会穴，有调理阴血功能，与足三里、归来、地机、血海等穴合用能使经络脏腑功能协调，达到缓急镇痛和改善血液循环的・805・ChineseAcupuncture&Moxibustion，Aug.2002，Vol.22No.8

目的。内关为心包经络穴，能宁心安神，定惊镇痛，与太冲、神门、百会等穴配合能使经络气血运行通畅，协调宫体、宫颈及内脏功能，清除恐惧心理及紧张情绪。耳郭有迷走神经在内的丰富神经网，可以调节全身神经系统及各脏腑的生理功能，所选耳穴子宫、神门、内分泌和脑点也能协调脏腑间功能。以上穴位互相配合，在移植过程中，对胚胎的着床有良性作用，从而使临床妊娠率提高。

5 参考文献

1 SitermanS，EltesF，WolfsonV，etal.DoesAcupunctureTreatmentAffectSpermDensityinMaleswithVeryLowSpermCount?APilotStudy.Andrologia2000；32(1)：312 FischlF，RieglerR，BieglmayerC，etal.ModificationofSemenQualitybyAcupunctureinSubfertileMales.

GeburtshilfeFrauenheilkd，1984；44(8)：5103 Stener-VictorinE，WaldenstromU，AnderssonSA，etal.