致大海范文第1篇

细微的改变仅仅是对帆船赛表达的敬意

对于大多数外国人来说，如果有哪项运动是自己毕生钟爱的，往往也会爱屋及乌地追逐与此有关的一切。说实话，这款XC60环球帆船赛纪念版的不同之处还不足以称之为改款，仅仅是装饰性的变化，我想更多的是VOLVO用以表达对于今年环球帆船挑战赛的敬意吧。在车身颜色方面增加了海洋蓝11号和电光银，除此之外外观最大的变化就在新的轮毂造型和轮眉处的帆船赛LOGO，据说轮毂造型的灵感来自于海洋的波浪。在内饰方面，前排迎宾踏板、座椅皮革以及后备箱一遗物板都印有帆船赛的LOGO，其中遮物板上的拉手还采用了帆船上使用尼龙绳。也许这些变化对于国内消费者来说算不上改变，但是如果你是一个VOLVO帆船挑战赛的忠实拥趸，这款官方限量版车型也会让你有些心动吧。

2.0升增压发动机参数盖过对手

VOLVO一直用T+数字来命名车系中的型号，由此大多数车迷产生了简单的认识，认为这个数字代表发动机缸数，而且在VOLVO采用增压发动机之前都有着这样的“巧合”，但这仅仅是巧合，因为目前越来越多的装有4缸增压发动机的车型被标上“T5”。不过，还是用实力说明一切吧，这歉

作为世界上最艰难的帆船赛事，沃尔沃环球帆船赛为帆船界的精英们提供了一场场技能和体力的非凡考验。这是一场海上马拉松，历时8个多月。跨越四大洋五大洲，将运动员推向耐力的极限。

1969年，2位英国航海家将举办环球航海比赛的想法分享给了英国皇家海军司令欧图・施泰得和啤酒企业大亨比尔・怀特布莱德。1973年首届怀特布莱德帆船赛的举办开启了这项最艰苦的航海赛事。2001年，比赛正式被命名为“沃尔沃环球帆船赛”。2011―12赛季是这项传统航海赛事的第11届，比赛将会途经开普敦(南非)，阿布扎比(阿拉伯联合酋长国)，三亚(中国)，奥克兰(新西兰)，伊塔加(巴西)，迈阿密(美国)，里斯本(葡萄牙)以及洛里昂(法国)。其中海南“三亚号”是征战本届沃尔沃环球帆船赛唯一的中国船队。

作为世界上最苛刻的团体运动赛事之一，沃尔沃环球帆船赛是高科技、海上耐力和极限冒险的完美结合。2.0升涡轮增压发动机可以达到最大功率177kW／5500rpm，而与竞争对手不同的是，它采用了大缸径短行程的设计，这样虽然在动力储备上略有欠缺，但是却延长发动机使用寿命，降低了油耗，最主要的是由于活塞在缸内往复次数少，从而减少对于机油的消耗，说白了就是不存在烧机油的问题，这个你懂的。

两驱车也有一定的通过性。安全装备不打折扣

致大海范文第2篇

第一诱因：高估个人能量

“如果不能改变历史，那么就会成为历史”，擅长运作投机资本的张海在2002年2月入主健力宝集团后，果然验证了这一命题。

健力宝集团前任总经理李经纬在位时曾为企业定下“双百”目标，即“到2000年，实现销量100万吨，销售收入实现100亿元”，然而李经纬最终壮志难酬。此后李经纬的继任者张海描述过：2004年产值达到100亿。为此，张海还身体力行加入饮料生产的监督和指导工作。据说，他当时每天都要通过电脑网络实时了解工厂每条生产线的运营、成品运输情况，他要看生产报表，要和广告公司的人谈产品的包装和推广。他还亲自去给参加培训的员工上课，甚至于跑到工厂车间里，和工人们聊天。健力宝在2003年的销售额达到了28亿，而健力宝品牌的价值也从张海刚来时的60亿上升到102亿。

从入主健力宝后的良好开端来看，100亿的目标不是张海逾越不了的高度，只是张海想在这个目标之外做得更多，犯了很多人最容易犯的错误——高估自己，也同时犯了老板最怕犯的错误——自以为是。

最主要的体现是进入不熟悉的领域——足球，并且为此雄心万丈，认为自己能改变历史：现在国内的足球俱乐部，除了上海申花有盈利外，就算在足球场上能呼风唤雨的大连实德足球俱乐部也是亏损的。

张海在上任不久就开始构筑他的足球帝国，大有不达目的不罢休的趋势，先是斥资一亿买断深圳平安足球队，后是曲线收购辽宁足球队。真正收购的钱是小数目，后期的投入才是一个无底洞，这在足球界是一个公开的秘密。31岁的张海当然知道足球是稳赔不赚的事业：“天下没有无本的事情，大鱼吃小鱼，好鱼吃坏鱼，我们要做得更好，要用好鱼吃坏鱼的办法参与竞争。足球赢利的机会还是有的，但现在不是时候。”明知山有虎，偏向虎山行，勇气可嘉，后果却不能承受，估计健力宝的股东在很多钱花出去时没想到自己已经做了冤大头。

真正有职业感的经理人不会去打无把握之仗，凭这点，张海称不上一个职业经理人。

第二诱因：民心向背

在张海做健力宝掌门的时间段里，健力宝员工们不知会对哪个事件刻骨铭心？抑或是哪一件事直接或者间接埋下了张海离职健力宝的导火索？

一是2002年3月份，上任仅仅两个月的张海便在健力宝启动了他的第一桩冒险，一举炒掉了原有的80%以上的销售人员，同时新招募了2000多名销售员，进行封闭培训，开始全新的通路建设和营销模式。4月份，不惜舍掉五六个亿的营业额，把所有健力宝下面的非健力宝品牌产品全部停产。

二是2004年5月，正当饮料厂商为销售旺季的来临而忙得热火朝天之时，健力宝销售公司总经理蒋兴洲带着20多个销售经理集体辞职。张海对其两年来工作的评价只有四个字：功不可没。

三是2004年6月16日，深圳健力宝队主场同重庆力帆队的一场比赛，健力宝队球员不正常的表现踢爆了张海和球员或者说是球队之间的不和谐传闻。直至张海离职时，健力宝队已经欠了球员3个月的薪水。张海失意，健力宝队的球员们估计会有如释重负的感觉，因为目前最大的心愿是补发3个月的欠薪，而张海离职，新总裁上任，对实现这个心愿大有助益。曾经救球队于水火的是张海，现如今陷球队于深渊的也是张海，如果连工资都发不出，即使这个老板再有个人魅力，也不能靠这点魅力去“交手机话费”，落井下石也就不可避免了。

集健力宝公司老板和经理人与一身的张海仍然没有逃脱“变革或死”的宿命，他的起起落落真是应了那句“成也萧何，败也萧何”。凭借在资本市场的独具眼光和斩获，上任伊始的张海曾笼络到了政府的心，也降服了健力宝的一帮干将，但这一切并不能取代他作为企业领导人必须担当的使命，那就是给“老板”回报感，给下属安全感。

把以上种种说法归结成张海离职的原因，那就是张海像任何一个普通经理人一样，被健力宝的股东们“干掉”了。但此番张海离职事件中，健力宝集团发言人江达明特别强调 “张海仍是健力宝的董事”、“除了董事长一人，其他高管没有任何变动。”看来作为股东，张海没有问题，作为老板和经理人却是问题很多。张海这条经历过了无数大风大浪的巨鲸，最后搁浅在自己挖的海沟里。

“如果某一项变革要以损失太多的人力物力为代价的时候，一般企业的老板是不能够容忍的。通常有一个简单的判断标准，无论一项政策的出发点有多好，都不能触动超过40％的人的既得利益。其实很多时候，经理人能否顺利开展工作不仅在于得当的工作方法，还要赢得人心，也就是尽可能最大范围地得到员工尤其是老员工的支持。”一位职业经理人这样说道。

第三诱因：职业角色错位

“既有的销售模式在经销商订货与回款方面存有缺陷，眼下健力宝在主营业务回款方面面临很大压力，应收账款日渐增多，引起众多股东不满”。张海在健力宝的主营业务上日渐技穷，而资本市场上的长袖仍在攻城掠地。

2002年11月4日，在张海的驱策下，健力宝集团在河南收购了造白酒的宝丰酒业，产业链开始变长了。

2002年12月30日，健力宝集团与中国平安保险股份有限公司协议受让“深圳足球俱乐部”，健力宝已为深足投入了1个亿。

2004年1月，健力宝整体收购江西景德镇华意电器总公司，从而间接掌控由华意电器控股的上市公司华意压缩(000404)。近期因TCL的介入，其收购计划搁浅。

2004年1月，曲线收购辽宁足球队和上海中远队，中超赛场构建“张海系”。

2004年8月16日，健力宝与西北化工的第一大股东西北油漆厂签订了意向性《股权转让协议书》，拟受让后者所持有的西北化工国有法人股5000万股。

与在资本市场的翻云覆雨和足球界的叱诧风云相比，张海时代的健力宝的主业业绩则显得有点逊色：

2002年6月，推出定位在“健康的休闲饮料”的全新品牌“第五季”；

2003年3月，针对都市年轻人推出的“爆果汽”饮料；

2004年3月14日，健力宝投入2亿元推出新产品———冰红茶、冰绿茶和麦香茶三大系列。

致大海范文第3篇

【关键词】神经肽类；Ghrelin；Nesfatin-1；大鼠；血清

【文章编号】1004-7484（2014）06-3434-01

Ghrelin、Nesfatin-1是人们摄食过程中，能够调节平衡能量的两条重要神经肽。现阶段医学界的专家们通过研究发现这两条神经肽和癫痫疾病发作程度、治疗效果有紧密联系[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

用清洁级别为（6～8）周龄的雄性Sprague―Dawley大鼠作为本地实验动物，其体重为（250～280）g，用单笼饲养。随机将海人酸致痫后的生理盐水灌注动物胃内（观察1组），海人酸致痫后的丙戊灌注动物胃内（观察2组），规定两组分贝以3h、6h、12h、 1d及3d、7d、14d为时点亚组，每个时点6只。同时建立空白组（对照1组）、假手术组（对照2组），每组都是6只。

将海人酸融入无菌生理盐水中，达到1mg/ml的浓度，用65mg/kg浓度为0.5%的戊巴比妥钠麻醉大鼠，根据标准的颅骨水平位固定好大鼠头部，并参照大鼠脑立体定位图谱，再用微量注射器与杏仁核保持垂直水平，在硬膜下8.5mm位置，在15分钟之内注射1.0ul的海人酸，大约过了5分钟后拔针。林对对照2组注入1ul的生理盐水，按照Racine分级来评定癫痫发作程度，当大鼠出现>Ⅴ级且连续5次发作说明模型成功。

1.2 实验方法

①采集标本，首先采集2ml大鼠尾静脉血，端头取闹，当血液在室温条件下凝固约（10～20

）分、以300r/mim的速度离心20min之后收集起来，放置在零下20度的环境中保存。用常规石蜡包埋脑组织，实施连续冠状切片，厚度为6um，并将其放置在经防脱片剂处理后的载玻片上面。在温度为60℃的烤箱中过夜。

②用放射免疫法（RIA）检测Ghrelin、用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测Nesfatin-1，同时用免疫组华发检测下丘脑Ghrelin、Nesfatin-1。

1.3 统计学方法

2 结果

Ghrelin、Nesfatin-1的阳性表达是细胞质里面有椭圆形/圆形棕黄色颗粒，和对照1组、对照2组相比，观察1组、观察2组各个时间点的Ghrelin表达都明显降低（P

3 讨论

癫痫作为临床常见的神经系统疾病之一，严重威胁着人类健康，当前诊断癫痫、评价治疗该疾病的效果主要借助神经影像学技术、患者临床特征等。随着对癫痫疾病和神经肽类物质之间联系研究的深入，大多数医学专家们认为，当患者癫痫发作时，其机体内神经肽水平会发生短暂、明显的变化，这可以当做评价影响脑功能代谢、神经兴奋性变化的重要方法[2]。

全部海人酸致痫大鼠都诱发了癫痫，致痫组大鼠给药以后处于麻醉未清醒期，待（82～86）分之后出现节律性咀嚼，但在其前肢抬起，发生抽搐之后又迅速跌倒，以抖动状态结束，疾病发作时间为（2.01～2.73）分。给药后（6～8）小时间断性发生点头、前肢阵挛以及面部肌肉抽搐情况，给药后（8～10）h大多数大鼠恢复正常活动，无显著性癫痫行为，（1～10）天后发生反复自发性发作，每隔7天约（1～3）次。本研究表明，海人酸致痫大鼠模型能够较好地模拟出人类颞叶癫痫疾病的发生、传播、形成过程。定量、定性检测下丘脑旁核范围内分泌的Ghrelin、Nesfatin-1，然后和对照1组、对照2组进行比较可知，致痫组的Ghrelin表达降低，Nesfatin-1表达升高，这说明了癫痫发作时神经肽表达会产生明显的变化。

总之，通过检测血清酰基化Ghrelin、Nesfatin-1的水平，能够了解下丘脑中对应神经肽的变化方向，进而为临床诊治癫痫疾病、评价疗效提供有效参考指标。

致大海范文第4篇

【关键词】 小神经胶质细胞 神经元 OX42 Fos 癫痫 大鼠

0引言

癫痫是一组慢性脑病综合征，其发病与神经免疫内分泌网络的调节失衡有关［1］. 既往有关癫痫的研究多围绕神经元和星形胶质细胞展开［2］，而对小胶质细胞的相关研究以及有关癫痫发作后短时间内小胶质细胞有无变化的研究尚少见报道. 本实验观察了小胶质细胞在癫痫发作后短时间内的变化，以探讨癫痫发作早期小胶质细胞的活化及其与神经元的关系和小胶质细胞在癫痫发作时可能的作用.

1材料和方法

1.1材料SD成年雄性大鼠35只，体质量200~250 g（第四军医大学实验动物中心提供），将动物置于20℃、安静的环境中饲养48 h. 小鼠抗OX42抗体（产品编号：CBL1512P），兔抗Fos抗体（产品编号：MAB1283）（美国Santa Cruz公司）；生物素标记山羊抗小鼠IgG（产品编号：C0252），生物素标记的山羊抗兔IgG（产品编号：C0252），生物素卵白素HRP复合物（ABC，产品编号：C1785）（美国Sigma公司）；BX60型显微镜（日本奥林巴斯公司）；DF300图像采集数码摄像头（德国莱卡公司）.

1.2方法

1.2.1实验分组将大鼠随机分为对照组（n=5）和癫痫发作后15，30，60，120，360 min 5个实验组（n=6）.

1.2.2组织材料的处理大鼠按体质量6 mg/kg腹腔注射5 g/L的海人酸（kanic acid，KA）并观察其行为变化，凡出现凝视、湿狗样抖动、节奏性咀嚼、点头、肢体阵挛、阵发性旋转、跌倒等癫痫发作的表现，即为模型制作成功. 各实验组用过量10 g/L戊巴比妥钠（>40 mg/kg，i.p.）麻醉，迅速开胸经左心室至升主动脉插管，先以100 mL生理盐水洗去血液，随后用4℃含40 g/L多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（PB， pH7.4）先快后慢灌流固定2 h，然后取脑置于300 g/L的蔗糖中（4℃）直至组织沉底. 冰冻切片机切制连续冠状切片，片厚30 μm，切片分为三套，置于0.01 mol/L PBS中存放.

1.2.3免疫组织化学标记

1.2.3.1免疫组织化学单重标记取2套切片在0.01 mol/L PBS中漂洗后，入含3 g/L Triton X100的0.01 mol/L PBS中浸泡30 min，然后依次进行：①小鼠抗OX42抗体稀释液（1∶3000）或兔抗Fos抗体稀释液（1∶3000）孵育24 h；②生物素标记的山羊抗小鼠IgG（1∶500）或生物素标记的山羊抗兔IgG（1∶500）孵育2~4 h；③生物素卵白素HRP复合物（ABC，1∶500）浸泡2~4 h. 然后用葡萄糖氧化酶DAB硫酸镍铵法染色，OX42和Fos产物均呈蓝色，OX42以小胶质细胞胞质出现蓝色颗粒判定为阳性，Fos以神经元和小胶质细胞的细胞核出现蓝色颗粒判定为阳性. 以上每一步骤之后均用0.01 mol/L PBS液充分漂洗3次，每次10 min. 显色后切片经漂洗后裱片、晾干、脱水、透明，封固后显微镜观察并采集图像.

1.2.3.2免疫组织化学双重标记另取1套切片单重标记抗Fos显色后，再进行抗OX42的第二重染色. ①小鼠抗OX42抗体稀释液（1∶3000）室温孵育24 h；②生物素标记的山羊抗小鼠IgG（1∶500）室温孵育2~4 h；③生物素卵白素HRP复合物（ABC，1∶500）室温浸泡2~4 h. DABH2O2溶液中进行棕色反应，OX42阳性产物呈棕色结果判定为阳性. 结束两次染色的切片经漂洗后裱片、晾干、脱水、透明，封固后在光镜下观察并采集图象. OX42阳性反应强弱，+/-：表示弱阳性或无反应；+：表示弱阳性；：表示阳性；：表示强阳性；：表示极强阳性.

1.2.4对照实验及替代实验对照组大鼠腹腔注射生理盐水1.5 mL，分别于15，30，60，120，360 min后灌流固定、取材并进行免疫组织化学检测；取实验组切片，用0.01 mol/L PBS替代抗OX42和抗Fos抗体稀释液，按ABC法进行免疫组化染色.

统计学处理：采用SPSS13.0统计软件进行分析，对FOS阳性神经元进行计数，数据以x±s表示，所用统计分析方法为方差分析，组间多重比较采用LSDt检验.

2结果

2.1动物一般行为改变各实验组大鼠给药后均出现凝视、湿狗样抖动、节奏性咀嚼、点头、肢体阵挛、阵发性旋转、跌倒等癫痫发作表现，而对照组行为正常，无任何癫痫发作表现.

2.2OX42阳性细胞在前脑分布及表达的时间规律

2.2.1OX42阳性细胞在前脑分布的区域对照组大鼠在前脑内可见有少量OX42阳性细胞散在分布，阳性细胞的胞体小，突起多而细，呈静息型；KA导致癫痫发作后OX42阳性细胞数量明显增加，细胞由静息型转变为激活型，其特点是OX42染色深，胞体变大，突起变长粗，在前脑主要集中分布在大脑皮层（包括扣带回、额叶、顶叶和颞叶）（图1A），在海马各亚区主要分布在分子层和多形层（包括CA1，CA2，CA3，CA4和齿状回），锥体细胞层和颗粒细胞层阳性细胞很少（图1B）和杏仁核簇（图1C），OX42阳性细胞的分布没有明显变化.

A: OX42在大脑皮层的分布×240； B: OX42在海马CA3区的分布×120； C: OX42在杏仁核的分布×120.

图1海人酸致癫发作120 min后OX42阳性细胞的分布（葡萄糖DAB硫酸镍铵法）（略）

2.2.2OX42阳性表达的时间规律结果显示，癫痫发作后15 min组可以见到少量OX42阳性细胞，阳性细胞的胞体小，突起多而细，呈静息型；30 min组阳性细胞数量较10 min组增多；60 min组阳性细胞数量较30 min组增多，胞体增大，突起变短，向激活型转变；120 min组阳性细胞数量进一步增多，细胞体积更大，突起少而粗大，阳性细胞无论在数量还是在体积上均达到高峰，细胞呈激活型；至360 min时，阳性细胞数量及形态与120 min组相似，仍为激活型.

2.3Fos阳性神经元在前脑分布及表达的时间规律

2.3.1Fos阳性神经元在前脑分布的区域用硫酸镍铵加强的免疫组织化学显色结果为蓝黑色，Fos免疫阳性物质位于细胞胞核内，神经元、星形胶质细胞及小胶质细胞均可能表达Fos蛋白. 因小胶质细胞的胞核很小，在未与OX42双重标记的单标切片中难于辨认，且与星形胶质细胞表达的Fos阳性胞核无法区别. 对照组大鼠在前脑内未见Fos阳性细胞；KA导致癫痫发作后Fos阳性细胞数量明显增加，在前脑主要集中分布在大脑皮层（包括扣带回、额叶、顶叶和颞叶）（图2A）、海马和杏仁核簇（图2B）.

A:Fos蛋白在大脑皮层的分布×24； B：Fos蛋白在杏仁核的分布×60.

图2海人酸致癫发作120 min后Fos阳性神经元的分布（葡萄糖DAB硫酸镍铵法）（略）

2.3.2Fos阳性神经元表达的时间规律 观察结果显示，癫痫发作后15 min组未见Fos阳性细胞；30 min组阳性细胞开始出现；60 min组阳性细胞数量较30 min组增多；120 min组阳性细胞数量进一步增多，阳性细胞数量达到高峰（图2）；至360 min时，阳性细胞数量明显下降. 对FOS阳性神经元进行计数，以每组共计6只大鼠12张切片24个60×视野所得. 反应强度的时间规律见表1.

表1大脑皮层内OX42阳性小胶质细胞和FOS阳性神经元反应的时间规律（略）

P

2.4OX42阳性细胞和Fos阳性细胞的关系在OX42和Fos双标的切片中可见3种染色类型：①Fos阳性的神经元胞核（Fos+细胞）和Fos阳性的胶质细胞胞核（可能是星形胶质细胞），由于神经元胞核与胶质细胞胞核在大小上的明显差别，使之容易区别；②Fos阴性而OX42阳性的小胶质细胞（OX42+细胞），其胞质和突起为棕色，胞核未染色；③蓝色Fos阳性胞核和棕色OX42阳性的胞质双重标记的小胶质细胞（Fos+/ OX42+细胞）. Fos+/ OX42+细胞与Fos+细胞和OX42+细胞在前脑的分布也很相似，主要位于大脑皮层（包括扣带回、额叶、顶叶和颞叶）、海马和杏仁核簇（图3）.

箭头所指为Fos+/OX42+的小细胞（免疫组织化学双标染色法）.

图3海人酸致癫发作120 min后Fos和OX42在大脑皮层的分布.（略）

3讨论

KA是天然提取的谷氨酸类似物，它可以与突触后KA受体结合，产生兴奋性突触后电流，引起神经元的过度兴奋. 全身或大脑局部注射KA可以导致动物癫痫发作，是理想的颞叶癫痫模型.

我们通过对小胶质细胞的形态和数量变化规律的观察发现KA引起癫痫发作后30 min海马静息小胶质细胞的数目就已经增多，随后很快转化成激活型小胶质细胞并且表达Fos蛋白，此时癫痫的发作还不会引起神经元死亡，只是导致神经元的过度兴奋. 这提示不仅神经元的死亡可以引起小胶质细胞的活化，而且神经元的过度兴奋也可以引起小胶质细胞的活化. 本实验中神经元过度兴奋引起小胶质细胞活化的过程相当迅速，只需30 min其数量就已经增多. Taylor等［2］在体外的实验证明谷氨酸可以作用于小胶质细胞上的代谢型谷氨酸受体，从而引起小胶质细胞的激活，KA引起癫痫发作时神经元释放的大量兴奋性神经递质谷氨酸也有可能引起小胶质细胞的活化. 在本实验中，我们也观察到激活的小胶质

细胞与Fos阳性神经元的分布基本一致，这在空间上提供了神经元释放谷氨酸引起小胶质细胞的活化的可能.

Fos蛋白作为即刻早期基因cfos 的转录表达产物，广泛用于显示神经元的功能状态. 在本研究中，我们观察到神经元的Fos蛋白表达情况与文献报道的一致［3］. 我们在小胶质细胞中也观察到Fos蛋白的表达，说明在癫痫发作早期小胶质细胞被激活后也能表达Fos蛋白，从而启动基因的转录，这可能是它发挥作用的重要途径.

在神经元死亡后活化的小胶质细胞吞噬细胞碎片是众所周知的. 新近的报道中人们发现小胶质细胞活化后可以表达胶质细胞源性谷氨酸转运体，通过清除谷氨酸来保护受损的神经元［4-6］. 早期的小胶质细胞在神经元尚未发生死亡时的活化很可能具有修复过度兴奋的神经元的作用. 这有可能同时通过释放各种细胞因子，促进神经元的死亡，其作用机制还需要进一步的研究.

【参考文献】

［1］ Wolfgang JS， Jessica RC， Sarah EF， et al. Role of microglia Ⅰ the central nervous systems immune respone［J］. Neurol Res， 2005， 27:685-691.

［2］ Taylor DL， Diemel LT， Pocock JM. Activation of Microglial Group III Metabotropic Glutamate Receptors Protects Neurons against Microglial Neurotoxicity［J］. J Neurosci， 2003， 23(6):2150-2160.

［3］ Shehab S， Coffey P， Dean P， et al. Regional expression of foslike immunoreactivity following seizures induced by pentylenetetrazole and maximal electroshock［J］. Exp Neurol， 1992， 118(3):261-274.

［4］ Konsman JP， Kelley K，Dantzer R， et al.Temporal and spatial relationships between lipopolysaccharideinduced expression of Fos， interleukin1beta and inducible nitric oxide synthase in rat brain［J］. Neuroscience，1999，89：535-548.

［5］ Matute C， Domercq M， SánchezGómez MV. Glutamatemediated glial injury: Mechanisms and clinical importance［J］. Glia.2006，53(2):212-224.

致大海范文第5篇

南阳医学高等专科学校生理教研室，河南南阳473061

【摘要】目的：观察川芎嗪对d-半乳糖所致AD模型大鼠学习记忆功能和海马Schaffer侧枝-CA1通路LTP的影响，并探讨其可能机制。方法：24只大鼠随机分为对照组、模型组和TMP组，以d-半乳糖注射建立衰老大鼠模型，TMP组腹腔注射TMP干预。水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力，电生理实验比较强直刺激前后海马CA1区PS幅度变化。结果：在水迷宫实验中，模型组大鼠潜伏期延长，错误次数增多，TMP明显改善衰老大鼠学习记忆功能。电生理实验中，模型组强直刺激后平均PS增幅明显低于对照组，TMP组能提高衰老大鼠PS增幅。结论：TMP能提高衰老大鼠的空间学习和记忆能力，其机制可能与TMP能改善d-半乳糖对大鼠海马CA1区LTP的抑制有关。

关键词 川芎嗪；学习记忆；海马CA1区；长时程增强

【中图分类号】R285 5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2015)01-0030-02

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种表现为认知功能下降、学习记忆能力减退的神经退行性病变［1］。海马结构在学习记忆功能中起重要作用，长时程增强（long-term potentiation，LTP）是突触可塑性变化的一种基本类型，表现为突触传递效能的持续增强，被认为是学习与记忆的生物学基础和研究的良好模型［2］。川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)是传统中药川芎的有效成分之一，除具有改善微循环，保护心、脑血管和防治心脑缺血等功效外，近年也来有报道称TMP具有改善学习记忆功能［3］。本研究通过Morris水迷宫试验观察川芎嗪对AD模型大鼠学习记忆功能影响，采用在体细胞外电位记录方法检测海马CA1区LTP的变化，并对其作用机制进行探讨。

1仪器与材料

1 1实验动物24只Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重为180~220g（由武汉大学医学部动物实验中心提供），雌雄不拘。饲养过程中，室温23℃左右，保持通风，每日光照时间10h。随机表法将动物随机分为3组：对照组、模型组与TMP组。模型组和TMP组用5%d-半乳糖溶液按120mg/（kg·d）的剂量颈后部皮下注射，对照组注射同剂量的生理盐水。同时，TMP组每天腹腔注射TMP 10mg/kg，对照组和模型组注射同剂量生理盐水。42d后开始进行水迷宫实验。

1 2仪器与试剂Morris水迷宫系统（北京微信斯达科技公司）；江湾I-C型立体定向仪（第二军医大学器材处）；RM6240B型多道生理信号采集系统（成都仪器厂）；盐酸川芎嗪为河南福森药业产品；d-半乳糖购于上海试剂二厂。

2实验方法

2 1Morris水迷宫测试水迷宫测试包括定位航行试验和空间搜索试验，测试具体方法如以前文献［4］所述，大鼠学习和记忆的能力用定位航行试验进行评估，随机在迷宫中设立入水点，大鼠入水后，记录潜伏期（即从入水到找到并爬上平台所需时间），每日进行训练2次持续5d。大鼠空间位置记忆能力的评估采用空间搜索试验，在水迷宫训练的第6天，撤除水平台，将大鼠在任选的入水点放入水中，测定在120s内跨过水迷宫四个象限原平台相应所在位置的次数，以正确探索次数（穿越原平台所在象限相应位置的次数）和错误次数（穿越非原平台所在其它三个象限相应位置的总次数）来评估。

2 2电生理实验在Morris迷宫实验结束后，单刺激海马Schaffer侧枝诱发CA1区场电位。强直刺激诱导海马诱发场电位LTP。动物手术、刺激参数及记录方法同文献［4］。再给予相同参数的单刺激至少在2h以上。记录并对比强直刺激前后海马CA1区场电位幅度。

2 3电极部位的鉴定记录结束后处死动物，对电极记录部位进行组织学鉴定。刺激位置和记录点正确的纳入统计学处理。

2 4统计分析数据以均数±标准误的形式表示，用spss17 0软件进行单因素方差分析，P<0 05表示差别有统计学意义，应用Excel软件作图。

3结果

3 1水迷宫实验结果

3 1 1定向航行试验在训练开始的第一天，各组潜伏期数据之间无差异（P>0 05）。自训练的第二天起，各组潜伏期均出现逐次缩短的趋势，但模型组大鼠寻找平台时间明显慢于对照组，经统计学检验，差异有统计学意义（P<0 05）；同模型组相比，TMP组潜伏期下降明显，差异具有统计学意义（P<0 05）。试验中潜伏期变化见图1。

3 1 2空间搜索试验该试验中，模型组大鼠穿越目标平台位置的平均正确探索次数为 (7 12±0 79) 次，明显少于对照组数值 (15 63±0 94)次，经检验差异有统计学意义（P<0 05）。TMP组大鼠穿越目标平台平均次数为（13 87±0 83）次，高于模型组的平均值（P<0 05）。各组不同象限穿越次数百分比（穿越该象限原平台位置的次数占总次数的百分比）如图2所示。

3 2海马细胞外电位记录在全部24只大鼠，单刺激海马Schaffer纤维均在海马CA1区诱导出潜伏期和幅度稳定的群体峰电位（population spike，PS）。在对照组观察到PS幅度在强直刺激后5min开始增大至强直刺激前PS平均值的（158 34±2 96）%，最大可增至（197 36±3 19）%，这种突触效能的增大维持2h也并未衰减，即诱导出海马CA1区LTP，强直刺激前后PS幅值的差异有统计学意义（P<0 05）。

在模型组，强直刺激后平均PS幅值为强直刺激前的（122 56±3 17）%，明显低于对照组强直刺激后平均PS增幅（182 70±2 86）%， P<0 05表明差别有统计学意义，d-半乳糖所致衰老大鼠海马CA1区的LTP受到明显抑制（见图3）。

TMP组强直刺激后平均增幅为（164 83±3 06）%，高于模型组，差异有统计学意义（P<0 05），表明TMP腹腔注射对d-半乳糖所致衰老大鼠海马CA1区LTP的抑制起到了较好的改善作用。

4讨论

学习能力减退和空间记忆障碍是AD的主要表现。包括LTP的突触可塑性变化被认为是学习、记忆功能的可能机制之一［5］，AD的学习记忆功能减退与海马突触可塑性的变化有着重要的关系［6］。在本次Morris水迷宫实验中，同对照组相比，模型组大鼠通过训练寻找平台的潜伏期下降速度迟缓，在空间搜索实验中错误率高，表明AD模型组造模成功，d-半乳糖注射后，大鼠的空间学习和记忆能力明显受损，模型组大鼠海马CA1区LTP幅度明显降低，d-半乳糖皮下注射导致大鼠学习记忆能力减退的同时还出现了大鼠海马CA1区LTP，表明AD大鼠学习记忆功能障碍与海马LTP的抑制有关。

TMP组大鼠水迷宫实验中潜伏期降低速度明显高于模型组，对原平台位置的记忆清楚，错误次数少，表明TMP腹腔注射较好的改善了d-半乳糖所致大鼠学习记忆功能的损伤。同模型组相比，TMP腹腔注射可显著提高海马PS增幅，表明TMP对衰老大鼠学习记忆功能的保护作用可通过提高海马突触可塑性来实现。TMP在中枢神经系统中具有抑制细胞凋亡、提高超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合成酶(NOS)的活性等作用［7］，并可抑制衰老时细胞内的Ca2+超载，保护神经元，这可能是TMP改善衰老大鼠海马LTP的机制。

参考文献

［1］ Dumont M，Beal MF．Neuroprotective strategies involving ROS in Alzheimer disease［J］.Free Radic Biol Med，2011, 51(7):1014-1026.

［2］ Korte M， Herrnlann U，Zhang X，et a1.The role of APP and APLP for synaptic transmission，plasticity，and network function：lessons from genetic mouse models［J］.Exp Brain Res，2011，21(7)：435-440.

［3］ 杨雪梅.川芎嗪药理作用研究进展［J］.中国生化药物杂志，2010，31(3)：215-216.

［4］ 杨坦，刘萍，丁玉琴.铅暴露对大鼠学习记忆功能和海马CA1区LTP的影响［J］.医学信息，2008，21(6)：872-876.

［5］ Martin S.J，Grimwood P.D，Morris R.G. Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis［J］. Annu Rev Neurosci .2000，35(23): 649-711.

［6］ Postina R,Schroeder A，Dewachter I,et a1.A disintegrin-metalloproteinase prevents amyloid plaque formation and hippocampal defects in an Alzheimer disease mouse model ［J］.Clin Invest，2004，13：1456-1464.