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TK对脑缺血NGF的影响研究

发布时间:2012/11/30 9:52:17   阅读:

本文作者:边颖1王金春1商艳君2作者单位:1.沈阳市第五人民医院神经内一科2.辽宁工业大学医院内科

检测指标及方法

1神经功能缺失评分

实验前先对大鼠进行训练,采用神经损伤评分[4](NSS)。术后第1天,NSS8~12分的大鼠进入本实验。术后第1、3、7天,对3组大鼠进行评分及方差分析。

2脑梗死体积测定

将大脑由额极至枕极分为5枚脑片,2mm/片,立即置于2%TTC(红四氮唑)溶液中,37℃水浴30min,4%多聚甲醛固定30min。显微图像分析系统采集每片脑切片上、下面图像,分析每片脑切片上、下面脑梗死面积。根据梯形法则计算脑梗死体积。

3免疫组化染色

梗死后3d,将大鼠用10%水合氯醛麻醉,4%多聚甲醛心内灌注后取脑,固定24h,组织脱水包埋。在梗死灶中心部位,相当于以前囟为中心,冠状面+1~-1mm,每隔100μm,连续7μm切片5张,对NGF进行免疫组化染色。一抗为兔抗NGF(1∶200),二抗为生物素化羊抗兔IgG。显色底物为DAB显色剂。

4NGF测定

将染色后的脑组织切片取梗死周围皮质,进行显微图像采集、分析(MetaMorph/DP10/BX41),记录经过处理软件包量化后的灰度值。

5统计学方法

用SPSS11.0统计软件做方差分析。数据以均数±标准差(x珋±s)表示,P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1NSS评分

3组神经功能缺损减轻。TK组第3天NSS评分与其他2组的差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2动物模型经切片、TTC(红四氮唑)染色见图1~图2。

3脑梗死体积的比较

3组均有梗死灶形成,但TK组梗死灶体积(30.54%±3.47%)较NS组、空白对照组(38.43%±5.73%,39.67%±4.98%)明显减轻(P<0.05)。

4缺血区NGF免疫组化结果

大脑中动脉闭塞后脑缺血区NGF增多,而注射TK后,NGF细胞明显增多,TK组与其他2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2及图3~图4。

讨论

有学者提出,脑组织缺血性损伤早期,如果KKS受到激活而参与一系列的生理生化反应,可以加重脑组织损伤,原因为KKS增加通透性和脑水肿[6]。Zausinger等[7]研究显示,在局灶性脑缺血前30min给予激肽B2受体拮抗剂(LF16-0687MS),可加快缺血性脑组织的功能恢复。另外,Xia等[8]提出,在脑组织缺血后8h,给予不同的治疗,结果不同:注射人TK基因可使大鼠缺血性脑梗死的体积缩小;而LF16-0687MS能加重缺血性脑梗死的再灌注损伤。得出不同的结论与TK治疗的时间有关:TK在早期可使脑水肿加重,但后期却能通过抑制细胞凋亡而起到神经保护作用。倪耀辉等[9]研究显示,在大鼠脑缺血再灌注后8h给予TK,对脑缺血有明显的治疗作用,可减轻炎性反应,同时还能降低梗死灶内的细胞凋亡;明显增加缺血区神经细胞、神经胶质细胞和血管上皮细胞的增生。因此,推断TK是通过促进血管、神经组织再生以及抑制局灶缺血区的细胞凋亡、炎性反应而发挥治疗作用[10-11]。

本研究显示,在大鼠大脑中动脉闭塞再灌注后8h注射TK,可改善大鼠的神经功能缺损,并减少大鼠脑梗死体积,使脑缺血区NGF表达增多。结果表明,在脑缺血较晚期,TK有明显的治疗效果。另外,应用TK治疗能明显增加缺血区的NGF表达,表明脑梗死时,TK有促进神经细胞再生的作用。NGF能加速神经元生长、分化及维持其功能,在脑内能保护神经元抵御很多类型的损伤。因此,得出结论,通过保护神经元、促进轴突再生而减轻中枢神经系统损伤。这为临床应用TK治疗缺血性脑梗死提供了重要的理论依据。

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