【摘要】目的建立西兰花种子中莱菔硫烷的HPLC含量测定方法。方法色谱柱：Waters公司XBridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇水(体积比30∶70)；流速：1.0mL/min；PDA检测器；检测波长：240nm；柱温:30℃。结果莱菔硫烷在14.6～292.5μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9994，平均回收率为97.32%（RSD=1.2%）。结论本法简便、准确，重复性好，可用作西兰花种子的质量控制，为不同产地不同品种的西兰花种子的收购及栽培等提供有效监控依据。

【关键词】西兰花种子；莱菔硫烷；HPLC；含量测定

Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentanalysisofsulforaphaneinbroccoliseeds.MethodsSampleswereanalyzedonaWatersXbridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)columnbyusingmethanolwater(30∶70)asthemobilephase.Theflowratewas1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwas240nm.Thecolumntemperaturewas30℃.ResultsThecalibrationcurvewaslinearovertheconcentrationof14.6～292.5μg/mlforsulforaphane(r=0.9994).Theaveragerecoveryofsulforaphanewas97.32%andRSD1.2%.ConclusionThemethodissimple,accurate,reproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofbroccoliseeds.

Keywords:broccoliseeds；sulforaphane；HPLC

西兰花又名绿花菜、青花菜等，为十字花科芸苔属甘蓝种中以绿色花球为产品的一个变种，一、二年生草本植物。20世纪50年代，西兰花就已经成为国际上最受欢迎的抗癌抗衰老的十字花科蔬菜，并被誉为“防癌新秀”［1］。

西兰花中所含的莱菔硫烷、烯丙基异硫氰酸盐、苯乙基异硫氰酸盐等异硫氰酸盐类化合物可以有效地预防肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、直肠癌、胃癌等癌症［2，3］。而其中的莱菔硫烷是目前发现的抗氧化、防癌、抗癌活性最显著的异硫氰酸盐类化合物，是一种有效的保护酶诱导物,能够防护致癌化合物引起的伤害，也因此有开发成抗癌药或保健品的价值，具有较为广阔的市场前景［4］。有关十字花科植物中莱菔硫烷的含量测定已有文献报道［5，6］，本研究对不同产地不同品种的西兰花种子中莱菔硫烷的含量进行了比较，方法简便准确，重复性好，可用作西兰花种子的质量控制，为不同产地不同品种的西兰花种子的收购及栽培等提供有效监控依据。

1仪器与试药

1.1仪器

Waters2695/2996高效液相色谱仪；Empower色谱工作站；十万分之一电子天平（Sartorius）；KQ250B型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂）；FW80密封式高速超细粉碎机（上海市国创建筑机械厂）。

1.2试剂与试药

甲醇(色谱纯，英国TEDIA公司)；三蒸水（自制）；莱菔硫烷对照品(sigma公司，含量＞98%)；实验所用样品见表1,经本院生药教研室鉴定均为西兰花种子。

表1不同品种西兰花种子样品（略）

Tab.1Sampleofdifferentkindsofbroccoliseed

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Warers公司产XbridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇水(体积比30∶70)；流速：1.0mL/min；检测波长：240nm；进样量：10μL；柱温30℃。

2.2对照品溶液的制备

精密称取莱菔硫烷对照品5.85mg，置20mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得到质量浓度为292.5μg/mL的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取不同品种的西兰花种子，粉碎成粉末，过20目筛,取粉末0.3g,精密称定，加1mL蒸馏水,超声30min后，置35℃水浴水解4h,加入10mL甲醇，超声30min后，滤过,滤渣用约8mL甲醇分3次洗涤，合并滤液并定容至20mL。再经0.45μm滤膜滤过得供试品溶液。

2.4系统适用性试验

分别吸取对照品及西兰花药材溶液各10μL，注入液相色谱仪。在此条件下，莱菔硫烷色谱峰与其相邻组分峰达到基线分离，理论塔板数以莱菔硫烷计不低于5300。见图1。

A.莱菔硫烷对照品;B.西兰花种子样品

图1HPLC色谱图（略）

Fig.1HPLCchromatogram

2.5线性关系考察

精密量取“2.3”项下储备液分别用甲醇稀释制成质量浓度为14.6、58.5、117.0、175.5、234.0和292.5μg/mL的对照品溶液，分别进样20μL，以峰面积(A)对质量浓度(ρ)进行回归分析,得回归方程:A=3743.7ρ-2878.2,r=0.9994。结果表明莱菔硫烷的质量浓度在14.6～292.5μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.6重复性试验

精密称取1号种子粉末6份,按“2.4”项下制备，依法测定莱菔硫烷的含量。结果平均含量为1.4014%,RSD为0.49%。

2.7中间精密度试验

精密吸取浓度为292.5μg/mL的对照品溶液10μL,重复进样6次,以莱菔硫烷峰面积计算，RSD=0.14%，表明中间精密度良好。

2.8稳定性试验

取重复性试验中同一浓度供试品溶液室温下放置，于0、2、4、6、8h后依法测定莱菔硫烷的含量，结果其RSD值为0.84%，表明样品溶液在8h内测定结果稳定。

2.9加样回收率试验

精密称取9份已知含量的1号种子样品0.15g,按“2.4”项下，同法制成供试品溶液。经0.45μm微孔滤膜过滤，各取续滤液0.5mL，分别置于25mL量瓶中，分别加入不同量的质量浓度为292.5μg/mL的莱菔硫烷对照品溶液0.1、0.2、0.3mL，甲醇定容至刻度。按“2.1”项下色谱条件测定莱菔硫烷的含量,结果平均回收率为97.32%,RSD为1.20%,见表2。

表2莱菔硫烷加样回收率试验（略）

Tab.2Theresultsofrecoverytest

2.10样品的含量测定

取不同品种的西兰花种子按“2.4”项下，同法制成供试品溶液，依法测定，结果见表3。

3讨论

3.1从表3可以看出,不同品种的西兰花种子中莱菔硫烷的含量有明显差别，台湾和日本进口的西兰花种子莱菔硫烷的含量明显没有我国的高，但是我国产的几种西兰花种子中莱菔硫烷的含量也有较大差别。本方法简便、准确，可作为西兰花种子的质量控制，同时为不同产地的西兰花种子的收购及栽培等提供有效依据。

表3西兰花种子中莱菔硫烷的含量（略）

Tab.3Contentsofsulforaphaneinbroccoliseeds

3.2制备供试品溶液采用的前处理过程的原理是：异硫氰酸盐以其前体芥子油苷的形式存在于西兰花种子中，完整的芥子油苷没有防癌活性，莱菔硫烷等异硫氰酸盐是由西兰花种子中的芥子油苷经过内源性黑芥子酶水解才能产生；粉碎种子过程中，随着种子细胞壁的破碎内源性黑芥子酶得以释放出来［2］。故本试验关键步骤是水解，本试验采用正交试验筛选出了最佳的水解条件；由于甲醇会使黑芥子酶灭活,故测定加样回收率时采取水解后再加入莱菔硫烷对照品的方法。

【参考文献】

［1］季宇彬，池文杰，邹翔，等.西兰花中萝卜硫素提取、分离与抗癌活性研究［J］.哈尔滨商业大学学报:自然科学版,2005,21(3):270-273.

［2］单毓娟.十字花科蔬菜的癌症预防作用［J］.国外医学卫生学分册,2005,32(5):269-273.

［3］王舒然，夏薇.莱菔硫烷与肿瘤［J］.疾病控制杂志,2004,8（5）:452-455.

［4］LAURENCEG，PENGFEIL，SOLANGEL，etal．Sulforaphane,anaturaloccurringisothiocyanate，inducescellcyclearrestandapoptosisinHT29humancoloncancercells［J］．CancerResearch,2000，60(5):1426．

［5］梁浩，袁其朋，东惠茹，等.十字花科植物种子中莱菔硫烷含量的比较［J］.中国药学杂志,2OO4,39(12):898.

［6］胡晔，梁浩，袁其明.十字花科植物种子中莱菔硫烷的薄层色谱鉴别［J］.北京化工大学学报：自然科学版，2000，6（2）：237-238.