【摘要】目的建立测定注射用甲硫氨酸维B1中甲硫氨酸和维生素B1的含量的方法。方法釆用高效液相色谱法，色谱柱：ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相：缓冲液［取庚烷磺酸钠0.25g，用磷酸钠溶液（取磷酸钠38g,加水至1000mL使溶解，用磷酸调pH值至2.1）溶解并稀释成1000mL］乙腈（体积比94∶6），流速1.0mL/min，检测波长为210nm。结果甲硫氨酸在0.60～1.40mg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9996)，维生素B1在0.06~0.14mg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9998)；平均回收率分别为：甲硫氨酸100.49%(RSD为0.62%),维生素B199.95%(RSD为0.48%）。结论本法简便、快速、灵敏、准确，重现性好，可作为注射用甲硫氨酸维B1中甲硫氨酸和维生素B1的含量测定方法。

【关键词】高效液相色谱法；注射用甲硫氨酸维生素B1；甲硫氨酸；维生素B1

注射用甲硫氨酸维B1为甲硫氨酸和维生素B1的复合制剂。本品对于急慢性肝炎、肝硬化，尤其是对脂肪肝有特别的疗效；可用于肝内胆汁郁积以及乙醇、巴比妥类、磺胺类药物中毒时的辅助治疗；并可作为治疗神经炎和心肌炎的辅助药物。目前对其注射剂及冻干粉针剂的含量测定已有文献报道［1-3］。为有效控制产品质量，本文直接采用HPLC法测定其主要成分甲硫氨酸和维生素B1的含量，方法简便，结果准确。

1仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪(SPD10Avp检测器,LC10Atvp泵)，工作站：AnaStar色谱处理系统，色谱柱：KromasilC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)。

甲硫氨酸对照品（批号为140684200401）、维生素B1对照品（批号为100390200502）由中国药品生物制品检定所提供；注射用甲硫氨酸维B1（本公司自制，批号为050318、050319、050320，规格：甲硫氨酸40mg与维生素B14mg）；乙腈为色谱纯，庚烷磺酸钠、磷酸钠、磷酸为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱:ODSC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流速:1.0mL/min；检测波长：210nm；流动相：以缓冲液［取庚烷磺酸钠0.25g，用磷酸钠溶液（取磷酸钠38g,加水至1000mL使溶解，用磷酸调pH值至2.1）溶解并稀释成1000mL］乙腈（体积比94∶6）；进样量：20μL；测定方法：外标法，积分峰面积。

2.2对照品溶液的制备精密称定甲硫氨酸对照品50mg和维生素B1对照品5mg，置同一50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备取本品细粉适量(约相当于甲硫氨酸50mg)，精密称定，置50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4干扰试验分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂20μL，注入液相色谱仪，结果空白溶剂无干扰峰，见图1。

2.5线性关系精密称定甲硫氨酸对照品约100mg和维生素B1对照品约10mg，置同一10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，分别置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液质量浓度(ρ)为横坐标，测得峰面积值(A)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：甲硫氨酸A=5.597×106ρ+2.493×105,r=0.9996;维生素B1A=1.163×107ρ+2.147×104,r=0.9998。

结果表明甲硫氨酸在0.60～1.40mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系；维生素B1在006~0.14mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.6精密度试验和稳定性试验取同一份对照品溶液，分别重复进样6次，每次进样20μL，结果甲硫氨酸和维生素B1RSD分别为0.89%和1.13%。

A.对照品;B.样品;C.空白溶剂1、维生素B12、甲硫氨酸

图1HPLC色谱图（略）

Fig.1HPLCchromatograms

取同一份对照品溶液，在室温条件下放置6h，分别在0、2、4、6h测定1次，结果甲硫氨酸和维生素B1的RSD分别为0.89%和0.94%,表明本品溶液在6h内稳定。

2.7重复性试验精密称取同一批样品6份(批号050318)，按“2.3”项下方法处理后，分别进样20μL，测定含量。结果：甲硫氨酸和维生素B1的平均含量分别为100.08%和100.92%,RSD分别为132%和1.46%。

2.8回收率试验分别取甲硫氨酸对照品和维生素B1对照品适量（约相当于甲硫氨酸80mg、100mg、120mg，维生素B18mg、10mg、12mg）各3份，精密称定，按“2.2”项下方法操作，测定，并计算回收率，结果甲硫氨酸和维生素B1平均回收率分别为100.49%和99.95%，RSD值分别为0.62%和048%。见表1和表2。

表1甲硫氨酸回收率试验结果（略）

Tab.1Resultstestofmethionine

平均回收率=100.49%,RSD=0.62%

2.9样品测定分别精密量取3个批号的供试品溶液及对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中甲硫氨酸（C5H11NO2S）和维生素B1（C12H17CIN4OS·HCl）的含量。测得3批样品的质量分数分别为：甲硫氨酸100.19%，100.38%和100.31%；维生素B110110%，101.17%和101.19%。

表2维生素B1回收率试验结果（略）

Tab.2ResultstestofvitaminB1

平均回收率=99.95%,RSD=0.48%

3讨论

3.1回收率试验供试品溶液的制备由于本制剂中未添加辅料，因此在进行回收率试验时，直接分别称取甲硫氨酸和维生素B1对照品，按照“2.2”项下方法操作即可。

3.2流动相的选择在选择检测波长210nm的情况下，曾比较乙腈25mmol/L磷酸盐缓冲液(体积比60∶40，pH3.5）作为流动相［3］，测定结果无明显差异。考虑到乙腈毒性大，而文中所用流动相乙腈缓冲液（体积比6∶94），乙腈含量明显低于对比流动相，因此选择文中所用流动相较好。

【参考文献】

［1］黄榕珍.高效液相色谱法测定甲硫氨酸维生素B1注射液中甲硫氨酸和维生素B1的含量［J］.海峡药学,2005,17(5)：42-45.

［2］纪宇，刁勇，王晨霞.高效液相色谱法测定甲硫氨酸维B1注射液的含量［J］.中国生化药物杂志，2005，26(4)：228-229.

［3］徐晖，卢懿.HPLC法测定注射用甲硫氨酸维生素B1中甲硫氨酸的含量［J］.华西药学杂志,2006,21(2)：210-211.