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心宁滴丸醇提工艺探索

心宁滴丸醇提工艺探索

作者:王立冬杨磊单位:黑龙江江世药业有限公司

第3次提取人参Rg1含量分别占3次提取总量的2.65%,说明第三次提取时,有效成分已经很少,所以采用提取次数为2次。正交试验设计选择乙醇体积分数、加醇量、提取时间作为考察因素,采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平,用L9(34)正交表进行试验,因素水平表见表1。

含量测定

1色谱条件色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18(200mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)为流动相;检测波长为203nm;流速1.0ml•min-1;柱温:30℃。

2供试品溶液的制备取心宁滴丸提取膏,精密量取(约含人参Rg0.1mg),水浴蒸至无醇味,余液加20ml水溶解,加乙醚提取3次,每次30ml,弃去乙醚液;用水饱和的正丁醇提取3次(30、30、20ml),弃去药液,回收正丁醇至干,残渣用适量甲醇使溶解,转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。

3对照品溶液的制备精密称取人参Rg1对照品约5mg,置10ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取0.5ml至25ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml溶液中含人参Rg110μg)。

4标准曲线的制备将浓度为80μg/m,40μg/m,20μg/ml,10μg/ml,5μg/m,2.5μg/m,的对照品溶液分别吸取20μl注入HPLC,以进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值A为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为Y=54612.95X-9502.12,r=0.99996(n=6)。试验表明,人参Rg1对照品在2.5~80μg/ml范围内线性关系良好。

5阴性干扰试验依照处方取除去人参、三七,按提取工艺提取醇膏,用供试品溶液制备的方法,制成阴性对照溶液,用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制,观察在与人参Rg1相同的保留时间处是否存在吸收峰,结果表明:在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与人参Rg1相同保留时间处不存在吸收峰,因此说明选定的条件测定人参Rg1无干扰,具有较强的专属性。

6精密度试验精密吸取人参Rg1对照品溶液重复进样5次,测定峰面积积分值,对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。

7重现性试验分别称取同批心宁滴丸提取膏6份,按质量标准含量测定项下方法测定含量,并计算样品的RSD值为0.55%,此含量测定方法的重现性良好。

8回收率试验采用加样回收试验,取已知含量的同一批供试品各6份,精密称定,分别精密添加一定量的人参Rg1对照品,按供试品制备所述方法测定含量(同时测定样品含量),计算回收率。6次测定的平均回收率为99.11%,RSD为0.89%。

实验结果

按照L9(34)正交设计表条件进行试验,分别测定心宁滴丸的含量,并进行多指标综合评分,评分时,以各指标的最大值为参照将各数值进行归一化,得到最佳的提取工艺80%乙醇提取两次,提取液为倍数为4倍,3倍,提取时间为2.0小时和1.5小时。

讨论

1流动相的选择分别考察乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80),乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5:25:75),甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15:85:1:0.2)不同比例的流动相,结果以乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)为流动相。

2检测波长的选择制备人参Rg1对照品稀释液照紫外-可见分光光度法(中国药典2010版一部附录ⅤA),于190~900nm波长范围内进行全波长光谱扫描,记录吸收光谱。在203nm处有最大吸收峰,故选用203nm为检测波长[4]。

3心宁滴丸因临床效果好所以被广泛应用红参、三七多采用回流提取工艺[5]。本实验结合资料和实际生产条件等因素对心宁滴丸醇提工艺进行了优化。试验发现因素水平范围内,各因素作用主次顺序为乙醇体积分数>提取时间>加醇量。

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