甲胎蛋白

前言：想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗？我们特意为您整理了5篇甲胎蛋白范文，相信会为您的写作带来帮助，发现更多的写作思路和灵感。

甲胎蛋白范文第1篇

工作后，杨先生因生活不规律、饮酒应酬等诸多因素，导致肝炎反复发作，但一直不愿抗病毒治疗。直到40岁时，才在医生的建议下，接受抗病毒治疗。服药后，杨先生的病情很快得到好转。获得满意的疗效两年后，杨先生开始不规律复查，最后只检查肝功能一项。

最近，杨先生感到肝区疼痛，查了腹部彩超，没有发现明显异常。家属不放心，带着他来找到我，看了近几年的检查单，我发现，除甲胎蛋白外，其他项目都检查过。于是，我建议杨先生查一下甲胎蛋白。结果，数值超过500ng/ml。

接下来，杨先生分e做了肝脏硬度、增强CT和MRI（磁共振）等检查，发现小肝癌。最终，联系多学科会诊，采取手术治疗，术后效果良好，继续抗病毒治疗，监测甲胎蛋白逐渐正常。

从这个病例中，我发现很多乙肝患者在所谓的“定期复查”中，只关注“转氨酶”这样的指标，忽略了肝病隐藏的“危机”。很多患者，在听到要求他们查甲胎蛋白时，会问：“甲胎蛋白是什么？监测甲胎蛋白有什么意义？”

今天，就让我们来认识一下它吧！

甲胎蛋白是一种肿瘤相关蛋白，主要存在于胎儿体内，正常情况下，成年人血液中仅有微量存在。甲胎蛋白在1956年由瑞典学者在胚胎中发现，1963年，其他学者相继发现，肝癌患者体内甲胎蛋白大量升高，不久，甲胎蛋白成为首个被认定的肿瘤生物标志物。

典型的乙肝患者，在没有治疗的情况下，其自然病程可呈现“三步曲”，即“活动性肝炎-肝硬化-肝癌”的变化过程。那么，在乙肝的疾病状态下，监测甲胎蛋白有什么意义呢？

肝炎活动期

成年急、慢性乙肝患者，炎症活动导致肝细胞坏死，肝脏在修复炎症的同时，也有新生的肝细胞出现，这些细胞具有产生甲胎蛋白的能力。所以，在肝炎活动时，甲胎蛋白可以升高。不过此时一般只是低水平的升高，这种升高有时是判断肝功能是否有恢复趋向的标志。

肝纤维化或肝硬化

研究表明，肝发生纤维化时，很多患者会出现甲胎蛋白高于20ng/ml的升高，其水平与纤维化的程度密切相关。在失代偿期的肝硬化患者，甲胎蛋白可以升高至超过1000ng/ml，其主要原因是，随着肝纤维化的加重，肝脏将营养物质转化为能量的功能降低，机体需要大量的新生肝细胞来产生能量，而这些新生的肝细胞同时也产生大量的甲胎蛋白。所以，从某种意义上说，甲胎蛋白可以警示乙肝患者是否有肝硬化的倾向。

肝癌

甲胎蛋白监测最重要的目的是早发现肝癌。甲胎蛋白是一种胚胎蛋白，在肝癌发生时，由于肝癌细胞比胎儿肝细胞具有更快的分裂能力，故可更迅速地产生大量的甲胎蛋白。在这里要注意，直径小于2厘米的“小肝癌”，由于恶性程度低，生长缓慢，产生的甲胎蛋白可能较少，常表现为持续低水平的升高；而逐渐增大的肝癌，恶性程度大，能产生大量的甲胎蛋白，可以在短时间内急剧升高。

乙肝患者中，伴有中度以上肝纤维化的肝炎或肝硬化炎症活动时，服用抗病毒药1～2个月后，随着病毒载量（HBV DNA）和转氨酶的下降，甲胎蛋白逐渐降低，这时，往往预示病情的好转，同时也提示肝癌的可能性低。如果在服用抗病毒药后，甲胎蛋白不降反升，则需进一步行肝脏增强CT或MRI检查，并定期复查，以及时排除或早期诊断肝癌，赢得最好的治疗时机。

甲胎蛋白范文第2篇

[中图分类号]R446[文献标识码]C [文章编号]1673-7210（2007）04（c）-142-01

神经管畸形是常见的胎儿先天畸形，通过产前筛查,可及早发现胎儿神经管畸形,降低畸形儿的出生。

1 材料与方法

1.1 资料来源

近2年的血清筛查记录及随访记录；超声筛查记录；畸形、可疑畸形登记及随访记录；三级监测网出生缺陷报表。

1.2 方法

1.2.1 血清筛查用时间分辨免疫荧光分析法，对孕15～20周孕妇进行血清甲胎蛋白（AFP）、游离β-绒毛膜促性腺激素的浓度进行检测, 使用风险分析软件计算神经管畸形风险率。登记所有筛查孕妇，记录筛查结果；神经管畸形高风险者另行登记。设专人负责随访。

1.2.2 超声筛查在孕20～24周进行。应用仪器LOGIQ 400 CL超声诊断仪，探头频率为4.0 MHz，检查者按照操作规程逐项检查后，作出超声诊断，并使用超声工作站存储记录，确诊畸形及可疑畸形另行登记。工作情况每月报表一次，并有专人负责随访。

1.3 流程由各区保健院妇保人员对孕15～20周孕妇在自愿的情况下，填写产前筛查申请单。筛查集中在市妇幼保健所进行，并由专职妇保专家负责咨询工作。各助产单位出生或引产的畸形儿实行报表制度。

2 结果

5 576例血清学筛查孕妇中，检出神经管畸形高风险89例,全部于孕20～24周行超声筛查，筛查出8例胎儿异常，包括脊柱裂2例，腹裂4例（其中1例于孕30周发现），脑积水并脊柱后凸1例，脑发育不全并隐形脊柱裂1例，均在引产后得到证实。其余高风险孕妇追踪出生新生儿无异常。

10 436例做超声筛查的孕妇中，筛查出各种畸形83例（包括上述8例），其中中枢神经系统缺陷26例，包括无脑畸形8例、脊柱裂8例、脑积水6例、脑膜及脑膨出3例、全前脑1例；唇裂9例；胎儿水肿及浆膜腔积液9例；先心病7例；内脏膨出及外翻6例；水囊状淋巴管瘤4例；短肢畸形3例；十二指肠梗阻3例；多囊肾3例；短肢畸形3例；残肢畸形2例；其他畸形8例。均在引产后得到证实。

3 讨论

超声检查是诊断胎儿畸形的首选方法[1]，可动态地观察胎儿的生长发育、活动，对胎儿的畸形与异常、胎盘与脐带异常、胎儿宫内发育迟缓等均可由超声作出诊断。甲胎蛋白主要在胎儿肝脏和卵黄囊中形成，孕早期即可测出母血中的AFP，孕14～20周时，AFP浓度呈线性增高，20周后逐渐下降。孕中期AFP增高与神经管缺陷的发生有明显的关系，胎儿其他缺陷也可使AFP增高，如腹裂。因此孕中期母血清AFP增高提示胎儿可能患有神经管缺陷或其他异常，妇保医生有必要对这些高风险人群作追踪观察，因为有些畸形或异常在孕晚期才表现出来。故孕中期应用母血清产前筛查结合超声检查是减少出生缺陷发生的一种有效手段之一。

被筛查为神经管畸形高风险者，往往焦虑不安，因此医生要对孕妇解释清楚，高风险不一定患病，但必须引起足够的重视。

[参考文献]

[1]胡义刚，刘茂功，周凯，等.产前超声筛查胎儿畸形-附80例分析[J]. 中国妇幼保健杂志,2005,20(24):3286～3287.

甲胎蛋白范文第3篇

【关键词】甲胎蛋白;癌胚抗原;原发性肝癌;预测诊断

Armor embryo protein and cancer embryo antigen in tumor liver cancer clinical examination application

DONG Xi-huan.The First People’s Hospital of Shangqiu,Henan 476100,China

【Abstract】 Objective To evaluate the usefulness of serum alpha-fetoprotein(AFP)and carcinoemb-ryonic antigen(CEA)carcinoma in clinical diagnosis and screening for primary hepatic carcinoma(PHC).Methods Totally 201 PHC patients,73 liver cirrhosis patients,and 54 healthy subjects were enrolled in this study.All of the sample were measured by microparticle chemiluminescent immunoassay.Results The serum AFP level was significantly higher in PHC patients than in liver cirrhosis patients and healthy subjects.The serum AFP level was increase in liver cirrhosis patients too.The serum AFP level was extremely increased in PHC patients,it could be up to 6027 μg/L,and it also increased in liver cirrhosis patients,it could be up to 1880 μg/L.Sensitivity and specificity ofAFP at 20 μg/L cut-off was 73.13%and 38.36%.Sensitivity and specificity ofAFP at 400 μg/L cut-off was only 44.28%and 80.43%.The serum CEA level was(13.4±32.6)μg/L,which was significantly higher than the other two group(P

【Key words】AFP;CEA;PHC;Predictive diagnostics

中国是世界第一肝癌大国,每年的新发病例有20万。据2008年CSCO学术年会统计,原发性与继发性肝癌为世界第三大癌症,而在中国肝癌仅次于肺癌,为中国第二大癌症[1]。甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)是目前临床惟一广泛使用的原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,PHC)诊断血清标记物,临床上使用AFP用于肝癌高危人群的普查和筛查可使部分患者的术后生存期和预后有了显著的提高。癌胚抗原(carcino-embry-onic antigen related cellular adhesi on molecule 1,CEA)是一种细胞表面跨膜糖蛋白,也是癌胚抗原家族的一个成员,属于免疫球蛋白超家族黏附分子[2]。研究表明,结肠癌、胃癌、胰腺癌、子宫癌等患者血清CEA均呈现不同程度的升高[3,4]虽然在临床上对CEA应用的研究不多,但是其潜在优势值得广泛的关注。本研究对比AFP和CEA的检测结果,对不同人群在临床上对癌肿与其他肝脏疾病的鉴别诊断进行分析,探讨其对各类肝病的鉴别诊断价值。探讨CEA与原发性肝癌之间的关系,并通过所得数据推导出用CEA进行癌症初期诊断的阈值。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2005年2月至2007年1月共24个月本院住院及门诊的收治的PHC患者共201例,其中男178例(88.31%)、女23例(11.72%);年龄24~78岁,平均47.68岁。患者均符合2001-09中国抗癌协会肝癌专业委员会广州会议制定的标准[5]。本院消化科收治的肝硬化患者73例,其中男57例(78.08%)、女16例(21.92%);年龄29~80,平均52.25岁。本院体检健康人员54例,其中男41例(74.93%)、女13例(25.07%);年龄25~65岁,平均48.67岁。共分为3组,即:PHC组(n=201),肝硬化组(n=73),对照组(n=54)。

1.2 仪器及方法 仪器:雅培 AX-SY M化学发光免疫分析仪。

1.2.1 试剂盒 AFP试剂盒由美国雅培公司提供。CEA试剂盒由美国贝克曼公司提供。

1.2.2 方法 所有受试者均于清晨空腹静脉采血2~3 ml,迅速分离血清,置-20℃贮存备测,测定前取出标本,复融后检测血清AFP及CEA浓度。操作按使用说明书进行。

1.2.3 分析PHC患者,肝硬化患者及健康体检者血清AFP及CEA的浓度,分析不同阈值下AFP和PHC肝硬化人群中的诊断灵敏度和特异度。

1.2.4 统计学方法 使用SAS9.0软件进行数据分析,P

2 结果

2.1 不同人群AFP水平 PHC患者血清AFP分布范围为20~6027 μg/L;肝硬化患者血清的AFP分布范围为5~1880 μg/L;健康人员血清的AFP分布范围为0~3787 μg/L。CEA水平 PHC患者检测结果比较见表1。

由表1可以看出,PHC患者的血清APF值与肝硬化组及对照组均有显著性差异,(P

由表2可以看出,以20 μg/L为阈值的条件下,其诊断预测灵敏度较高(73.13%)而特异性较差(38.36%);以400 μg/L为阈值的条件下,其特异性较高(80.43%)而诊断预测灵敏度较差(44.28%)。根据本研究的数据可以看出,在两个阈值的范围内,阳性的预测诊断率均很高。但是对于阴性预测的准确率却低于20%。

3 讨论

肝脏是人体最大的代谢功能器官,在人体正常的情况下,能起到代谢,免疫等重要的功能,但是当肝脏受到体内外的致病因子侵犯时,其结构与功能会受到不同程度的损害,从而产生各种肝病。

按病变性质肝脏疾病可分为以下4类:①肝细胞性损害(如病毒性肝炎);②肝细胞外基质过度增殖和沉积(如肝硬化);③胆汁瘀滞、胆管梗阻(如梗阻性黄疸);④肝内占位性病变(癌肿)。血清胆红素、蛋白类及酶类等常规肝功能试验能较好地反应肝细胞的分泌、代谢、合成和损伤功能[6,7],其中肝癌是各种肝病中病死率较高的。

通过本研究可以发现,PHC患者的血清AFP水平要显著高于肝硬化患者和健康体检者,而肝硬化患者血清AFP水平有显著高于健康体检者。因此在临床诊断中,AFP水平升高对于PHC及肝硬化等肝病的诊断有着及其重要的价值,当遇到血清AFP升高的患者时,应通过经验的阈值,判断患者是PHC还是肝硬化。对患者血清的AFP水平进行动态的观察,临床显示慢性肝炎肝硬化患者血清AFP水平的升高多为一过性升高或呈反复波动性,而HCC患者血清AFP升高多为稳定持续性升高[8]。

AFP作为临床上常用的肝癌肿瘤标志物,常遇到相关阈值设定的问题,学术界对于阈值的设定仍存有争议。临床上常设定的阈值为20 μg/L及400 μg/L[8]。当阈值设定为20 μg/L时,灵敏度高,而特异性,当阈值设定为400 μg/L时,特异性高,而灵敏度也相应的降低,通过本研究可以发现,通过对于血清AFP的测定,可以很准确的判断PHC的发病情况。在临床上应用时,大部分的诊断都是以20 μg/L为阈值,通过对高危人群的预测诊断,再通过医学影像学对高于阈值的人群进行确诊。可以达到良好的效果。

在AFP的广泛应用的同时,医疗界也希望通过新的手段来加强对于PHC的初期预测诊断。临床上常用的手段还有α-L-岩藻糖苷酶(AFU),铁蛋白(SF)及鸟氨酸氨甲酰基转移酶/丙氨酸氨基转移酶(OCT/ALT)比值等手段来进行PHC的初期诊断,都取得了阶段性的效果,本院选用癌胚抗原(CEA)做为前期诊断,也得了一些诊断方面的经验。CEA虽然没有AFP特异性强,敏感度高,但是作为一种抗原分子,其分布的广泛性,表达的特异性,在癌症的初期诊断中,有着重要的地位。虽然对于其判断阈值学术界还没有一个广泛认同的共识,但是其潜在的优势不容小觑。尤其是与AFP的联合检测,两者可以互补彼此的优势与劣势。AFP的特异性与CEA的广泛性可以加强癌症初期诊断的准确度。降低漏诊率临床上,对于癌症初期预测诊断虽然有了长足的进步,但是现在还仅仅针对几种特意性的癌症有着几种特异性的肿瘤标志物。[9]

参考文献

[1] 曹志成.第十届中国临床肿瘤学会学术年会纪要.中西医结合学报,2008,3,6(3):324-330.

[2] Nikia A.Laurie,Meghan egys,Marie P,et al.Carcinoembryonic Antigen-Related Cell Adhesion Molecule 1a-4L Suppression of Rat Hepatocellular Carcinomas.Cancer Res,2005,65(23):11010-11017.

[3] Castaldi F, Marino M, Beneduce L.,et al.Detection of circulating CEA-IgM complexes in early stage colorectal cancer.Int J Biol Markers,2005,20(4):204-208.

[4] Sorbye H,Dahl O.Carcinoembryonic Antigen Surge in Metastatic Colorectal Cancer Patients Responding to Oxaliplatin Combination Chemotherapy:Implications for Tumor Marker Monitoring and Guidelines.J Clin Oncol,2003,21(23):4466-4467.

[5] 中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准.中华肝脏病杂志,2001,9(6):3241.

[6] Yang L,Parkin DM,Ferlay J,et al.Estimates of Cancer Incidence in China for 2000 and Projections for 2005.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2005,14(1):2432-2501.

[7] D.Max Parkin,MD,Freddie Bray J,et al.Global Cancer Statistics,20021 CA Cancer J Clin,2005,55(2):74-108.

甲胎蛋白范文第4篇

关键词：重型肝炎；前白蛋白；甲胎蛋白；临床预后

Abstract：Objective To study the serum prealbumin（PAB）and methyl fetoprotein（AFP）level and the relationship between clinical outcomes for patients with severe hepatitis.Methods The 52 patients with severe hepatitis were collected as hepatitis group and 30 cases of healthy physical examination for the same period as the control group.Hepatitis group divided into survival group and death group according to the clinical parison between groups of PAB and AFP level.Results The PAB hepatitis group and AFP levels were significantly lower than the control group，and group was significantly lower than survival of death（P

Key words：Fulminant hepatitis；Prealbumin；AFP；Clinical outcomes

重型肝炎是指在各种致病因子的作用下，肝细胞在短期内大量坏死所致肝功能衰竭的一类综合征，患者的病情进展迅速，死亡率较高[1]。本研究分析了血清前白蛋白（PAB）及甲胎蛋白（AFP）水平与重型肝炎患者临床预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2013年1月～2014年1月，我院收治的重型肝炎患者52例作为肝炎组，其中，男29例，女23例，年龄28～80岁，平均为（45.9±6.3）岁。同期健康体检者30例作为对照组，其中，男17例，女13例，年龄30～78岁，平均为（46.8±6.5）岁。两组年龄与性别构成无明显差异（P>0.05）。

1.2方法 重型肝炎患者均在入院后次日清晨采集空腹静脉血4ml，对照组在体检当日采血4ml，均不予以抗凝处理。采用散射比浊法测定PAB含量，采用放射免疫法检测AFP含量。其中，酶联免疫检测仪由美国威士达公司提供，试剂盒由广东英科新创公司提供；全自动生化分析仪选自日本日立公司，操作均严格按照说明书执行。

1.3观察指标 观察对照组与重型肝炎组的PAB及AFP水平，并统计肝炎组中死亡组与存活组的PAB及AFP水平，统计不同PAB及AFP水平重型肝炎患者的死亡率与存活率。

1.4统计学分析 数据以统计学软件SPSS18.0分析，以（x±s）表示计量资料，经t检验；以率（%）表示计数资料，经χ2检验，P

2 结果

2.1各组PAB及AFP水平比较 肝炎组的PAB及AFP水平均显著低于对照组，且死亡组显著低于存活组（P

2.2不同AFP重型肝炎患者的临床转归 随着AFP水平的升高，病死率呈显著降低趋势（P

2.3不同PAB重型肝炎患者的临床转归 随着PAB水平的升高，病死率呈显著降低趋势（P

3 讨论

AFP是一种胎儿早期经肝脏合成的糖蛋白，其在新生儿时期的合成可快速受到抑制，而胚胎组织病变或者肝细胞损害时可出现异常变化。肝细胞癌变以及非癌性肝病是造成成人血清AFP水平异常的主要原因[2]。因此，检测血清AFP水平能够评估混着的肝脏修复能力以及损伤程度。本研究结果显示，重型肝炎患者的AFP水平较健康对照组显著降低，且死亡组明显低于存活组。认为AFP含量越高，患者的肝脏自我修复能力越好，临床预后越好。

PAB是由肝脏合成的蛋白质，其在血清中的半衰期较短，当肝脏发生病变时，其能够敏感性、特异性地发生变化，故可作为肝脏功能评价的敏感指标[3]。既往研究表明，PAB水平越高，肝脏修复功能越好，反之越差[4]。本研究结果显示，重型肝炎组的PAB水平显著低于对照组，且死亡组较存活组显著降低，证实了上述观点。

综上所述，血清AFP及PAB含量与重型肝炎患者的临床预后呈负相关性，可作为评价重型肝炎临床预后的重要指标。

参考文献：

[1]方美丽.血清前白蛋白及甲胎蛋白水平在预测重型肝炎患者转归中的价值[J].临床和实验医学杂志，2012，11（18）：1509-1510.

[2]杨文秀.血清PAB、AFP与重型肝炎患者预后的关系[J].吉林医学，2012，33（24）：5188.

甲胎蛋白范文第5篇

【摘要】 目的： 建立检测甲胎蛋白化学发光免疫定量分析方法. 方法： 采用双抗体异位点一步夹心法，以甲胎蛋白单克隆抗体作为固相包被，采用改良过碘酸钠法进行甲胎蛋白多克隆抗体与碱性磷酸酶偶联制备酶标抗体；以金刚烷胺衍生物CSPD作为底物，优化CSPD与SapphireII发光体系；用国家标准品校定定量标准品，建立了人血清AFP的化学发光免疫定量分析法. 用该法检测800份正常人血清，确定正常值参考范围，将临床血清标本100份与bayer Acs: 180全自动发光体系统进行比较. 结果： 本方法的最低检出量为2.0 ng /mL，线性范围2.0~600.0 ng/mL，批内和批间的变异率分别为6.7%和7.7%，回收率在98.2%~102.5%之间. 与CEA(3 μg/mL)的交叉≤0.15%；与铁蛋白(10 μg /mL) ≤0.04%；与人血清白蛋白（200 g/L）≤2.5×10-8，与人血清丙球蛋白（100 g/L）≤2.0×10-8，与bayer Acs:180比较相关系数r=0.994（P

【关键词】 甲胎蛋白类；化学发光测定法；定量分析

【Abstract】 AIM: To establish a method of chemiluminescent immunoassay for determination of alpha fetoprotein(AFP) in human serum. METHODS: The twosite enzyme immunoassay is based on the direct sandwich technique. A monoclonal antibody was bonded to the microplate for coating and the conjugation of alkaline phosphatase to another polyclonal antibody was performed by NaIO4 method. Chemiluminescent immunoassay was established by optimizing CSPD and SapphireII luminescent system. Sensitivity， linear scope， precision， interference and recovery for the method were evaluated. The reference range was defined by testing 800 serum samples from healthy subjects.The comparison for 100 serum samples from patients was assayed by the bayer Acs:180 Automated Immunoassay system. RESULTS: The detectable minimum was 2.0 ng/mL. The linear scope was from 2.0 to 600.0 ng/mL. Average inter and intraassay were 7.7% and 6.7%， respectively. The recoveries ranged from 98.2% to 102.5%. The crossreacting rate for CEA(3 μg/mL)， Ferritin(10 μg /ml)， HAS(200 g/L)， IgG(100 g/L) were≤0.15%， 0.04%， 2.5×10-8 and 2.0×10-8， respectively. Compared with bayer Acs:180 Automated immunoassay system， the relative coefficient was 0.994（P

【Keywords】 alphafetoproteins; chemiluminescent measurements; quanti tative analysis

0引言

甲胎蛋白（AFP）为最常用的肿瘤标志物之一. 是目前最好的可实际用于早期诊断原发性肝癌的指标，可在症状出现前6~12 mo作出诊断. 其他一些转移性肝癌及肝外肿瘤如肿瘤， 卵巢肿瘤，胃癌，胰腺癌，结肠癌，支气管癌，肾癌，乳腺癌和白血病等血液中的AFP也可增高. AFP属糖蛋白，分子量70000，含糖40 g/L，正常人血清AFP含量在2~8 μg/L之间，AFP正常值一般低于25 μg/L;本文根据化学发光免疫分析法的原理建立并研制了甲胎蛋白化学发光定量测定试剂盒，现将结果报道如下.

1材料和方法

1.1材料

抗AFP单抗腹水购自OEM公司；AFP多克隆抗体为自制；AFP纯品抗原购自Fitzgeral公司；碱性磷酸酶（ALP）由华美生物工程公司提供；化学发光底物CSPD及增强剂购自PE公司；过碘酸钠（NaIO4）、硼氢化钠（NaBH4）、乙二醇、2，4二硝基氟苯（DNFB）均购自Sigma；Sephadex G200凝胶柱层析购自LKB公司，DE52离子交换柱购自Sigma，聚苯乙烯塑料白色不透明微孔板购自深圳金灿华；luminescent化学发光仪（芬兰雷勃）；洗板机（BioRad）；AFP国家标准品购自中国药品生物制品检定所. 标本均为血清，清亮无溶血，-20℃冻存. 分别为健康体检门诊的成年男性200份，成年女性（非妊娠女性）200份，青少年200份，老年人标本200份，其中男女比例为1∶1；临床标本100份是陕西省人民医院放免科采集的肿瘤或疑似患者血清.

1.2方法

1.2.1AFP单克隆抗体的纯化抗AFP单抗腹水用500 g/L的饱和硫酸铵沉淀，再溶解透析后DE52换柱纯化，分部收集，测定蛋白浓度. 蛋白浓度应在4~10 g/L之间，无菌过滤，加1 g/L NaN3后分装. -20℃存放.

1.2.2AFP多抗血清制备与纯化纯品AFP免疫健康雄性山羊，首次剂量0.5 mg/只. 4 wk后加强免疫，剂量减半，共加强免疫3次. 耳静脉采血测定效价，双扩散效价>1∶128的羊，进行心脏采血，分离血清，羊抗AFP血清按照1.3.1方法进行纯化.

1.2.3碱性磷酸酶标记抗体的制备采用改良过碘酸钠乙二醇法进行标记［1］，将获得的IgGALP用含100 g/L小牛血清的0.05 mol/L (pH 7.6)TBS缓冲液按1∶1000稀释成工作液，保存于-20℃.

1.2.4AFP校准品制备用系列国家标准品标定AFP纯品抗原后，用AFP校准品稀释液稀释成含量分别为0， 10， 25， 50， 15， 600 ng/mL系列浓度，用国家标准品做定量曲线进行校准品浓度测定、相关性分析，建立定量标准品.

1.2.5化学发光系统的优化［2-3］由SapphireII不同浓度的增强剂和CSPD组成底物工作液，进行化学发光值（RLU）测定，进行底物工作液的优化.

1.2.6固相化抗体微孔板的制备［4］将抗AFP单抗用0.05 mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)稀释成1.0， 2.0， 5.0， 7.0， 10.0， 15.0 μg/mL的包被浓度，按100 μL/孔的量加入包被板中，37℃包被2 h，再用含10 g/L酪蛋白的0.01 mol/L PBS (pH 7.4)37℃封闭2 h后晾干备用，确定包被选择最佳包被抗体工作浓度.

1.2.7正常人参考血清的确定用优化好的AFP化学发光定量试剂对800份健康人标本进行浓度测定，进行统计学分析，计算x+2 S，确定正常血清参考范围.

1.2.8化学发光免疫检测样品或标准品于相应孔分别加25 μL后，每孔再各加抗AFPALP75 μL，在震荡器上混匀1 min，置37℃恒温反应60 min. 洗掉游离成分，加入底物工作液50 μL，ALP催化底物脱磷酸酯，并发出463 nm的可见光，第10 min后测定各加样品孔的发光值RLU，并将数据用化学发光检测仪定量软件Luminoskan Ascent version 2.4.1软件进行定量分析.

2结果

2.1底物工作液的优化CSPD浓度为0.8， 0.4， 0.2， 0.1 mmol/L，SapphireII浓度为2.0， 1.0， 0.5， 0.25 g/L，分别用碱性磷酸酶1∶1000， 1∶10000在5， 10 min进行化学发光测定，记录不同增强剂和CSPD浓度的发光值，分别做出CSPD浓度RLU的曲线和SapphireIIRLU的曲线（图1）.

分析上述数据可得出以下结论CSPD在0.4 mmol/L以下时，RLU随CSPD浓度的变化而成比例变化，在0.4 mmol/L时达到平台，可能是底物浓度在0.4 mmol/L时使酶达到饱和. 增强剂SapphireII浓度对RLU的变化较复杂，在0.5~1 g/L时达到最大RLU，以后随着增强剂浓度的增加RLU反而下降. 确定底物工作液配制的浓度为：0.4 mmol/L的CSPD，增强剂SapphireII浓度为1.0 g/L.

2.2包被抗体浓度和酶标记抗体浓度的确定根据不同包被抗体浓度测定定量标准品的发光值，分别做出不同浓度包被抗体RLU的曲线（图2）. 包被浓度低时试剂的整体发光值也低，随着包被浓度的升高发光值也相应升高，在5.0 μg/mL时，发光值达到一个平台期（此时灵敏度达到一个平台期），选择标准曲线接近于直线时的包被浓度（5 μg/mL）为最佳.

2.3最低检出量平行测定20孔零值校准品血清，计算零值校准品RLU平均值（x）及标准差(S)，以x+2 S为测定值代入标准曲线方程中，求出其对应的浓度值，所对应的浓度值即为最低检出量为2.0 ng/mL.

2.4特异性检测分别测定与CEA(3 μg /mL)、铁蛋白(10 μg /mL)、人血清蛋白(200 g/L)、人丙种球蛋白(200 g/L)的交叉反应率，分别为≤0.15%， ≤0.04%， ≤2.5×10-8， ≤1.03×10-8.

2.5精密度测定AFP浓度为48.8~73.2 ng/mL的质控血清，重复检测3次，每次重复20孔，进行精密度测定，计算批内、批间平均变异系数分别为6.7%， 7.7%.

2.6正常人参考血清的确定对800份健康人血清检测进行统计，其中有95.4%的小于8.0 ng/mL，正常浓度只有上限而无下限，上限浓度去除5%的不可信区间，同时参考放免检测结果和目前公认的正常值范围，本检测方法的正常人血清应小于25 ng/mL.

2.7准确度取3份临床样本分别加入5 ng/mL， 20 ng/mL， 50 ng/mL浓度的血清样品测试样品的加入回收率，对3份临床样本分别进行90%， 60%， 30%稀释计算稀释回收率，结果显示：加入平均回收率为98.6%，平均稀释回收率为102.3%.

2.8与进口试剂的比较［5］与bayer ACS: 180 全自动化学发光系统的AFP试剂共同对100份临床标本进行检测，二者所得的数值进行分析，其相关性有统计学意义（图3），LumiassayTM=1.2715×ACS: 180 -0.4126（n=100），（r=0.994， P

3讨论

甲胎蛋白（AFP）为最常用的肿瘤标志物之一，其定量检测的方法主要有放射免疫法、酶联免疫法、时间分辨荧光免疫法和化学发光免疫法，各具特点.

本研究建立的甲胎蛋白(AFP)化学发光免疫定量分析方法［6］，采用自行设计AFP多抗血清制备和纯化工艺，采用改良过碘酸钠乙二醇法对AFP多抗进行ALP标记，较传统的戊二醛交联法标记效率要高，灵敏度、特异性都较好；采用金刚烷衍生物及其增强剂作为发光底物系统［7］， 其酶解速度快，达到最大光信号时间短，且发光信号强、持续时间长，信噪比高，通过优化增强剂的浓度能使发光强度增强100~100 000倍；可测定浓度线性范围宽，样品无需稀释即可检测. 由于化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响，有很高的灵敏度，该方法最低检出量为2.0 ng/mL. 该方法克服了传统的放射免疫法带来的环境污染和健康危害；操作简单，检测自动化程度高，适用于全自动和半自动仪器.

本研究建立的方法敏感性、特异性、线性范围、精密度、回收率均能满足常规临床检测要求，其采用的是开放式反应系统，因此可与大多数的化学发光检测仪器配套使用，在临床推广应用.

【参考文献】

［1］巴德年. 当代免疫学技术与应用［M］. 北京： 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998:927-948.

［2］尹东光，贺佑丰，刘一兵，等. 几种主要化学发光物质的发光性能及其化学发光免疫分析体系［J］.标记免疫分析与临床，2002，9(4):225-229.

［3］贺艳峰，张家明，郭小英，等. 化学发光法检测肿瘤标志物［J］.化学通报，2005，68:135-146.

［4］Lin J， Yan F， Ju H. Noncompetitive enzyme immunoassay for alphafetoprotein using flow injection chemiluminescence［J］. Appl Biochem Biotechnol， 2004，117(2):93-102.

［5］Josefina MB， Neus GR. Evaluation of Ciba Corning ACS: 180TM Automated Immunoassay System［J］.Clin Chem，1994，40(3):407-410.

［6］Lin J， Yan F， Hu X， et al. Chemiluminescent immunosensor for CA199 based on antigen immobilization on a crosslinked chitosan membrane［J］.Immunol Method， 2004，291(12):165-174.